韓富秋，楊國(guó)東，王仕超，董海榮

(呼和浩特市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，內(nèi)蒙古呼和浩特 010030)

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轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子基因多態(tài)性與多發(fā)性骨髓瘤的相關(guān)性

韓富秋，楊國(guó)東，王仕超，董海榮△

(呼和浩特市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，內(nèi)蒙古呼和浩特 010030)

摘要:目的探討轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)基因單核苷酸多態(tài)性與多發(fā)性骨髓瘤(MM)的關(guān)系。方法采用病例對(duì)照研究，選取多發(fā)性骨髓瘤患者55例和健康對(duì)照55例，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)-連接酶檢測(cè)反應(yīng)(LDR)進(jìn)行基因型、等位基因型檢測(cè)，并進(jìn)一步進(jìn)行測(cè)序分型。結(jié)果MM患者TGF兩位點(diǎn)基因型頻率、等位基因頻率、聯(lián)合單倍體分型中各型的頻率與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子基因單核苷酸多態(tài)性與多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)生以及亞型沒(méi)有明顯的相關(guān)性。

關(guān)鍵詞:多發(fā)性骨髓瘤；單核苷酸多態(tài)性；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子基因

多發(fā)性骨髓瘤(MM)是一種B細(xì)胞腫瘤，占血液系統(tǒng)惡性腫瘤的15%和總的惡性腫瘤的1%[1]，特點(diǎn)是漿細(xì)胞的克隆性增生和分泌，導(dǎo)致單克隆性免疫球蛋白過(guò)度產(chǎn)生[2]，從而導(dǎo)致一系列臨床癥狀包括骨病變、貧血和終末器官腎臟疾病[3]。MM的病因是多方面的，包括炎癥、氧化應(yīng)激、遺傳變異和單核苷酸多態(tài)性等[4]。筆者旨在通過(guò)研究轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子與MM的相關(guān)性，從遺傳學(xué)角度闡明MM的發(fā)病機(jī)制。

1資料與方法

1.1一般資料病例組來(lái)源于2013年4月至2014年9月協(xié)和醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院MM患者,共55例，其中女26例，男29例。健康對(duì)照組55例，其中女29例，男26例。

1.2方法采用Kit法對(duì)受試對(duì)象的外周血進(jìn)行基因組DNA的抽提，并檢測(cè)總的DNA濃度、純度和完整性，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增SNP位點(diǎn)所在片段，然后取PCR產(chǎn)物進(jìn)行連接酶檢測(cè)反應(yīng)(LDR)，取多重LDR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序分析。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，組間頻數(shù)比較用χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1臨床指標(biāo)比較MM患者和健康者的臨床資料對(duì)比見(jiàn)表1。

表1　　MM患者和正常對(duì)照的臨床資料對(duì)比

續(xù)表1　　MM患者和正常對(duì)照的臨床資料對(duì)比

2.2DNA電泳抽提全血基因組DNA，并檢測(cè)其完整性。樣本電泳結(jié)果顯示樣本質(zhì)量較為均一，樣本濃度適中。

圖1　　DNA電泳圖譜

2.3 多重PCR擴(kuò)增在Perkin-Elmer Gene Amp PCR Systems 9600儀器上設(shè)置擴(kuò)增程序：95 ℃ 15 min變性，94 ℃ 30 s，退火56 ℃ 1 min延伸，共35個(gè)循環(huán)72 ℃ 1 min延伸72 ℃ 7 min保存。

M:標(biāo)志物；1:樣本；2:樣本。

圖2多重PCR擴(kuò)增圖譜

2.4PCR產(chǎn)物的連接酶檢測(cè)反應(yīng)在Perkin-Elmer Gene Amp PCR Systems 9600上設(shè)置如下程序：95 ℃2 min變性，94 ℃30 s退火，50 ℃2 min連接共35個(gè)循環(huán)。

2.5測(cè)序儀檢測(cè)應(yīng)用Genemapper軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和基因分型。

2.6基因型及等位基因頻率分布比較見(jiàn)表2。

基因型及等位基因頻率分布比較[n(%)]

MT：multiple myeloma;NT：normotensives。

2.7數(shù)據(jù)分析應(yīng)用Genemapper軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和基因分型。見(jiàn)圖3，列舉部分位點(diǎn)的分型截圖。(見(jiàn)《國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁(yè)“論文附件”)。

3討論

最近的研究表明，遺傳傾向可能影響腫瘤患者的生存期、與治療相關(guān)的癥狀以及與健康相關(guān)的生活質(zhì)量[5-6]。炎癥是闡明腫瘤相關(guān)癥狀表達(dá)的候選機(jī)制[7-8]。當(dāng)前MM的候選基因研究熱點(diǎn)有白細(xì)胞介素6、腫瘤壞死因子以及生長(zhǎng)轉(zhuǎn)化因子等，本研究旨在通過(guò)研究生長(zhǎng)轉(zhuǎn)化因子與MM的相關(guān)性來(lái)闡明其發(fā)病機(jī)制。

生長(zhǎng)轉(zhuǎn)化因子(TGF)是一類(lèi)具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、發(fā)育和凋亡等多種生命活動(dòng)。TGF對(duì)腫瘤的作用是極其復(fù)雜的。在空間方面，TGF信號(hào)通路對(duì)腫瘤細(xì)胞自身的作用在腫瘤抑制和腫瘤發(fā)展機(jī)制中有重要意義，又能通過(guò)影響腫瘤的微環(huán)境(如成纖維細(xì)胞、免疫細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì))來(lái)促進(jìn)或抑制腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移。在時(shí)相方面，TGF在腫瘤的進(jìn)展期可通過(guò)多種機(jī)制促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。TGF信號(hào)通路的復(fù)雜特性對(duì)腫瘤機(jī)制的研究和腫瘤的靶向治療提供了全新的機(jī)遇和挑戰(zhàn)。

筆者研究了北方地區(qū)人群TGF基因位點(diǎn)rs8105161與rs4803455多態(tài)性與MM的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)病例組與對(duì)照組間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，所以在研究人群中，TGF基因多態(tài)性與MM沒(méi)有相關(guān)性。這與王皓等[9]的研究結(jié)論相符，TGF可能在MM發(fā)生中起到一定的作用，但該因子基因編碼區(qū)多態(tài)性并不會(huì)影響血漿TGF-β1的濃度，也與MM的發(fā)生以及亞型沒(méi)有明確的相關(guān)性。本研究MM患者CD4+CD25+CD127低、CD4+CD25高、CD127低T細(xì)胞與TGF-β的表達(dá)水平無(wú)明顯相關(guān)性，說(shuō)明TGF-β或許不是導(dǎo)致MM患者體內(nèi)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞增加的重要或唯一因素。

綜上所述，有許多因素如年齡、放射線、種族等都可能影響MM的發(fā)生、發(fā)展，單一的基因多態(tài)性并不足以導(dǎo)致MM的發(fā)病，所以有必要進(jìn)行多因素的聯(lián)合研究來(lái)進(jìn)一步明確MM的發(fā)病機(jī)制。

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·論著·

Correlation between TGF gene polymorphism and multiple myeloma

HanFuqiu,YangGuodong,WangShichao,DongHairong△

(DepartmentofClinicalLaboratory,HuhehaoteMunicipalFirstHospital,Huhehaote,Neimenggu010030,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the relationship between transforming growth factor gene (TGF) single nucleotide polymorphism (SNP) and multiple myeloma (MM).MethodsThe case control study was performed,55 patients with MM and 55 healthy controls were selected.The genotype and allele detections were performed by adopting the polymerase chain reaction (PCR) and the ligase detection reaction (LDR) respectively.Then the sequencing based typing was further conducted.ResultsThere were no statistically significant differences in the two loci genotype frequencies,allele frequencies and genotype frequencies in joint haploid typing between the MM group and the control group(P>0.05).ConclusionSNP of TGF gene has no obvious correlation with the occurrence of MM and subtypes.

Key words:multiple myeloma;single nucleotide polymorphism;transforming growth factor gene

作者簡(jiǎn)介：龍國(guó)文，男，主任檢驗(yàn)技師，主要從事檢驗(yàn)質(zhì)量控制工作。

收稿日期：(2015-06-08)

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.019A

文章編號(hào)：1673-4130(2015)24-3554-02