徐永龍丁金旺周榮璟何 偉彭 友張 臥羅中堯潘 鋼項晶晶羅定存葉柳青

HBME-1、Galectin-3及34βE12對甲狀腺微小乳頭狀癌的鑒別診斷價值

徐永龍1丁金旺2周榮璟3何 偉2彭 友2張 臥2羅中堯2潘 鋼2項晶晶2羅定存2葉柳青3

甲狀腺微小乳頭狀癌；HBME-1；Galectin-3；34βE12；鑒別診斷

甲狀腺微小乳頭狀癌（papillary thyroid microcarcinoma，PTMC）是指腫瘤最大徑≤1.0cm的乳頭狀癌，也是現(xiàn)階段45歲以上人群最好發(fā)的甲狀腺惡性腫瘤[1]。由于體積較小，發(fā)病隱匿，部分PTMC鏡下表現(xiàn)缺乏典型的乳頭狀癌形態(tài)特征，因此與某些甲狀腺良性病變（如乳頭狀增生）不易區(qū)分，尤其是甲狀腺良性病變比較復雜、細胞數(shù)目和層次較多、核有一定異型時與PTMC鑒別尤為困難。隨著免疫組織化學（IHC）技術的發(fā)展和應用，有必要尋找一種敏感性高、特異性強、能夠鑒別甲狀腺腫瘤良惡性的標記物來輔助臨床病理診斷。既往文獻[2-4]報道，人骨髓內(nèi)皮細胞標記物（HBME-1）、半乳糖凝集素3（Galectin-3）及高分子量角蛋白（34βE12）對鑒別甲狀腺乳頭狀癌與良性疾病具有重要價值，但迄今在PTMC的研究并不多。為進一步認識PTMC、減少其誤診和漏診，本實驗采用IHC技術檢測HBME-1、Galectin-3及34βE12在189個PTMC病灶和106個甲狀腺良性病變中的表達狀況，并探討其對PTMC鑒別診斷的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取杭州市第一人民醫(yī)院腫瘤外科2008年8月—2014年8月經(jīng)手術治療的甲狀腺良惡性疾病患者290例，入選病例臨床資料完整，病理診斷明確，術前均未接受任何處理。依據(jù)2004 年WHO內(nèi)分泌腫瘤病理分類與診斷標準[5]分為PTMC組和甲狀腺良性疾病組（對照組）。PTMC組184例，男26例，女158例，年齡19～72歲，平均（47.47± 9.75）歲，病程（18.80±27.23）個月，PTMC病灶共189個，腫瘤直徑0.1～1cm，伴有頸部淋巴結轉(zhuǎn)移54例。對照組106例，男20例，女86例，年齡28～74歲，平均（46.88±9.58）歲，病程（27.47±61.08）個月，其中結節(jié)性甲狀腺腫78例、甲狀腺腺瘤16例，橋本氏甲狀腺炎10例，亞急性甲狀腺炎2例。兩組性別、年齡差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。所有患者對手術及病理檢查均知情同意。

1.2 方 法 所有標本均來自于手術切除的甲狀腺良惡性腫瘤的新鮮組織，均經(jīng)10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，分別進行蘇木素-伊紅（HE）和免疫組化染色后光鏡觀察。其中免疫組織化學（IHC）采用En VisionTM二步染色法，DAB顯色，蘇木精復染，梯度乙醇脫水，中性樹膠封固。用已知陽性切片作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。免疫組化主要試劑HBME-1鼠抗人單克隆抗體、Galectin-3鼠抗人單克隆抗體及34βE12鼠抗人單克隆抗體均購自Dako公司，并嚴格按照試劑盒說明書操作。對可疑病例進行反復檢測。

1.3 結果判斷 免疫組織化學染色結果由兩名主治以上醫(yī)生獨立閱片并記錄。本研究以甲狀腺腫瘤細胞出現(xiàn)棕黃色～棕褐色顆粒且染色強度高于背景非特異性染色為陽性細胞。以陽性細胞所占比例和著色強度為依據(jù)，按半定量方法分級如下[6]：無明顯陽性細胞為陰性（-），陽性細胞數(shù)＜25%為弱陽性（+），陽性細胞數(shù)＜50%為中度陽性（++），陽性細胞數(shù)＞50%為強陽性（+++），本研究將（+）、（++）及（+++）均計為陽性表達。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS19.0統(tǒng)計軟件分析處理數(shù)據(jù)。計量資料（年齡）采用t檢驗；兩組病例的性別構成及陽性率的比較采用成χ2檢驗。采用MedCalc 14.8.1軟件制作受試者工作特征曲線（ROC）及計算曲線下面積（AUC）。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

表1 兩組患者HBME-1、Galectin-3及34βE12表達陽性率比較

2 結果

2.1 兩組患者HBME-1、Galectin-3及34βE12表達陽性率比較 HBME-1陽性表達主要見于細胞膜，少數(shù)可伴有細胞質(zhì)著色（插頁圖1）；Galectin-3陽性表達主要見于細胞質(zhì)，部分可伴有細胞核著色（插頁圖2）；34βE12陽性表達則主要見于細胞質(zhì)和細胞膜（插頁圖3）。HBME-1、Galectin-3及34βE12在PTMC中的表達陽性率分別高達89.95%、95.23%、93.65%，多數(shù)為中等以上強度（++～+++）表達，且三者同時表達陽性的比例高達79.89%；而HBME-1、Galectin-3及34βE12在甲狀腺良性病變患者的陽性率分別為16.98%、28.3%、18.87%，多數(shù)為弱陽性（+）表達，且無三者同時表達陽性的病例。兩組HBME-1、Galectin-3及34βE12表達差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001），見表1。

2.2 HBME-1、Galectin-3及34βE12對PTMC的鑒別診斷效能 以單獨檢測HBME-1、Galectin-3及34βE12作為PTMC的判斷標準，計算各指標診斷PTMC的靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值和準確度，三者中以Galectin-3的敏感度最佳，高達95.23%，HBME-1和Galectin-3則稍低（89.95%、93.65%）；特異度上，Galectin-3最低（71.70%），HBME-1最高（83.02%），34βE12居中（81.13%）；就準確度而言，三者比較接近，分別為87.45%、86.78%、89.15%。見表2。

通過制作受試者工作特征曲線（ROC）后發(fā)現(xiàn)，HBME-1、Galectin-3及34βE12對鑒別PTMC與甲狀腺良性疾病具有較好的診斷價值（插頁圖4），進一步分析數(shù)據(jù)獲得各指標的AUC分別為0.891、0.914、0.932，見表3。

表2HBME-1、Galectin-3及34βE12在PTMC與甲狀腺良性疾病的鑒別診斷效能（%）

表3 HBME-1、Galectin-3及34βE12診斷PTMC 的ROC曲線下面積

3 討論

甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）是甲狀腺癌中最常見的組織學亞型，近20年甲狀腺癌發(fā)病率不斷飆升，但增長的主要是乳頭狀癌，尤其是直徑≤1cm的甲狀腺微小乳頭狀癌（papillary thyroid microcarcinoma，PTMC）[1]，因為體積小，病灶隱匿，在大體檢查時常被漏掉。目前臨床上診斷的主要依據(jù)是光鏡下的乳頭狀結構和特征性的細胞核形態(tài)，但并非所有PTMC都具有典型的鏡下改變，尤其在合并某些良性甲狀腺疾病背景時診斷常常面臨困難。目前研究[2-4]顯示，人骨髓內(nèi)皮細胞標記物（HBME-1）、半乳糖凝集素-3（Galectin-3）以及高分子量角蛋白（34βE12）在起源于濾泡的甲狀腺乳頭狀癌中高表達，在甲狀腺良性疾病中弱表達或不表達，推測其可作為診斷甲狀腺微小乳頭狀癌的標志物。本研究著重探討 HBME-1、Galectin-3及 34βE12對鑒別PTMC與甲狀腺良性疾病的臨床價值。

HBME-1是間皮細胞表面微絨毛的一種抗原成分，最初發(fā)現(xiàn)于惡性間皮瘤，近來逐漸被用于甲狀腺惡性病變的診斷。Ozolins等[2]發(fā)現(xiàn)96%的PTC表達HBME-1，但在良性甲狀腺組織無表達。Abd-El Raouf研究[3]也進一步證實，HBME-1在PTC（包括經(jīng)典與濾泡亞型PTC）中的表達顯著高于良性甲狀腺疾病。在最近一項包含PTMC的研究[7]中，HBME-1對診斷PTC的敏感度為86%，特異度為100%，如聯(lián)合其他指標則診斷準確度更高。本研究發(fā)現(xiàn)HBME-1在189個PTMC病灶中的表達陽性率為89.95%，在良性病變中大多數(shù)為陰性，僅少數(shù)弱陽性表達，這一結論與以往的文獻報道相一致[7]，提示HBME-1是診斷PTMC較好的分子標記物。

Galectin-3是β-半乳糖苷結合蛋白，在調(diào)節(jié)細胞生長、黏附、凋亡和惡變等過程中發(fā)揮重要作用。文獻[3，7]報道，Galectin-3在正常甲狀腺組織及結節(jié)性甲狀腺腫、腺瘤等良性病變中表達較少，而在PTC的細胞漿中幾乎均有表達。Ma等[7]對43例PTC（包括經(jīng)典型、濾泡亞型和微小癌）和16例良性甲狀腺組織的研究發(fā)現(xiàn)，Galectin-3在甲狀腺良惡性疾病中的靈敏度為95.3%，特異度為100%。本研究中，Galectin-3在 PTMC中的表達陽性率最高，為95.23%，且多數(shù)為中等以上強度（++～+++）表達，ROC曲線分析顯示其對鑒別甲狀腺良惡性病變的AUC值達0.914，說明Galectin-3在PTMC中有較強的診斷價值。值得注意的是，本研究還發(fā)現(xiàn)Galectin-3在甲狀腺良性病變中也有28.3%存在弱陽性（+）表達，Coli等[8]認為甲狀腺良性病變中Galectin-3的表達說明該病變具有分化為癌（主要為甲狀腺乳頭狀癌）的趨勢，這進一步印證了Galectin-3在PTMC發(fā)生發(fā)展中的作用，因此筆者建議對該部分病例應加強隨訪與監(jiān)測。

高分子量角蛋白（34βE12）是前列腺基底細胞的特異性標記物，其在前列腺及乳腺良、惡性病變鑒別診斷，尿路上皮癌與前列腺癌鑒別診斷及肺神經(jīng)內(nèi)分泌癌與非神經(jīng)內(nèi)分泌癌鑒別診斷中具有一定價值[9]。目前應用于甲狀腺乳頭狀癌的研究并不多，而在PTMC方面則未見研究報道。Hashimoto等研究[4]發(fā)現(xiàn)大多數(shù)PTC中34βE12呈陽性表達，而僅有極少數(shù)甲狀腺良性病變呈陽性表達，34βE12在PTC中的靈敏度為82.5%，特異度為100%，診斷準確度為92.0%。國內(nèi)林茂華等[10]研究顯示，86例PTC中84例呈中度以上強度的陽性表達（++～+++），60例濾泡性腺瘤中僅有6例呈中度以下強度的陽性表達（+～++），兩者之間具有顯著的統(tǒng)計學差異。本研究顯示，34BE12對鑒診斷別PTMC與甲狀腺良性疾病的AUC為0.932，高于HBME-1和Galectin-3，其診斷的靈敏度為93.65%，特異度81.13%，陽性預測值89.95%，陰性預測值97.76%，準確度89.15%。因此，筆者認為34βE12也可以作為診斷PTMC的重要標記物。

綜上所述，HBME-1、Galectin-3及34βE12在PTMC的表達顯著高于良性病變，其對診斷PTMC的敏感性和特異性均較高，可以作為臨床上診斷PTMC比較理想的免疫組化標志物，可在臨床病理診斷中推廣應用。

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（收稿：2015-07-01 修回：2015-08-20）

1浙江省松陽縣人民醫(yī)院內(nèi)科（松陽 323400）；2杭州市第一人民醫(yī)院（南京醫(yī)科大學附屬杭州醫(yī)院）腫瘤外科（杭州310006）；3杭州市腫瘤醫(yī)院病理科（杭州310002）

丁金旺，Tel：0571-56006981；E-mail：zjlsdjw@163.com