徐嫄，于麗娜，韓寧寧，龔旭昊，王靜文，郝利華，趙暉

(中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京100081)

利用獸藥典方法對(duì)青霉素鉀工業(yè)鹽和原料藥的檢測(cè)比較

徐嫄，于麗娜，韓寧寧，龔旭昊，王靜文，郝利華，趙暉*

(中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京100081)

為了辨別青霉素鉀工業(yè)鹽和青霉素鉀原料藥，依據(jù)《中國(guó)獸藥典》中青霉素鉀的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)四家青霉素原料藥生產(chǎn)企業(yè)提供的4批青霉素鉀工業(yè)鹽和4批青霉素鉀原料藥進(jìn)行了檢測(cè)，項(xiàng)目包括性狀、鑒別、吸光度、結(jié)晶性、溶液澄清度與顏色、青霉素聚合物、干燥失重、不溶性微粒、酸堿度、有關(guān)物質(zhì)、細(xì)菌內(nèi)毒素、可見異物、無菌和含量測(cè)定。結(jié)果表明，8批樣品均符合現(xiàn)行獸藥典青霉素鉀標(biāo)準(zhǔn)中各項(xiàng)規(guī)定，但結(jié)果無法用以區(qū)分青霉素鉀工業(yè)鹽和青霉素鉀原料藥，提示青霉素鉀的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)需進(jìn)一步完善，以提高對(duì)成品藥——注射用青霉素鉀的質(zhì)量控制。

青霉素鉀；工業(yè)鹽；原料藥；中國(guó)獸藥典

青霉素是β-內(nèi)酰胺類抗生素，被廣泛應(yīng)用于畜禽細(xì)菌感染疾病的防治。青霉素工業(yè)鹽是青霉素和各種半合成抗生素藥品生產(chǎn)過程中的藥用中間體。青霉素的生產(chǎn)需要經(jīng)過多次萃取、過濾、結(jié)晶、脫色、洗滌和干燥等復(fù)雜的工藝過程，最終由青霉素工業(yè)鹽得到青霉素鉀原料藥，無菌分裝后得到符合國(guó)家藥典標(biāo)準(zhǔn)的產(chǎn)品[1-2]。由此可知，生產(chǎn)過程中藥用中間體及原料藥的質(zhì)量控制對(duì)成品藥的質(zhì)量至關(guān)重要。

國(guó)內(nèi)獸藥市場(chǎng)中曾有直接利用青霉素工業(yè)鹽代替青霉素原料藥分裝成注射用青霉素產(chǎn)品的違法現(xiàn)象，并且產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊[3-4]。本實(shí)驗(yàn)以《中國(guó)獸藥典》(2010年版)[5]為依據(jù)，對(duì)四家青霉素原料藥生產(chǎn)企業(yè)提供的青霉素鉀原料藥和青霉素鉀工業(yè)鹽進(jìn)行比較，以期對(duì)兩者進(jìn)行辨別，為獸醫(yī)行政管理部門執(zhí)法檢查打擊制售假劣獸藥的非法行為提供技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)準(zhǔn)品與樣品 青霉素對(duì)照品，含量93.1%，中國(guó)食品藥品檢定研究院(130437-201306)；青霉素系統(tǒng)適用性對(duì)照品，中國(guó)食品藥品檢定研究院(130606-201202)。青霉素鉀原料藥：企業(yè)A(批號(hào)：1021301009)，企業(yè)B(批號(hào)：20081202033)，企業(yè)C(批號(hào)：101211004)，企業(yè)D(批號(hào)：120421)。青霉素鉀工業(yè)鹽：企業(yè)A(批號(hào)：1205139-3)，企業(yè)B(批號(hào)：280113012096)，企業(yè)C(批號(hào)：231301215)，企業(yè)D(批號(hào)：1221305141)。

1.2 主要儀器及試劑 Waters 2695高效液相色譜儀，2487紫外檢測(cè)器，Waters公司；AX205分析天平，梅特勒公司；Milli Q超純水儀，美國(guó)Millipore公司；TU-1901紫外可見分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限公司；FT-IR550傅立葉變換紅外光譜儀，美國(guó)NICOLET公司；MET-50智能恒溫加熱儀，天大天發(fā)科技公司；CX41RF顯微鏡，OLYMPUS；CS101-2電熱鼓風(fēng)干燥箱，重慶四達(dá)公司；SPX-250B-Z生化培養(yǎng)箱，上海博迅實(shí)業(yè)公司；GWF-8JA微粒分析儀，天津天河分析儀器公司；HTY-601集菌儀，集菌培養(yǎng)器，杭州泰林生物技術(shù)設(shè)備公司；YB-2型澄明度檢測(cè)儀，天津大學(xué)精密儀器廠。甲醇(Merck公司，色譜純)；磷酸二氫鉀，冰醋酸(國(guó)藥集團(tuán)，分析純)；液狀石蠟(國(guó)藥集團(tuán)，化學(xué)純)；青霉素酶，細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，鱟試劑，細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水(中國(guó)食品藥品檢定研究院)。

1.3 方法 依據(jù)《中國(guó)獸藥典》(2010年版)中青霉素鉀質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)8批樣品進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 性狀 8批樣品均為白色結(jié)晶性粉末，符合獸藥典規(guī)定。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在白熾燈下肉眼可見企業(yè)A和D生產(chǎn)的青霉素鉀原料藥和工業(yè)鹽均為細(xì)膩的結(jié)晶性粉末，但原料藥的亮度比工業(yè)鹽更高。企業(yè)B和C的工業(yè)鹽和原料藥顏色基本一致，但工業(yè)鹽中的大顆粒更多。2.2 鑒別 依獸藥典鑒別項(xiàng)下(1)和(2)兩個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目對(duì)8批樣品的檢測(cè)結(jié)果表明：(1)8批樣品在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，主峰的保留時(shí)間均與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致；(2)8批樣品的紅外吸收測(cè)定結(jié)果均符合獸藥典規(guī)定。

2.3 檢查 對(duì)8批樣品進(jìn)行吸光度、結(jié)晶性、溶液澄清度與顏色、青霉素聚合物、干燥失重、不溶性微粒、酸堿度、有關(guān)物質(zhì)、細(xì)菌內(nèi)毒素、可見異物與無菌共10個(gè)項(xiàng)目的檢測(cè)，均符合獸藥典規(guī)定，且無明顯差異。具體結(jié)果如下：2.3.1 青霉素聚合物、干燥失重、不溶性微粒、酸堿度、有關(guān)物質(zhì)檢測(cè) 結(jié)果均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，見表1。其中，青霉素聚合物的測(cè)定結(jié)果均在限度范圍內(nèi)，但同一企業(yè)工業(yè)鹽的數(shù)值均高于原料藥。不溶性微粒檢測(cè)結(jié)果顯示，企業(yè)A、B和C的工業(yè)鹽中10 μm及10 μm以上微粒數(shù)含量均高于原料藥。

表1 青霉素聚合物、干燥失重、不溶性微粒、酸堿度、有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果

2.3.2 吸光度測(cè)定 在280～325 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，吸光度均不大于0.10，在264 nm的波長(zhǎng)處均有最大吸收，4批工業(yè)鹽測(cè)定值均大于4批原料藥，但吸光度值均在0.8～0.88規(guī)定范圍內(nèi)(表2)，以企業(yè)A提供樣品為例，其紫外吸收結(jié)果見圖1。2.3.3 結(jié)晶性檢查 采用偏光顯微鏡法，實(shí)驗(yàn)中稱取適量樣品，分別加1mL液狀石蠟使晶粒浸沒其中，由于晶體具有光學(xué)各向異性，在偏光顯微鏡下觀察呈現(xiàn)雙折射和消光位的晶體光學(xué)性質(zhì)。通過顯微鏡放大觀察，四家企業(yè)的工業(yè)鹽中長(zhǎng)度在200 μm以上的晶體顆粒均多于原料藥。結(jié)果見圖2。

表2 吸光度測(cè)定264 nm處最大吸收值

圖1 企業(yè)A樣品的紫外吸光度測(cè)定

2.4 含量測(cè)定 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定青霉素鉀含量按干燥品計(jì)算，不得少于96.0%。利用高效液相色譜法測(cè)定

8批供試品含量，經(jīng)計(jì)算含量均符合規(guī)定，結(jié)果見表3。

圖2 結(jié)晶性檢查結(jié)果

企業(yè)樣品含量/%A原料藥100.9工業(yè)鹽99.5B原料藥100.3工業(yè)鹽100.0C原料藥100.1工業(yè)鹽100.2D原料藥100.5工業(yè)鹽100.7

3 討論

依據(jù)《中國(guó)獸藥典》(2010年版)中青霉素鉀的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)四家青霉素原料藥生產(chǎn)企業(yè)提供的青霉素鉀工業(yè)鹽和青霉素鉀原料藥進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果均符合規(guī)定；但檢測(cè)結(jié)果無法用以區(qū)分青霉素鉀工業(yè)鹽和青霉素鉀原料藥。錢志平[3]在1995年曾指出青霉素工業(yè)鹽的性狀、雜質(zhì)含量、無菌、澄明度等控制項(xiàng)目無法達(dá)到藥用青霉素標(biāo)準(zhǔn)。但是，隨著生產(chǎn)技術(shù)水平的提高，青霉素聚合物、含量、有關(guān)物質(zhì)、無菌、細(xì)菌內(nèi)毒素等質(zhì)量控制關(guān)鍵項(xiàng)目，依照現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)和限度已無法對(duì)青霉素鉀工業(yè)鹽和原料藥加以區(qū)分。

工業(yè)鹽作為藥用中間體，不同企業(yè)在生產(chǎn)中，質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)可能略有差異。在青霉素生產(chǎn)過程中，脫色和洗滌等工藝可以提高產(chǎn)品透明度、降低雜質(zhì)含量，且脫色中活性炭的粒度大小和濾速控制均會(huì)對(duì)產(chǎn)品外觀性質(zhì)產(chǎn)生影響[6]。本實(shí)驗(yàn)的上述發(fā)現(xiàn)說明青霉素鉀工業(yè)鹽和原料藥在性狀、顆粒大小、不溶性微粒、聚合物及吸光度等方面存在差異，但由于樣品數(shù)量有限、企業(yè)之間生產(chǎn)工藝及不同批次產(chǎn)品之間可能存在不同，需要檢測(cè)更多樣品才能核實(shí)、確認(rèn)兩者的“差異點(diǎn)”；另外，可根據(jù)藥物的性質(zhì)和生產(chǎn)工藝特點(diǎn)，尋找其他方法對(duì)兩者進(jìn)行鑒別。張秀英等[7]曾利用色差計(jì)對(duì)注射用青霉素溶液進(jìn)行比較；曹艷玲[8]和楊井蘭[9]等應(yīng)用氣相色譜法分別測(cè)定了青霉素鉀和青霉素鈉中正丁醇、乙酸乙酯和乙酸丁酯等殘留溶媒；劉廣楨等[10]應(yīng)用X射線衍射分析方法對(duì)注射用青霉素鈉進(jìn)行分析鑒別。因此，為保證成品藥的質(zhì)量安全，建議對(duì)現(xiàn)行控制標(biāo)準(zhǔn)和限度進(jìn)行修訂或制定新的控制項(xiàng)目，以區(qū)分青霉素鉀工業(yè)鹽和原料藥。

[1] 吳國(guó)員，查舜行. 青霉素生產(chǎn)概述[J]. 上海醫(yī)藥情報(bào)研究，1997，45(2)：26-33.

[2] 張翼飛. 青霉素提煉新工藝在青霉素G生產(chǎn)過程中的應(yīng)用[J]. 科技視界，2010，8，37-38.

[3] 錢志平. 淺談青霉素工業(yè)鹽的辨別[J]. 中國(guó)獸藥雜志，1995，29(1)：37-38.

[4] 侯及波，包溫奎. 獸醫(yī)注射用青霉素鉀質(zhì)量檢測(cè)[J]. 青海畜牧獸醫(yī)雜志，2001，31(3)：25.

[5] 中國(guó)獸藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)獸藥典[S]. 二〇一〇年版. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2011：121-122.

[6] 趙素霞，劉建輝，紀(jì)愛民，等.青霉素生產(chǎn)中活性炭粒度與濾速的關(guān)系探討[J]. 河北化工，2011，34(6)：25-28.

[7] 張秀英，陸連壽. 色差計(jì)在注射用青霉素溶液顏色判定中的應(yīng)用[J]. 中國(guó)獸藥雜志，2010，44(2)：29-30.

[8] 曹艷玲，劉學(xué)良. 頂空氣象色譜法測(cè)定注射用青霉素鈉中殘留溶媒[J]. 黑龍江醫(yī)藥，2007，20(4)：302-303.

[9] 楊井蘭，李新華. 氣相色譜法測(cè)定青霉素鉀鹽殘留溶媒[J]. 黑龍江醫(yī)藥，2005，18(2)：34-35.

[10]劉廣楨，胡文紅，楊娜. 注射用青霉素鈉的X射線衍射分析[J]. 中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2011，28(1)：76-78.

(編輯：李文平)

Tests Comparing of Benzylpenicillin Potassium Industry Salt and Benzylpenicillin Potassium Active Pharmaceutical Ingredient by Methods in Chinese Veterinary Pharmacopoeia

XU Yuan，YU Li-na，HAN Ning-ning，GONG Xu-hao，WANG Jing-wen，HAO Li-hua，ZHAO Hui*

(ChinaInstituteofVeterinaryDrugControl，Beijing100081，China)

In order to distinguish between benzylpenicillin potassium industry salt and benzylpenicillin potassium active pharmaceutical ingredient, 4 bathes of industry salt samples and 4 bathes of active pharmaceutical ingredient samples offered by 4 different veterinary drug manufacturers respectively were identified according to quality standards in Chinese Veterinary Pharmacopoeia 2010 version. Results of those 8 batches of samples were all in compliance with the standards, however, finding no distinguish differences between industry salt and active pharmaceutical ingredient, which might indicate that quality standard of benzylpenicillin potassium need to be improved in order to enhance quality control of the finished drug-benzylpeninicillin potassium for injection.

benzylpenicillin potassium；industry salt；active pharmaceutical ingredient；Chinese Veterinary Pharmacopoeia

徐嫄，碩士，從事抗生素檢驗(yàn)及檢測(cè)方面工作。

2015-11-14

A

1002-1280 (2016) 01-0056-05

S859.79