王文慧　李海濱　李景生　宋玉國

(北華大學附屬醫(yī)院乳腺外科，吉林　吉林　132011)

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·腫瘤·

乳腺癌患者荷瘤狀態(tài)T淋巴細胞亞群檢測及其臨床意義

王文慧李海濱李景生1宋玉國2，3

(北華大學附屬醫(yī)院乳腺外科，吉林吉林132011)

〔摘要〕目的檢測乳腺癌患者外周血T淋巴細胞總數(shù)及T淋巴細胞亞群中的CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD45RA+T細胞、CD45RO+T細胞的百分率以評價患者的免疫狀態(tài)。方法試驗組選擇女性原發(fā)性乳腺腫瘤患者40例，其中Ⅰ期乳腺癌23例，Ⅱ+Ⅲ期乳腺癌17例；以女性健康體檢者30例為對照組。應(yīng)用流式細胞儀，采用三色熒光免疫標記技術(shù)分別檢測各組外周血T淋巴細胞亞群的數(shù)量，統(tǒng)計分析各組檢測結(jié)果的差異性。結(jié)果試驗組CD3+T細胞、CD4+T細胞百分率明顯低于對照組(P<0.05)，Ⅱ+Ⅲ期患者明顯低于Ⅰ期患者(P<0.05)。與對照組比較，試驗組CD45RA+T細胞明顯減少，而CD45RO+T細胞明顯增多(P<0.05)；與Ⅰ期乳腺癌患者比較，Ⅱ+Ⅲ期乳腺癌患者CD45RA+T細胞明顯減少，而CD45RO+T細胞明顯增多，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論T細胞亞群檢測是評價腫瘤患者細胞免疫功能的重要指標，具有重要的臨床應(yīng)用價值。乳腺癌患者免疫功能與腫瘤惡變的發(fā)生、發(fā)展及臨床分期有一定相關(guān)性，隨著病情的進展，機體免疫功能呈現(xiàn)下降趨勢。

〔關(guān)鍵詞〕乳腺癌；T淋巴細胞亞群；初始T細胞；記憶T細胞

乳腺癌患者多數(shù)存在細胞免疫功能紊亂〔1〕，腫瘤負荷越大，免疫功能的下降也越明顯〔2〕。T淋巴細胞是抗腫瘤的重要免疫細胞，T淋巴細胞亞群的數(shù)量和比例與腫瘤的發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移存在密切關(guān)系，可影響某些腫瘤的化療效果〔3〕。T淋巴細胞是一個復(fù)雜的細胞群體，根據(jù)其功能可分為輔助性T細胞和細胞毒性T細胞兩個主要細胞亞群；根據(jù)是否已接受抗原刺激，又分為初始T細胞(CD45RA+T細胞)和記憶T細胞(CD45RO+T細胞)兩個細胞亞群，本研究應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測乳腺癌患者外周血T淋巴細胞亞群和CD45RA+T細胞、CD45RO+T細胞的數(shù)量和比例，用以評價乳腺癌患者的細胞免疫功能狀態(tài)。

1資料與方法

1.1臨床資料選擇2013年6月至2015年6月我院乳腺外科收治的乳腺癌患者40例作為試驗組，年齡32～65歲，平均(42.8±11.2)歲,全部為女性。病理學診斷確切，有明確的TNM分期，其中Ⅰ期23例，Ⅱ+Ⅲ期17例。另選同期我院健康體檢中心健康體檢者30例作為對照組，女性，年齡30～60歲，平均(41.8±10.5)歲。

1.2儀器及試劑儀器：美國Beckman 公司EPICS XL型流式細胞儀。試劑：美國Beckman 公司熒光標記單克隆抗體，包括：CD3-PC5、CD4-FITC、CD8-PE、CD45RA-FITC、CD45RO-PE，IgG-FITC/IgG-PE/IgG-PC5。

1.3外周血T淋巴細胞亞群及CD45RA+、CD45RO+T細胞的檢測試驗組在患者知情同意的情況下于手術(shù)前1～3 d采血，對照組為體檢當日采血。用EDTA-K2真空采血管，空腹靜脈采血2 ml，混勻備檢。取3只流式細胞儀專用試管，分別加入熒光標記單克隆抗體10 μl：①IgG-FITC/IgG-PE/IgG-PC5，10 μl；②CD3-PC5/CD4-FITC/CD8-PE，各10 μl；③CD45RA-FITC和CD45RO-PE，各10 μl。在上述試管中分別加入抗凝靜脈血50 μl，混合均勻，室溫避光標記20 min。標記后將試管放于振蕩器上，邊震蕩邊加入溶血劑A 600 μl，震蕩8 s，立即加溶血劑B 260 μl混勻。溶血后加入磷酸鹽緩沖液(PBS)4 ml，1 000 r/min離心5 min，小心棄去上清，向沉淀中加入PBS 0.5 ml，混勻。以SS為橫坐標、FS為縱坐標建立坐標圖，選擇淋巴細胞群，用同型對照IgG-FITC/IgG-PE/IgG-PC5調(diào)節(jié)電壓，分別將各檢測管放到流式細胞儀上進行檢測。

1.5統(tǒng)計學方法采用SPSS10.0軟件進行t檢驗。

2結(jié)果

2.1T淋巴細胞亞群及CD45RA+、CD45RO+T細胞檢測結(jié)果CD3+T細胞的百分率為58.8%；CD4+T為26.3%；CD8+T為28.3%；CD45RO+T為42.5%；CD45RA+T為40.8%。

2.2兩組T細胞亞群檢測結(jié)果比較試驗組CD3+T細胞、CD4+T細胞百分率〔(62.48±7.24)%，(29.67±6.07)%〕明顯低于對照組〔(66.67±6.29)%，(35.18±5.31)%〕(P<0.05)，而CD8+T細胞百分率〔試驗組(28.45±5.22)%、對照組(27.98±6.11)%〕無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與對照組比較〔(62.05±7.99)%〕，試驗組CD45RA+T細胞〔(41.67±9.4%)〕明顯減少，而CD45RO+T細胞明顯增多〔(37.21±6.14)% vs (44.10±9.50)%〕(P<0.05)。

2.3TNMⅠ期與Ⅱ+Ⅲ期乳腺癌患者T細胞亞群檢測結(jié)果比較Ⅱ+Ⅲ期患者CD3+T細胞〔(60.89±8.48)%〕、CD4+T細胞百分率〔(28.21±6.25)%〕明顯低于Ⅰ期患者〔(64.82±5.15)%、(31.74±4.76)%〕(P<0.05),但CD8+T細胞百分率〔(28.97±4.51)% vs (27.57±5.52)%〕差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與Ⅰ期乳腺癌患者〔(45.42±10.03)%〕比較，Ⅱ+Ⅲ期乳腺癌患者CD45RA+T細胞明顯減少〔(37.46±7.82)%，P<0.05〕，而CD45RO+T細胞明顯增多〔Ⅰ期(40.45±8.79)%,Ⅲ+Ⅳ期：(47.82±9.23)%〕(P<0.05)。

3討論

機體的免疫系統(tǒng)對腫瘤細胞具有重要的免疫監(jiān)視作用，能夠及時清除新近產(chǎn)生的腫瘤細胞。對于腫瘤患者，如果免疫監(jiān)視功能降低，腫瘤細胞就會不斷生長，同時隨著腫瘤的不斷生長，機體的免疫狀態(tài)會進行性下降。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與機體的免疫功能密切相關(guān)，其中以T淋巴細胞為主的抗腫瘤免疫是近年來的研究熱點。T細胞是一個復(fù)雜的細胞群體，其中CD3+T細胞代表T淋巴細胞總數(shù)，CD4+T細胞代表輔助性T細胞數(shù)量，CD8+T細胞代表細胞毒性T細胞數(shù)量。只有T細胞各亞群的百分率及CD4/CD8比值在一定的范圍內(nèi)，才能保證機體的細胞免疫功能處于正常狀態(tài)〔4〕。T細胞由骨髓產(chǎn)生，在胸腺內(nèi)馴化成熟，成熟的T細胞在沒有受到抗原刺激時稱為初始T細胞(CD45RA+T細胞)；接受抗原刺激后一部分發(fā)育為殺傷性T細胞而發(fā)揮免疫殺傷作用，一部分發(fā)育為記憶T細胞(CD45RO+T細胞)。只有CD45RA+T細胞和CD45RO+T細胞兩者的數(shù)量和比例保持在一定范圍內(nèi)，機體的細胞免疫功能才能處于平衡狀態(tài)〔5〕。

本研究結(jié)果與Tredan等〔6〕報道的結(jié)果基本一致。說明機體在荷瘤狀態(tài)下，腫瘤細胞會產(chǎn)生一些抑制免疫功能的因子，它們會使CD4+細胞數(shù)量下降，而CD8+T細胞的數(shù)量及活性可能會輕度升高。結(jié)果證實，機體在荷瘤狀態(tài)下，CD45RA+T會相對減少，而CD45RO+T細胞會相對增多，荷瘤狀態(tài)越嚴重這種現(xiàn)象越明顯。王巍等〔7〕的研究結(jié)果也證實，結(jié)直腸癌患者在荷瘤狀態(tài)時CD45RO+T細胞含量高于對照組。T細胞接受抗原刺激后前者可以向后者轉(zhuǎn)化，兩者的數(shù)量和比例保持在一定范圍內(nèi)，機體的細胞免疫功能才能處于平衡狀態(tài)。若CD45RA+T細胞減少到一定數(shù)量且短期內(nèi)得不到補充，說明機體免疫細胞儲備更新能力不足。CD45RA+T細胞減少而CD45RO+T細胞增多則說明由于腫瘤細胞的存在，CD45RA+T細胞接受腫瘤抗原刺激后向CD45RO+T細胞發(fā)生了轉(zhuǎn)化。

綜上，T淋巴細胞亞群檢測能直接反映腫瘤患者機體的免疫功能狀態(tài)，也可間接反映腫瘤的發(fā)生、發(fā)展情況。臨床上聯(lián)合檢測上述指標，可動態(tài)監(jiān)測淋巴細胞亞群數(shù)量，對于及時掌握腫瘤患者的免疫狀態(tài)和判斷預(yù)后具有重要意義。

4參考文獻

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6Tredan O,Manuel M,Clapisson G,etal.Patients with metastatic breast cancer leading to CD4(+)T cell lymphopaenia have poor outcome〔J〕.Eur J Cancer,2013;49(7):1673-82.

7王巍，宋玉國，張付喜.胃癌及結(jié)直腸癌患者外周血CD45RA+和CD45RO+T細胞變化特征〔J〕.中國老年學雜志，2015;35(13)：3625-6.

〔2015-09-17修回〕

(編輯滕欣航)

〔中圖分類號〕R73.3

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)08-1873-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.08.040

通訊作者：宋玉國(1962-)，男，教授，碩士，主要從事臨床免疫學研究。

基金項目：吉林省教育廳“十二五”科學技術(shù)研究項目(No.2013179)

1吉林省中醫(yī)藥科學院2北華大學附屬醫(yī)院臨床免疫研究室

3北華大學生命科學研究中心

第一作者：王文慧(1970-)，男，副主任醫(yī)師，碩士，主要從事乳腺外科臨床研究。