歐陽(yáng)方丹 郭勁霞 劉蓉

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結(jié)直腸癌的分子生物學(xué)診斷進(jìn)展研究

歐陽(yáng)方丹 郭勁霞 劉蓉

【摘要】近年來人們對(duì)于結(jié)直腸癌的關(guān)注度隨著其發(fā)病率的逐年上升而逐漸增長(zhǎng)。早期的診斷是減少病情惡化、死亡的關(guān)鍵，本文對(duì)結(jié)直腸癌的分子生物學(xué)診斷進(jìn)展進(jìn)行綜述，為當(dāng)前的結(jié)直腸癌臨床診斷工作提供借鑒意義。

【關(guān)鍵詞】結(jié)直腸癌；分子標(biāo)志物；DNA；RNA；蛋白質(zhì)

作為當(dāng)前我國(guó)3大發(fā)病率最高的腫瘤之一，結(jié)直腸癌成為人們當(dāng)前生活中不得不加以防范的疾?。?］。隨著臨床診斷技術(shù)的不斷發(fā)展，當(dāng)前結(jié)直腸的臨床診斷、預(yù)防、控制得到了進(jìn)一步的發(fā)展。其中，分子生物學(xué)標(biāo)志物在結(jié)直腸癌臨床診斷中的進(jìn)展迅速，其較高的敏感性、特異性受到人們的認(rèn)可，成為當(dāng)前結(jié)直腸癌臨床診斷的主要方式。

1 糞便分子標(biāo)志物檢測(cè)

1.1 蛋白質(zhì)檢測(cè)

在結(jié)直腸癌的臨床診斷中可通過對(duì)患者糞便、血液中分子標(biāo)志物進(jìn)行檢查，其中，糞便檢測(cè)具有無創(chuàng)的顯著特點(diǎn)，主要通過DNA、RNA、蛋白質(zhì)3種分子標(biāo)志物進(jìn)行診斷［2］。在DNA、RNA、蛋白質(zhì)3種標(biāo)志物中，蛋白質(zhì)是第一個(gè)用于糞便結(jié)直腸癌檢測(cè)的臨床分子標(biāo)志物，且一直沿用于當(dāng)前的臨床診斷中。鈣衛(wèi)蛋白與肝珠蛋白是當(dāng)前兩種主要蛋白標(biāo)志物，鈣衛(wèi)蛋白診斷敏感性為36%、特異性為91%；而肝珠蛋白的診斷敏感性為92%、特異性則為98%，但是聯(lián)合便潛血檢測(cè)器可將敏感性提高至100%。但是由于蛋白質(zhì)會(huì)在糞便中出現(xiàn)不同程度的降解，因而容易形成假陰性、影響準(zhǔn)確率。

1.2 RNA檢測(cè)

當(dāng)前，醫(yī)學(xué)上已知的RNA標(biāo)志物主要包括FLNA、CKS 2、氧化酶2及金屬蛋白酶7等多種基因轉(zhuǎn)錄中。目前，臨床上對(duì)于RNA標(biāo)志物相對(duì)較少，具有較高的研究?jī)r(jià)值。相關(guān)研究顯示［3］，在結(jié)直腸癌患者的糞便檢測(cè)中，以環(huán)氧化酶2為診斷標(biāo)志物的診斷敏感性為87%，特異性高達(dá)100%；用包含9個(gè)基因表達(dá)式的寡核昔酸微陣列分析、檢測(cè)，敏感性為78%，特異性也高達(dá)100%，具有較高的臨床疾病診斷前景。

1.3 DNA檢測(cè)

DNA診斷可利用K-ras突變基因與DNA甲基化進(jìn)行，當(dāng)前的基因突變檢查已從原來的單個(gè)標(biāo)志物發(fā)展到多個(gè)突變的DNA標(biāo)志物聯(lián)合診斷的方式。臨床上通常使用Pre Gen Plus試劑盒分析基因的突變情況，診斷敏感性、特異性均高達(dá)90%以上。為提高臨床診斷的準(zhǔn)確性通常需要增加檢測(cè)標(biāo)志物數(shù)目、升級(jí)配套的測(cè)序技術(shù)，因此通常會(huì)產(chǎn)生較高的診斷成本，在擴(kuò)大應(yīng)用范圍方面具有一定的局限性。DNA甲基化具有調(diào)控機(jī)制，在正常的情況下只對(duì)基因轉(zhuǎn)錄活性產(chǎn)生影響，并未涉及甲基化、Cp G島甲基化。當(dāng)前的主要采用檢測(cè)Cp G島的高甲基化診斷結(jié)直腸癌，當(dāng)Cp G島出現(xiàn)甲基化時(shí)可對(duì)患者的癌基因、細(xì)胞周期調(diào)控基因等的表達(dá)帶來一定的抑制作用［4］。為提高臨床診斷的準(zhǔn)確率也通常采用2～7個(gè)種甲基化標(biāo)志物聯(lián)合或者甲基化標(biāo)志物聯(lián)合糞便基因突變的方式。其中，波形蛋白基因的甲基化聯(lián)合DNA完整性分析的診斷敏感性通常在在83%～88%，而特異性也高達(dá)82%以上。但是，糞便診斷也存在檢測(cè)方法復(fù)雜、成本高昂、轉(zhuǎn)變、儲(chǔ)存困難等問題，一定程度上限制糞便標(biāo)志物檢測(cè)的發(fā)展。

2 血液分子標(biāo)志物檢測(cè)

2.1 DNA檢測(cè)

除糞便檢測(cè)之外，血液檢測(cè)也是當(dāng)前結(jié)直腸臨床診斷的一種主要的方式。與糞便檢測(cè)一樣，血液DNA最早也從K-ra、基因的點(diǎn)突變方面入手。但是與糞便不同的是，聯(lián)合多個(gè)突變標(biāo)志物、甲基化標(biāo)志物的方法無法提高臨床結(jié)直腸癌診斷的敏感性。通常情況下，對(duì)相同患者進(jìn)行疾病診斷，血液NDA診斷敏感性要低于糞便DNA標(biāo)志物檢測(cè)的敏感性。

2.2 RNA檢測(cè)

當(dāng)前，血液RNA標(biāo)志物的研究主要圍繞信使RNA（mRNA）進(jìn)行，主要包括癌胚抗原、細(xì)胞角蛋白及人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶等多個(gè)標(biāo)志物［5］。使用單個(gè)mRNA標(biāo)志物進(jìn)行診斷，其敏感性通常在70%左右，而采用聯(lián)合檢測(cè)敏感性可高達(dá)89%。因?yàn)槿梭w中大多數(shù)部位的血漿中都可檢測(cè)到L 6 mRNA、GCC mRNA及hTERT 3種標(biāo)志物。因此，臨床檢測(cè)通常以上述3種標(biāo)志物為主要的RNA標(biāo)志物，其敏感性通常在79%～92%，特異性則在90%以上，最高可達(dá)100%。隨著臨床分子檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展，含有18～25個(gè)核昔酸小分子RNA在臨床結(jié)直腸癌臨床診斷中的作用也日益凸顯［6］。小分子RNA臨床診斷的敏感性在89%以上，具有一定的應(yīng)用價(jià)值，但是由于小分子RNA對(duì)結(jié)直腸癌患者的特異性相對(duì)較差，因此在推廣方面受到了制約。

2.3 蛋白質(zhì)檢測(cè)

癌胚抗原、糖類抗原是當(dāng)前結(jié)直腸癌血液檢測(cè)中兩種主要的蛋白質(zhì)標(biāo)志物。較于DNA檢測(cè)，血液蛋白質(zhì)的檢測(cè)操作更為簡(jiǎn)單，獲取檢驗(yàn)結(jié)果的時(shí)間更快［7］。癌胚抗原是一種最早應(yīng)用與結(jié)直腸癌臨床中診斷的蛋白質(zhì)標(biāo)志物，且一直沿用至今。在結(jié)直腸癌D期患者的臨床診斷中，由于其敏感性、敏感性可高達(dá)90%以上，因此被廣泛用于結(jié)直腸癌患者的預(yù)后監(jiān)測(cè)方面。CA 19-9、CA 195及CA 72-4等是較為常用的糖類抗原標(biāo)志物，但是診斷敏感性與特異性均相對(duì)較低，通常采用將癌胚抗聯(lián)合糖類抗原的方式檢測(cè)，可提高疾病診斷的敏感性、特異性［8］。

3 討論

結(jié)直腸癌的臨床診斷、防治是一項(xiàng)任重而道遠(yuǎn)的工作。當(dāng)前分子學(xué)診斷技術(shù)的應(yīng)用給結(jié)直腸癌的診斷、治療帶來了一定的促進(jìn)作用，但是同時(shí)也存在一些不利因素。因此，應(yīng)對(duì)分子學(xué)標(biāo)志物進(jìn)行不斷的研究，以多標(biāo)志物聯(lián)合診斷、發(fā)掘新的標(biāo)志物、創(chuàng)新檢測(cè)技術(shù)作為突破點(diǎn)，不斷提高分子學(xué)診斷的臨床診斷價(jià)值。

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【中圖分類號(hào)】R753.3+7

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1674-9308（2016）16-0025-03

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2016.16.015

作者單位：湖南省益陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校生物化學(xué)教研室，湖南 益陽(yáng)413000

Research on Molecular Biological Diagnosis of Colorectal Cancer

OUYANG Fangdan GUO Jinxia LIU Rong Department of Biochemistry，Yiyang Medical College， Yiyang Hu'nan 413000， China

［Abstract］In recent years， the attention of colorectal cancer has increased gradually with the incidence of colorectal cancer.Early diagnosis is the key to reducing the condition of the disease and the death of the disease，This article reviews the progress of molecular biology diagnosis of colorectalcancer，To provide reference for the current clinical diagnosis of colorectal cancer.

［Key words］Colorectal cancer， Molecular marker， DNA， RNA， Protein