高強(qiáng)，龐茂達(dá)，裴燕，王冉，王波，張楊楊，謝愷舟*，張跟喜，戴國(guó)俊，王金玉

(1.揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州225009；2.江蘇省動(dòng)物遺傳繁育與分子設(shè)計(jì)重點(diǎn)試驗(yàn)室，江蘇揚(yáng)州225009；3.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院江蘇省畜禽產(chǎn)品安全性研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京 210014)

金霉素和代謝物差向金霉素在肉雞肌肉和肝臟中的殘留分布

高強(qiáng)1,2，龐茂達(dá)3，裴燕1,2，王冉3，王波1,2，張楊楊1,2，謝愷舟1,2*，張跟喜1,2，戴國(guó)俊1,2，王金玉1,2

(1.揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州225009；2.江蘇省動(dòng)物遺傳繁育與分子設(shè)計(jì)重點(diǎn)試驗(yàn)室，江蘇揚(yáng)州225009；3.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院江蘇省畜禽產(chǎn)品安全性研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京 210014)

為了研究金霉素(CTC)、差向金霉素(ECTC)在肉雞肌肉、肝臟中的殘留分布情況，樣品經(jīng)提取液提取后過(guò)Oasis HLB SPE小柱凈化，采用電噴霧正離子模式(ESI+)和多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM)，用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)；試驗(yàn)組雞按體重以50 mg/(kg·d)劑量?jī)?nèi)服CTC，連續(xù)5 d，每天給藥1次。結(jié)果表明：該方法測(cè)定肉雞肌肉和肝臟中CTC檢測(cè)限和定量限分別為5.0、10.0 μg/kg。ECTC檢測(cè)限和定量限分別為20.0、30.0 μg/kg。CTC和ECTC在肉雞肌肉中平均回收率分別在73.00%～95.20%和81.80%～101.60%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別在8.85%～9.13%和2.05%～9.29%；在肉雞肝臟中平均回收率分別在67.06%～90.80%和78.64%～106.98%，RSD分別在2.90%～8.88%和4.72%～9.48%；肉雞肌肉和肝臟中CTC、代謝物ECTC的殘留量分別在給藥后第1、5 d時(shí)達(dá)到最高。肉雞肝臟中ECTC的殘留量約占總殘留量的1/2。停藥后CTC及其代謝物ECTC代謝緩慢，在停藥第6 d時(shí)，仍能檢測(cè)到CTC及其代謝物ECTC，但其殘留量均低于最高殘留限量(MRLs)。從保障食品安全方面考慮，建議我國(guó)將CTC和ECTC均作為金霉素的殘留標(biāo)示物進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

金霉素；差向金霉素；殘留分布；肉雞肌肉；肉雞肝臟

金霉素(Chlortetracycline，CTC)又稱(chēng)氯四環(huán)素，因其藥效高、價(jià)格低，被廣泛的應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖業(yè)中，但金霉素的不規(guī)范應(yīng)用，使得動(dòng)源性食品中金霉素的殘留對(duì)人類(lèi)的健康及生態(tài)環(huán)境造成了一定的危害，尤其是一些常見(jiàn)的病原菌對(duì)CTC已產(chǎn)生耐藥性，從而導(dǎo)致藥效的降低。因此，各國(guó)對(duì)CTC在動(dòng)源性食品中的最高殘留限量(MRLs)做了明確的規(guī)定，我國(guó)和歐盟均規(guī)定了CTC在雞肌肉、雞肝臟中的最高殘留限量分別為0.1、0.3 mg/kg[1-2]。差向金霉素(4-Epi-chlortetracycline，ECTC)是CTC在弱酸條件下轉(zhuǎn)化而成的差向異構(gòu)體，是CTC在動(dòng)物體內(nèi)的主要代謝產(chǎn)物之一，也具有一定的副作用，目前已經(jīng)被歐盟確定為殘留標(biāo)示物，且規(guī)定在雞肌肉、雞肝臟中的最高殘留限量分別為0.1、0.3 mg/kg[2]。

目前，國(guó)內(nèi)外研究CTC在動(dòng)物組織中的殘留檢測(cè)方法雖然在羊[3]、豬[4-5]、牛奶和牛肉[6]中有較多報(bào)道，但研究CTC和代謝物ECTC在肉雞肌肉和肝臟中的殘留分布情況尚未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)通過(guò)膠囊給藥，試驗(yàn)組雞按50 mg/(kg·d)劑量?jī)?nèi)服CTC，連續(xù)5 d給藥，測(cè)定從給藥期到休藥期CTC、代謝物ECTC在肉雞肌肉和肝臟中的殘留分布情況，為監(jiān)控CTC在肉雞體內(nèi)的代謝以及CTC在臨床上的合理用藥提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及分組 選取1日齡健康A(chǔ)A肉雞100只，厚墊料平養(yǎng)至16日齡后預(yù)飼1周，飼喂全價(jià)飼料(不含任何抗菌藥物)。從中選取體重為0.55(0.10 kg的AA肉雞70 只，將其隨機(jī)分成兩組，各35 只肉雞，一組為空白對(duì)照組，另一組為試驗(yàn)組。每組設(shè)7個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5 只肉雞。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)品、藥品及主要試劑 CTC、ECTC標(biāo)準(zhǔn)品：純度分別為99 %、97 %，美國(guó)Sigma-Aldrich公司；金霉素原粉：純度92 %，湖北武漢昌恒生物醫(yī)藥制品研究所；乙腈、甲醇為色譜純，美國(guó)ROE Scientific Inc 公司；磷酸氫二鈉、檸檬酸、乙二胺四乙酸二鈉、乙酸乙酯、三氯乙酸、甲酸均為分析純，南京化學(xué)試劑有限公司；超純水(本實(shí)驗(yàn)室自制)。

1.3 主要儀器 高效液相色譜儀(Agilent 1200，美國(guó)Agilent公司)；串聯(lián)質(zhì)譜儀(6410 Triple Quad，美國(guó)Agilent公司)；干浴氮吹儀(N-EVAP 112型，美國(guó)Organomation公司)；超聲波振蕩儀(KQ-100DE型，昆山市超聲儀器有限公司)；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(5810R型，德國(guó)Eppendorf公司)；超純水制備儀(Smart2Pure，美國(guó)Thermo Scientific公司)。

1.4 給藥途徑、劑量及樣品采集 試驗(yàn)組雞給藥劑量按體重為50 mg/(kg·d)通過(guò)膠囊給藥，每天上午8∶00～9∶00給藥1次，連續(xù)5 d，給藥前第1 d、給藥后的第1、3、5 d和停藥后第2、4、6 d，每天分別在對(duì)照組和試驗(yàn)組中隨機(jī)選取5只肉雞進(jìn)行屠宰，取樣時(shí)間均為上午8∶00～9∶00，采取肉雞肌肉和肝臟，將樣品置于-35 ℃冰箱中保存待測(cè)。

1.5 樣品處理與檢測(cè)方法

1.5.1 樣品提取及凈化 將肉雞肌肉絞碎，準(zhǔn)確稱(chēng)取3.0 g，置于50 mL聚丙烯離心管中，加入12 mL 0.1 mol/L EDTA-McIIvaine提取液，充分漩渦混勻1 min，超聲提取5 min后，3000 r/min離心10 min，將上清液移至另一支聚丙烯離心管中，剩余殘?jiān)貜?fù)提取2次，合并上清液， 5000 r/min離心10 min，取上清液進(jìn)行肌肉樣品凈化。

準(zhǔn)確稱(chēng)取2.0 g搗碎后混合均勻的肉雞肝臟置于50 mL的離心管中，加入8 mL 0.1 mol/L EDTA-McIIvaine提取液后漩渦振蕩10 min，以12000 r/min，5 ℃ 離心10 min，移出上清液，再以相同方式提取2 次，收集上清液并加入2 mL 5 %三氯乙酸，以12000 r/min，5 ℃ 離心10 min，取上清液進(jìn)行肝臟樣品凈化。

HLB固相萃取小柱首先用5 mL甲醇和5 mL水活化，然后分別取上述肌肉、肝臟待凈化的上清液注入該萃取小柱中，分別依次用超純水5 mL、5%甲醇水溶液5 mL淋洗，棄去淋洗液，再用甲醇和乙酸乙酯混合溶液(v/v，1∶9)10 mL以0.5 mL/min的流速進(jìn)行洗脫，洗脫液在40 ℃水浴中用氮吹儀吹干，殘?jiān)? mL甲醇溶解，充分混勻，殘?jiān)芤哼^(guò)0.22 μm針頭式過(guò)濾器后，濾液供HPLC-MS/MS測(cè)定。

1.5.2 液相色譜條件 色譜柱：Eclipse Plus C18(5 μm，2.1 mm×150 mm,id)柱；柱溫：30 ℃；流速：0.35 mL/min；流動(dòng)相：A：0.1 %甲酸水；B：乙腈。梯度洗脫程序?yàn)? ～8.2 min，86.5%A；8.3～11 min，86.5%A 到2 %A；11.1 ～16 min，2 %A；16.1～20 min，2 %A 到86.5 %A；20.1～25 min，86.5%A；進(jìn)樣體積：5 μL。

1.5.3 質(zhì)譜條件 采用電噴霧正離子模式(ESI+)和多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式監(jiān)測(cè)；霧化氣：氮?dú)猓桓稍餁鉁囟龋?50 ℃；干燥氣流速：10 L/min；霧化器壓力：45 psi；毛細(xì)管電壓：4000 V。金霉素和差向金霉素的保留時(shí)間和優(yōu)化質(zhì)譜條件見(jiàn)表1。

表1 金霉素和差向金霉素的保留時(shí)間和優(yōu)化質(zhì)譜條件

*為定量離子

1.5.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 將質(zhì)量濃度均為100 μg/mL的CTC、ECTC標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液分別用甲醇稀釋為0.005、0.0125、0.025、0.05、0.10、0.20 μg/mL的CTC標(biāo)準(zhǔn)工作液和0.025、0.05、0.10、0.20、0.40、0.80 μg/mL的ECTC標(biāo)準(zhǔn)工作液。分別將CTC、ECTC標(biāo)準(zhǔn)工作液由低濃度到高濃度分別進(jìn)行HPLC-MS/MS分析。每一個(gè)濃度點(diǎn)重復(fù)測(cè)定4次，取其平均值，分別繪制CTC、ECTC標(biāo)準(zhǔn)曲線。1.5.5 樣品回收率 將空白肉雞肌肉、肝臟樣品絞碎、搗碎混合均勻，準(zhǔn)確稱(chēng)取3.0 g雞肉、2.0 g肝臟樣品，分別置于50 mL聚丙烯離心管中，分別加入適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，使空白肉雞肌肉樣品中CTC和ECTC的濃度分別為0.05、0.10、0.15 mg/kg，空白肝臟樣品中CTC和ECTC的濃度分別為0.15、0.30、0.60 mg/kg。每個(gè)添加量分別重復(fù)測(cè)定5次，樣品經(jīng)方法1.5.1提取和凈化后，分別供HPLC-MS/MS檢測(cè)，外標(biāo)法定量，分別計(jì)算CTC、ECTC在空白肉雞肌肉和肝臟中的添加回收率。

1.5.6 檢測(cè)限(LOD)與定量限(LOQ)的測(cè)定 將一定濃度的CTC、ECTC標(biāo)準(zhǔn)溶液分別添加至空白肉雞肌肉和肝臟的提取液中，用HPLC-MS/MS進(jìn)行檢測(cè)，并逐漸降低CTC、ECTC的濃度，以樣品檢測(cè)時(shí)的信噪比(S/N)為3和10分別作為方法的檢測(cè)限(LOD)和定量限(LOQ)。 1.5.7 肉雞肌肉及肝臟中CTC和代謝物ECTC的測(cè)定 按外標(biāo)法，將肉雞肌肉和肝臟中所測(cè)得的CTC和ECTC峰面積分別帶入各自標(biāo)準(zhǔn)曲線，可得到肉雞肌肉和肝臟中CTC和代謝物ECTC的殘留量。

2 結(jié)果

2.1 色譜、質(zhì)譜分離情況 在優(yōu)化的色譜、質(zhì)譜條件下進(jìn)行分析，測(cè)得肉雞肌肉、肝臟中ECTC、CTC保留時(shí)間分別為7.5 min左右和12.3 min左右，峰形對(duì)稱(chēng)，分離效果好。由肉雞肌肉中CTC、ECTC總離子流色譜圖(TIC)(圖1)可見(jiàn)，空白肉雞肌肉提取液在上述時(shí)間無(wú)干擾峰出現(xiàn)，且均為基線分離峰。

A. ECTC和CTC混合標(biāo)準(zhǔn)品(100ng/mL)； B.空白肉雞肌肉提取液C. 添加CTC和ECTC標(biāo)準(zhǔn)品的空白肉雞肌肉(0.1mg/kg)； D. 給予CTC后的肉雞肌肉圖1 肉雞肌肉中CTC、ECTC的TIC圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線 以CTC、ECTC峰面積(y)對(duì)進(jìn)樣前CTC、ECTC標(biāo)準(zhǔn)工作液質(zhì)量濃度(x)作圖，分別得到CTC、ECTC標(biāo)準(zhǔn)曲線。CTC在0.005～0.20 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，線性回歸方程為y=53382x-290.43，相關(guān)系數(shù)r=0.9935；ECTC在0.025～0.80 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，線性回歸方程為y=50796x-2025，相關(guān)系數(shù)r=0.9907。

2.3 樣品回收率和精密度 CTC和ECTC在肉雞肌肉和肝臟中的回收率和精密度見(jiàn)表2和表3。由表2可知，在肉雞肌肉中添加水平分別為0.05、0.1、0.15 mg/kg時(shí)，肉雞肌肉中CTC、ECTC回收率均分別高于73.00%、81.80%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均分別低于9.13%、9.29%。通過(guò)對(duì)樣品精密度測(cè)定表明，CTC和ECTC在肉雞肌肉中的日內(nèi)RSD分別低于8.71%和7.66%；日間RSD分別低于12.92%和10.19%。由表3可知，在肉雞肝臟中添加水平分別為0.15、0.30、0.60 mg/kg時(shí)，肉雞肝臟中CTC、ECTC的回收率均分別高于67.06%、78.64%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均分別低于8.88%、9.48%。通過(guò)對(duì)樣品精密度測(cè)定表明，CTC和ECTC在肉雞肝臟中的日內(nèi)RSD分別低于7.38%和8.84%；日間RSD分別低于7.79%和10.91%。

表2 CTC和ECTC在肉雞肌肉中的回收率和精密度(n=5)

表3 CTC和ECTC在肉雞肝臟中的回收率和精密度(n=5)

2.4 靈敏度 本試驗(yàn)建立的檢測(cè)方法實(shí)際應(yīng)用發(fā)現(xiàn)，測(cè)得CTC和ECTC的檢測(cè)限分別為5.0 μg/kg和20.0 μg/kg、定量限分別為10.0 μg/kg和30.0 μg/kg。表明該方法具有較高的靈敏度，完全能滿(mǎn)足肉雞肌肉、肝臟中CTC和代謝物ECTC殘留檢測(cè)的需要。

2.5 肉雞肌肉和肝臟中CTC和代謝物ECTC的殘留量測(cè)定 肉雞肌肉、肝臟中CTC和代謝物ECTC的殘留量分別見(jiàn)表4和表5。

表4 肉雞肌肉中CTC素和代謝物ECTC殘留量(n=5)

ND.低于方法檢測(cè)限

表5 肉雞肝臟中CTC和代謝物ECTC殘留量(n=5)

ND.低于方法檢測(cè)限

由表4可知，肉雞肌肉中CTC和代謝物ECTC的殘留量在給藥后第1 d時(shí)，殘留量達(dá)到154.94 μg/kg。在肉雞肌肉中ECTC的殘留量雖然低于原形藥物CTC的含量，但在殘留藥物中也占了很大的比例。由表5可見(jiàn)，肉雞肝臟中CTC和代謝物ECTC的殘留量在給藥后第5 d時(shí)，殘留量達(dá)到178.89 μg/kg。綜合表4、表5可以看出，停藥后肉雞肌肉和肝臟中CTC和ECTC代謝均緩慢，在停藥后第6 d時(shí)，CTC和ECTC在肉雞肌肉和肝臟中仍然能檢出，但均低于我國(guó)和歐盟所規(guī)定的最高殘留限量標(biāo)準(zhǔn)。

3 討論

3.1 色譜和質(zhì)譜條件的優(yōu)化

本試驗(yàn)比較了流動(dòng)相：0.1%甲酸水-乙腈和0.1%甲酸水-甲醇，以及固定相C8、C18分析柱來(lái)分析肉雞組織中CTC和代謝物ECTC的分離效果。結(jié)果表明，采用乙腈-水比甲醇-水作為流動(dòng)相柱壓力明顯降低，有利于延長(zhǎng)泵和色譜柱的使用壽命，并且采用Eclipse Plus C18(5 μm，2.1 mm×150 mm.id)，更有利于CTC、ECTC和雜質(zhì)峰的分離和分析靈敏性的提高。在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《動(dòng)物源性食品中四環(huán)素類(lèi)獸藥殘留量檢測(cè)方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法與高效液相色譜法》[7]中，在流動(dòng)相中添加了含有對(duì)離子產(chǎn)生有抑制作用的離子修飾劑三氟乙酸，降低了分析方法的靈敏度和可靠性，而本試驗(yàn)采用在流動(dòng)相中添加0.1%的甲酸，有利于增加離子化效率、提高靈敏度且能避免儀器性能的下降。

在串聯(lián)質(zhì)譜分析過(guò)程中，CTC和代謝物ECTC具有相同的分子式和碎片離子，因此它們具有相同的母離子和子離子。故試驗(yàn)首先采用流動(dòng)注射的方式進(jìn)樣，CTC、ECTC標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣濃度均為1 μg/mL，采用正離子模式進(jìn)行全掃描，確定CTC、ECTC的分子離子；然后在分子離子為母離子的情況下，分別對(duì)CTC、ECTC子離子進(jìn)行全掃描，選取干擾小、豐度強(qiáng)度高的三對(duì)離子作為CTC、ECTC的定性離子，最后在多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)正離子模式下，對(duì)毛細(xì)管出口電壓和碰撞電壓進(jìn)行優(yōu)化，獲得了理想的效果。

3.2 金霉素殘留標(biāo)示物探討 CTC在弱酸性的條件下，會(huì)轉(zhuǎn)化為無(wú)抗菌活性的ECTC。當(dāng)前國(guó)內(nèi)對(duì)動(dòng)物源性食品中CTC殘留的研究與監(jiān)測(cè)僅將CTC作為殘留標(biāo)示物，并沒(méi)有將ECTC一同作為金霉素在動(dòng)物體內(nèi)的殘留標(biāo)示物，而在國(guó)外已將CTC和ECTC均作為金霉素在動(dòng)物體內(nèi)的殘留標(biāo)示物。葛云芝等[8]研究CTC在肌肉中的殘留，只把CTC作為殘留標(biāo)示物，并沒(méi)有把ECTC作為殘留標(biāo)示物。Arikan等[9]研究了CTC在牛糞中的降解和代謝，研究發(fā)現(xiàn)ECTC和異金霉素(ICTC)是牛糞中CTC的主要代謝產(chǎn)物；Gajda等[10]研究了動(dòng)物組織中四環(huán)素類(lèi)藥物及其代謝產(chǎn)物的殘留，將ECTC作為CTC的主要代謝產(chǎn)物。本試驗(yàn)以HPLC-MS/MS檢測(cè)肉雞肌肉和肝臟中CTC和代謝物ECTC的含量，研究了定量攝入CTC后，肉雞肌肉和肝臟中CTC和代謝物ECTC的殘留分布情況。研究結(jié)果表明，除在肉雞肌肉和肝臟中檢出原形藥物CTC外，還能檢測(cè)出代謝物ECTC，且含量較高，毒副作用增加。由于代謝物ECTC已經(jīng)被歐盟確定為殘留標(biāo)示物，故參照歐盟規(guī)定，建議我國(guó)應(yīng)將ECTC作為CTC在動(dòng)物體內(nèi)的殘留標(biāo)示物進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

3.3 藥物在肉雞肌肉和肝臟中的殘留分布情況 Halling等[11]研究表明：在pH<6.5環(huán)境水中，存在的降解產(chǎn)物主要有ECTC、EACTC、Keto-CTC等。在本試驗(yàn)條件下，肉雞體內(nèi)的環(huán)境主要為弱酸性，通過(guò)膠囊內(nèi)服給藥CTC后，除在肉雞肌肉和肝臟中檢出原形藥物CTC外，其主要代謝產(chǎn)物ECTC也被檢出，這與Halling等[11]研究結(jié)果基本一致。有關(guān)CTC在肉雞體內(nèi)的其它代謝產(chǎn)物還有待做進(jìn)一步的研究。

匡光偉等[12]研究了CTC在雞體內(nèi)不同組織器官中的殘留以及CTC在雞糞中的降解，以40日齡湘黃雞為試驗(yàn)素材，在飼料中加入CTC散劑，添加劑量為20～50 mg/kg，連續(xù)飼喂12 d，分別在停藥后2、4、7、9、12、16、23、28 d對(duì)雞進(jìn)行屠宰，采集雞肌肉、肝臟和腎臟樣品，用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)。研究結(jié)果表明，CTC在腎臟中殘留量最高、肝臟次之、肌肉最低。本試驗(yàn)以AA肉雞為研究對(duì)象，通過(guò)膠囊內(nèi)服給藥CTC，每天給藥1次連續(xù)5 d，給藥劑量為50 mg/(kg·d)，給藥后第1、3、5 d和停藥后第2、4、6 d時(shí)，在肉雞肌肉和肝臟中均有CTC和代謝物ECTC被檢出；停藥后肉雞肝臟中CTC、ECTC殘留量均高于肉雞肌肉中的殘留量，結(jié)果與報(bào)道[12]一致，主要是由肝腸循環(huán)所引起的，一部分CTC經(jīng)膽汁排泄，在腸內(nèi)部分被吸收而導(dǎo)致肉雞肝臟中的CTC和代謝物ECTC殘留量比肉雞肌肉中的殘留量要高。

4 結(jié)論

試驗(yàn)組肉雞按50 mg/(kg·d)劑量?jī)?nèi)服CTC，連續(xù)5 d給藥，在停藥第6 d時(shí)，肉雞肌肉和肝臟中CTC和代謝物ECTC仍能被檢測(cè)到，但殘留量均低于MRLs。從保障食品安全方面考慮，建議我國(guó)將CTC和ECTC均作為金霉素的殘留標(biāo)示物進(jìn)行監(jiān)控。

[1] 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部. 動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量[S].

[2] Commission Regulation(EU)No 37/2010 of 22 December 2009 on pharmacologically active substances and their classification regarding maximum residue limits in food stuffs of animal origin[Z].

[3] Washburn K，F(xiàn)ajt V R，Plummer P，etal. Pharmacokinetics of oral chlortetracycline in nonpregnant adult ewes[J]. Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics，2014，37(6)：607～610.

[4] Cherlet Marc，De Backer Patrick，Croubels Siska. Control of the keto-enol tautomerism of chlortetracycline for its straightforward quantitation in pig tissues by liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry[J].Journal of Chromatography A，2006，1133：135～141.

[5] Posyniak Andrzej，Mitrowska Kamila，Zmudzki Jan，etal. Analytical procedure for the determination of chlortetracycline and 4-epi-chlortetracycline in pig kidneys[J].Journal of Chromatography A，2005，1088：169～174.

[6] Cinquina A L，Longo F，Anastasi G，etal. Validation of a high-performance liquid chromatography method for the determination of oxytetracycline，tetracycline，chlortetracycline and doxycycline in bovine milk and muscle[J]. Journal of Chromatography A，2003，987：227～233.

[7] 中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB21317-2007 動(dòng)物源性食品中四環(huán)素類(lèi)獸藥殘留量檢測(cè)方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法與高效液相色譜法[S].

[8] 葛云芝，于小波，周光宏，等. 高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定雞肉中3種四環(huán)素類(lèi)抗生素殘留[J]. 食品科學(xué)，2013，10：180～183.

[9] Arikan O A. Degradation and metabolization of chlortetracycline during the anaerobic digestion of manure from medicated calves[J]. Journal of Hazardous Materials， 2008，158(2-3)：485～490.

[10]Gajda A，Posyniak A. Tetracyclines and their epimers in animal tissues by high-performance liquid chromatography [J]. Bulletin of the Veterinary Institute in Pulawy，2009，53：263～267.

[11]Halling S, Rensen B，Sengel V G，etal. Toxicity of tetracyclines and tetracycline degradation products to environmentally relevant bacteria，including selected tetracycline-resistant bacteria[J]. Archives of Environmental Contamination and Toxicology，2002，42(3)：263～271.

[12]匡光偉. CTC在雞體不同組織器官中的殘留及其在雞糞中的降解[D]. 長(zhǎng)沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

(編輯：陳希)

Residue Distribution of Chlortetracycline and Its Metabolite 4-Epi-chlortetracycline in Broiler Chicken Muscle and Liver

GAO Qiang1,2，PANG Mao-da3，PEI Yan1,2，WANG Ran3，WANG Bo1,2，ZHANG Yang-yang1,2，XIE Kai-zhou1,2*，ZHANG Gen-xi1,2，DAI Guo-jun1,2，WANG Jin-yu1,2

(1.CollegeofAnimalScienceandTechnology,YangzhouUniversity,Yangzhou，Jiangsu225009,China;2.KeyLaboratoryforAnimalGenetic,Breeding,ReproductionandMolecularDesignofJiangsuprovince,Yangzhou，Jiangsu225009,China;3.JiangsuKeyLaboratoryofAnimal-DerivedFoodSafety,JiangsuAcademyofAgriculturalScience,Nanjing210014,China)

A study on chlortetracycline(CTC)and 4-epi-chlortetracycline(ECTC)residue distribution was conducted in broiler chicken muscle and liver .The samples were extracted using (extracting solution)and purified by Oasis HLB SPE column. Electrospray positive ion mode (ESI+)and multiple reaction monitoring(MRM)were adopted. Finally, Chlortetracycline (CTC) and 4-Epi-chlortetracycline (ECTC) in broiler chicken muscle and liver were determinated by high performance liquid chromatography coupled with tandem quadruple mass spectrometry (HPLC-MS/MS). In this method, the limits of detection (LODs) and the limits of quantitation (LOQs) of chlortetracycline were 5.0 μg/kg and 10.0 μg/kg, respectively; the LODs and LOQs of 4-Epi-chlortetracycline were 20.0 μg/kg and 30.0 μg/kg, respectively. The average recoveries in broiler chicken muscle were 73.00%～95.20% and 81.80% ～101.60%, with the relative standard deviation (RSD) of 8.85%～9.13% and 2.05%～9.29%, respectively; the average recoveries in broiler chicken liver were 67.06%～90.80% and 78.64%～106.98%, with theRSDof 2.90%～8.88% and 4.72%～9.48%, respectively. After the broiler chickens were orally administered successively chlortetracycline of 50 mg/kg of body weight one time every day for 5 d, the residues of chlortetracycline and 4-Epi-chlortetracycline in broiler chicken muscle and liver were the highest on day 1 and day 5, respectively. The residues of 4-epi-chlortetracycline in broiler chicken liver accounted for half of the total residues. The metabolism of CTC and its metabolite ECTC was slow and could still be detected 6 d after withdrawal of drugs under the limits of the maximum residues (MRLs). To guarantee food safety, this research suggested identification and monitoring CTC and ECTC as residue marker of CTC in China.

chlortetracycline; 4-epi-chlortetracycline; residue distribution; broiler chicken muscle; broiler chicken liver

國(guó)家肉雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專(zhuān)項(xiàng)(CARS-42-G23)；揚(yáng)州大學(xué)“新世紀(jì)人才工程”項(xiàng)目

2015-11-06

A

1002-1280 (2016) 01-0024-07

S859.84