王俊利 韋葉生 唐毓金 韋貴將 胡仁統(tǒng) 覃海媚 陳啟威

(暨南大學附屬第一醫(yī)院臨床檢驗中心，廣東 廣州 510630)

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白細胞介素-8基因-781 C/T多態(tài)性與肝癌及鼻咽癌發(fā)病風險的相關(guān)性

王俊利 韋葉生 唐毓金1韋貴將1胡仁統(tǒng)1覃海媚1陳啟威1

(暨南大學附屬第一醫(yī)院臨床檢驗中心，廣東 廣州 510630)

目的 探討腫瘤細胞侵襲相關(guān)因子白細胞介素(IL)-8遺傳多態(tài)性和廣西壯族人群肝癌與鼻咽癌易感性的關(guān)系。方法 收集廣西壯族肝癌患者260例與鼻咽癌患者251例，同時選取廣西壯族健康人群270例為對照。利用單堿基延伸PCR技術(shù)和DNA測序法，檢測廣西壯族肝癌患者、鼻咽癌患者和健康對照者的IL-8基因-781 C/T位點單核苷酸多態(tài)性，再用χ2檢驗比較基因型和等位基因型分布頻率在病例組和對照組之間的差異。結(jié)果 IL-8基因位點-781 C/T在肝癌組和對照組之間的基因型和等位基因頻率分布無統(tǒng)計學差異(CT/CC：OR=1.14，95%CI=0.79～1.64，χ2=0.509，P=0.476；TT/CC：OR=0.61，95%CI=0.34～1.10，χ2=2.775，P=0.096；T/C：OR=0.89，95%CI=0.69～1.15，χ2=0.778，P=0.363)。同時，IL-8基因位點-781 C/T在鼻咽癌組和對照組之間的基因型和等位基因頻率分布也無統(tǒng)計學差異(CT/CC：OR=1.29，95%CI=0.86～1.88，χ2=1.765，P=0.184；TT/CC：OR=1.34，95%CI=0.79～2.27，χ2=1.172，P=0.279；T/C：OR=1.18，95%CI=0.92～1.52，χ2=1.749，P=0.186)。結(jié)論 在廣西壯族人群中，IL-8基因-781 C/T位點的遺傳多態(tài)性可能和肝癌與鼻咽癌的易感性無關(guān)。

單核苷酸多態(tài)性；白細胞介素-8；肝癌；鼻咽癌

遺傳因素可能在肝癌和鼻咽癌發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用〔1～3〕。白細胞介素(IL)-8是由B淋巴母細胞、巨噬細胞和樹突細胞應答抗原刺激產(chǎn)生的腫瘤侵襲相關(guān)因子，在腫瘤細胞遷移、侵襲和血管生成等過程中發(fā)揮重要作用。肝癌等腫瘤組織和患者血漿中都伴有IL-8水平高表達，且IL-8的高表達和腫瘤轉(zhuǎn)移程度與預后呈正相關(guān)〔4,5〕。IL-8基因多態(tài)性也與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，并且逐漸成為研究的熱點。但是，在廣西壯族人群中IL-8基因和肝癌與鼻咽癌這兩種區(qū)內(nèi)高發(fā)腫瘤的關(guān)系卻鮮有研究。為了研究在廣西壯族人群中IL-8基因和肝癌與鼻咽癌的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 對象 肝癌組為2010年3月1日至2014年12月31日來我院就診的260例肝癌患者，男136例，女124例；年齡32～85〔平均(53±11)〕歲。同期我院收治的251例鼻咽癌患者為鼻咽癌組，男161例，女90例；年齡29～89〔平均(50±14)〕歲。納入標準：所有患者病理診斷為肝癌或鼻咽癌；三代世居廣西的壯族人群；未曾接受過放療和化療。選取2012年1月1日至2012年12月31日我院無惡性腫瘤史、三代世居廣西的壯族人群270例健康體檢者，男176名，女94名；年齡29～90〔平均(52 ± 15)〕歲。本研究經(jīng)我院倫理委員會同意，所有患者知情同意。

1.2 提取基因組DNA 抽取2 ml靜脈血，用碘化鈉法提取細胞基因組DNA。

1.3 聚合酶鏈反應 設(shè)計IL-8基因位點-781 C/T的PCR上游、下游引物及延伸引物，由上海英俊有限公司合成。-781 C/T的上游引物：5'-CTCTAACTCTTTATATAGGAATT-3'，下游引物：5'-GATTGATTTTATCAACAGGCA-3'。PCR反應體系包括2.0 μl 0.3 mmol/L dNTPs，2.0 μl 10×PCR反應緩沖液，1.0 μl上游引物，1.0 μl下游引物；1.0 U HotStar Taq DNA聚合酶及1.0 μl基因組DNA，用雙蒸水補到20 μl。PCR的反應條件為94℃ 15 min，94℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 20 s，共進行35個循環(huán)；72℃ 10 min。PCR 產(chǎn)物于4℃保存。

1.4 單堿基延伸反應和電泳測序 使用蝦堿酶及外切酶Ⅰ純化PCR產(chǎn)物，用SNaPshot Multiplex kit(ABI公司)行延伸反應。用蝦堿酶純化延伸產(chǎn)物，之后在ABI 3130XL上樣，用Gene Mapper 4.0分析電泳結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計學方法 應用SPSS17.0及SHEsis軟件。計量資料比較行t檢驗，群體代表性用Hardy-Weinberg遺傳平衡檢測，計數(shù)資料用χ2檢驗?；蛐?、等位基因型分布頻率與鼻咽癌發(fā)生的關(guān)系用二分類非條件Logistic回歸進行分析，用OR及95%置信區(qū)間(CI)代表相對風險度。

2 結(jié) 果

2.1 IL-8基因多態(tài)性檢測結(jié)果 IL-8基因PCR擴增產(chǎn)物為203 bp。ABI 3130XL的單核苷酸多態(tài)性(SNP)分型結(jié)果表明，-781 C/T位點的基因型包括CC、CT和TT三種。

2.2 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢測 經(jīng)過χ2檢驗，IL-8基因位點-781 C/T的基因型和等位基因型頻率在對照組和肝癌組與鼻咽癌組分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)，所選取的樣本具有代表性和可比性。

2.3 IL-8基因-781 C/T位點多態(tài)性和肝癌易感性的關(guān)系 IL-8基因-781 C/T位點3種基因型CC、CT、TT在肝癌組中分布頻率為39.6%(103例)、51.9%(135例)、8.5%(22例)，在對照組分別為40.0%(108例)、45.9%(124例)、14.1%(38例)；等位基因C在肝癌組和對照組中頻率分別為65.6%(341例)、63.0%(340例)，等位基因T在肝癌組和對照組中頻率分別為34.4%(179例)、37.0%(200例)。若以IL-8基因-781 C/T位點CC基因型的OR值為1，那么CT和TT基因型均不增加肝癌易感性(CT/CC：OR=1.14，95%CI=0.79～1.64，χ2=0.509，P=0.476；TT/CC：OR=0.61，95%CI=0.34～1.10，χ2=2.775，P=0.096)；等位基因型T相比于等位基因型C,亦不增加肝癌易感性(T/C：OR=0.89，95%CI=0.69～1.15，χ2=0.778，P=0.363)。

2.4 IL-8基因-781 C/T位點多態(tài)性和鼻咽癌易感性的關(guān)系 IL-8基因-781 C/T位點3種基因型CC、CT、TT在鼻咽癌組中分布頻率為33.9%(85例)、50.2%(126例)、15.9%(40例)，等位基因C和T在鼻咽癌組中頻率分別為59.0%(296例)、41.0%(206例)。若以IL-8基因-781 C/T位點CC基因型的OR=1，CT及TT基因型均不增加鼻咽癌易感性(CT/CC：OR=1.29，95%CI=0.86～1.88，χ2=1.765，P=0.184；TT/CC：OR=1.34，95%CI=0.79～2.27，χ2=1.172，P=0.279)；等位基因型T相比于等位基因型C,亦不增加鼻咽癌易感性(T/C：OR=1.18，95%CI=0.92～1.52，χ2=1.749，P=0.186)。

3 討 論

IL-8是由B淋巴母細胞、巨噬細胞和樹突細胞應答抗原刺激所產(chǎn)生的一種腫瘤細胞侵襲相關(guān)因子，在腫瘤細胞遷移、侵襲和血管生成等過程中發(fā)揮重要作用，因而在腫瘤研究中具有重要的價值〔6，7〕。多年研究成果表明，肝癌等腫瘤組織和患者血漿中都伴有IL-8水平高表達，且IL-8的高表達和腫瘤轉(zhuǎn)移程度與預后呈正相關(guān)〔4，5〕。

IL-8基因位于人染色體4q13-q21區(qū)域，由1個啟動子、3個內(nèi)含子和4個外顯子構(gòu)成。IL-8基因內(nèi)含子區(qū)-781 C/T發(fā)生突變，可引發(fā)基因剪接信號的改變，從而影響IL-8 的功能，進一步影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，因此IL-8基因-781 C/T位點多態(tài)性可能會與腫瘤的易感性有一定關(guān)系。目前有一些文獻已經(jīng)報道了IL-8基因-781 C/T位點多態(tài)性與神經(jīng)膠質(zhì)瘤、骨肉瘤和肝癌等腫瘤的易感性的關(guān)系〔8～10〕。但是，IL-8基因多態(tài)性與廣西壯族人群肝癌和鼻咽癌易感性的關(guān)系尚未定論。來自中國西安的Liu等〔8〕應用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性方法分別檢測300例中國陜西人群神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者和300例健康對照者的IL-8基因-781 C/T位點多態(tài)性，結(jié)果提示IL-8基因-781 C/T位點多態(tài)性與神經(jīng)膠質(zhì)瘤的易感性無關(guān)。而在一個關(guān)于IL-8基因-781 C/T位點多態(tài)性與骨肉瘤易感性的研究中，來自天津的Chen等的研究團隊的研究結(jié)果也提示了IL-8基因-781 C/T位點多態(tài)性與骨肉瘤易感性無關(guān)〔7〕。本項研究結(jié)果結(jié)合這兩項研究結(jié)果，可以謹慎推測IL-8基因-781 C/T位點多態(tài)性可能與中國人群罹患肝癌、鼻咽癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和骨肉瘤的風險無關(guān)。但是和本次研究結(jié)果有差異的是，來自中國臺灣的Chien等〔10〕通過檢測131例肝癌患者和340例對照者IL-8基因-781 C/T位點多態(tài)性發(fā)現(xiàn)，IL-8基因-781 C/T位點TT基因型相比于CC基因型顯著降低人群罹患肝癌的風險性。分析上述結(jié)果不一致的原因可能為：(1)不同地區(qū)人群遺傳異質(zhì)性，(2)研究樣本數(shù)量不足導致統(tǒng)計偏差。

綜上所述，肝癌和鼻咽癌是由多種多基因多位點突變、環(huán)境刺激以及它們之間的相互作用引起的一種復雜疾病，其中遺傳因素在它們發(fā)病過程中可能起著重要作用。在廣西壯族人群中，IL-8基因-781 C/T位點遺傳多態(tài)性和肝癌與鼻咽癌的易感性無關(guān)。鑒于本研究收集的樣本數(shù)目較少，也僅選擇了IL-8 基因的1個多態(tài)位點，所以只能視其為一個初步研究，今后將進一步擴大檢測樣本數(shù)量和檢測位點，同時納入不同地域和不同種族的人群進行深入研究。

1 Khalifa RH,Bahgat DM,Darwish HA,etal.Significant association between FasL gene-844T/C polymorphism and risk to hepatocellular carcinoma in Egyptian patients〔J〕.Immunol Lett,2016;172(1):84-9.

2 毛盈穎,丁 燁,陳 坤.長鏈非編碼RNA遺傳多態(tài)性與惡性腫瘤易感性的關(guān)系〔J〕.中華腫瘤雜志,2013;35(11):801-3.

3 魯明騫,孔慶志,許新華,等.MKK4基因啟動子區(qū)-1304T/G多態(tài)性與散發(fā)性鼻咽癌易感性的關(guān)系〔J〕.臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2016;30(4):287-90.

4 葉英楠,龍欣欣,于文文,等.肝細胞肝癌組織表達IL-8 對腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移的影響〔J〕.實用腫瘤雜志,2014;29(6):522-6.

5 An H,Zhu Y,Xie H,etal.Increased expression of interleukin-8 is an independent indicator of poor prognosis in clear-cell renal cell carcinoma〔J〕.Tumour Biol,2016;37(4):4523-9.

6 龍欣欣，葉英楠，李 慧,等.NTS/IL-8信號通路與惡性腫瘤相關(guān)性的研究進展〔J〕.山東醫(yī)藥,2014;54(30):93-4.

7 Zhu B,Lin N,Zhang M,etal.Activated hepatic stellate cells promote angiogenesis via interleukin-8 in hepatocellular carcinoma〔J〕.Journal of translational medicine,2015;13:365-9.

8 Liu H,Mao P,Xie C,etal.Association between interleukin 8-251 T/A and +781 C/T polymorphisms and glioma risk〔J〕.Diagn pathol,2015;10(2):138-42.

9 Chen Y,Yang Y,Liu S,etal.Association between interleukin 8-251 A/T and +781 C/T polymorphisms and osteosarcoma risk in Chinese population:a case-control study〔J〕.Tumour biology,2016;37(5):6191-6.

10 Chien MH,Yeh CB,Li YC,etal.Relationship of interleukin-8 gene polymorphisms with hepatocellular carcinoma susceptibility and pathological development〔J〕.J Surgic Oncol,2011;104(7):798-803.

〔2016-04-11修回〕

(編輯 袁左鳴)

國家自然科學基金(81560461,81260315)；廣西自然科學基金(2012GXNSFAA053169)

韋葉生(1969-)，男，教授，博士生導師，主任技師，主要從事鼻咽癌的基礎(chǔ)與臨床研究。

王俊利(1979-)，男，在讀博士，副主任醫(yī)師，主要從事惡性腫瘤的臨床分子診斷研究。

R73

A

1005-9202(2016)20-5045-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.20.049

1 右江民族醫(yī)學院附屬醫(yī)院