劉麗梅

烤瓷冠基底合金影響人牙齦成纖維細(xì)胞MMP-2、MMP-13表達(dá)實(shí)驗(yàn)探討

劉麗梅

目的 觀察不同種類烤瓷牙金屬基底冠浸提液對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞中 MMP-2、MMP-13表達(dá)水平的影響。方法 制備純鈦、鈷鉻、鎳鉻和金合金提取液，通過組織塊改良的方法來對(duì)牙齦周圍的纖維細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)過浸提液浸泡之后，分別收集樣本上的細(xì)胞清液，作為MMP-13表達(dá)水平的測(cè)定樣本，測(cè)定方法為ILISA測(cè)定法。結(jié)果鈷鉻合金和鎳鉻合金MKMP-13表達(dá)水平高于陰性對(duì)照組和其他實(shí)驗(yàn)組，各項(xiàng)指標(biāo)對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；金、純鈦合金組MMP-13表達(dá)水平與陰性對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 鈷鉻合金和鎳鉻合金MKMP-13表達(dá)水平較高，一定程度上會(huì)損傷牙齦成纖維細(xì)胞；金、純鈦合金生物相容性比較好。

金屬蛋白本酶；金屬浸提液；細(xì)胞培養(yǎng)；牙齦成纖維細(xì)胞

金屬烤瓷修復(fù)體是一種被廣泛采用的金屬修復(fù)材料，既具有瓷的美觀性也具有較強(qiáng)的延展性[1］。然而一部分修復(fù)體由于材料本身的性質(zhì)會(huì)使患者出現(xiàn)齦緣灰染、牙齦炎癥等方面的問題。需要對(duì)不同修復(fù)體材料對(duì)患者牙周組織的影響進(jìn)行評(píng)估。

牙齦組織主要是由牙齦成纖維細(xì)胞組成，成纖維細(xì)胞的健康對(duì)于患者牙周組織的修復(fù)具有重要意義?；颊呓?jīng)過修復(fù)體移植手術(shù)后，須要通過牙齦成纖維細(xì)胞來生成金屬蛋白酶，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的生成，尤其是在術(shù)后輕微炎癥的刺激下，金屬酶的合成速度有所提升，促進(jìn)牙周組織快速?gòu)?fù)原[2-3］。

由此可知，金屬基底冠材料的選用需要考慮到材料本身對(duì)于金屬蛋白酶分泌作用的影響，從而斷定金屬基底冠材料是否適合患者并降低矯正手術(shù)的副作用。牙齦成纖維細(xì)胞通過分泌、增殖、遷移膠原來修復(fù)受損的牙周組織。

1 材料和方法

1.1主要試劑和儀器

離心機(jī)、TS開型酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀、倒置顯微鏡、二氧化碳培養(yǎng)孵箱、鼠抗人角蛋白單克隆抗體、鼠抗人波形絲蛋白單克隆抗體、ELISA MMP-13試劑盒、ELISA MMP-2試劑盒、金合金、純鈦、鈷鉻合金、鎳鉻合金。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

選取一副健康的牙齦緣組織塊，將其形狀修剪為1 mm2大小，選取1 ml消化時(shí)間為30 min的胰蛋白酶放入EP管中，加入組織塊，將EP管置入一氧化碳孵箱中，調(diào)整一氧化碳含量至5%，溫度37℃，經(jīng)過12 h后，加入DMEM液，起到組織塊鋪滿瓶底，將組織塊平均分為4份，加入金合金、純鈦、鈷鉻合金、鎳鉻合金液，繼續(xù)培養(yǎng)7天，對(duì)合金析出液進(jìn)行收集[4-5］。對(duì)所采集到實(shí)驗(yàn)樣本進(jìn)行分組，A組為實(shí)驗(yàn)組；B組為鎳鉻合金組、C組為鈷鉻合金組、D組為金合金組；DMEM培養(yǎng)液為隨性對(duì)照組，即E組。采用ELISA MMP-13試劑盒在檢測(cè)所選取的上清液，用檢測(cè)得到的OD值來制定標(biāo)準(zhǔn)曲線，表達(dá)出不同OD值對(duì)應(yīng)的濃度。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

利用SPSS17.0程式來分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，檢驗(yàn)方法為SNK-T檢驗(yàn)法，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

經(jīng)過6h反應(yīng)后鎳鉻合金、鈷鉻合金、純鈦合金、金合金MMP-13表達(dá)水平分別為（2.179±0.068）ng/ml、（2.048±0.052）ng/ml、（1.937±0.014）ng/ml、（1.971±0.006）ng/ml；經(jīng)過24h反應(yīng)后鎳鉻合金、鈷鉻合金、純鈦合金、金合金MMP-13表達(dá)水平分別為（3.286±0.1521）ng/ml、（3.156±0.084）ng/ml、（1.964±0.026）ng/ml、（1.984±0.017）ng/ml。

相對(duì)于鈷鉻合金、鎳鉻合金，金合金、純鈦合金組具有更高的MMP-13表達(dá)水平。延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間至24 h，所得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與6 h反應(yīng)結(jié)果相同。而鈷鉻合金、鎳鉻合金隨著適應(yīng)時(shí)間的增加，MMP-13表達(dá)水平也隨之增加。

3 討論

在MMP-13表達(dá)水平方面，牙齦纖維細(xì)胞自身就可以生成一定量的MMP-13，進(jìn)一步降解口腔中的原纖維細(xì)胞，尤其是在鈷鉻合金和鎳鉻合金的催化作用下，陰性對(duì)照比與MMP-13水平得到增強(qiáng)，而且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，變化程度越明顯[6-8］。

綜上所述，鎳鉻合金和鈷鉻合金可以上調(diào)人牙齦成纖維細(xì)胞MMP-13表達(dá)水平，而純鈦和金合金對(duì)此影響不明顯。

[1]胡靜.烤瓷冠基底合金影響人牙齦成纖維細(xì)胞MMP-2、MMP-13表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D］. 錦州：遼寧醫(yī)學(xué)院，2012：13-14.

[2]胡靜，黃克強(qiáng)，杜雅，等.烤瓷牙基底冠合金影響人牙齦成纖維細(xì)胞MMP-13表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[J］.中國(guó)醫(yī)學(xué)工程，2012，20（4）：16-18.

[3]劉淼，黃克強(qiáng)，趙芳英，等.金屬基底合金浸提液影響人牙齦成纖維細(xì)胞MMP-1、MMP-3表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[J］.遼寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，31（3）：203-205.

[4]杜雅.烤瓷冠基底合金影響人牙齦成纖維細(xì)胞分泌前列腺素E_2及環(huán)氧合酶-2的實(shí)驗(yàn)研究[D］. 錦州：遼寧醫(yī)學(xué)院，2012：4-5.

[5]蘆琳.烤瓷冠基底金屬浸提液對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞uPA和其抑制劑PAI-Ⅰ表達(dá)的影響[D］. 錦州：遼寧醫(yī)學(xué)院：53-54.

[6]劉婷.種烤瓷冠基底合金浸提液對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞細(xì)胞周期及Bcl-2和Bax表達(dá)的影響[D］. 錦州：遼寧醫(yī)學(xué)院，2013：28-29.

[7]劉婷，黃克強(qiáng)，李志剛，等.4種烤瓷冠基底合金浸提液影響人牙齦成纖維細(xì)胞中Bcl-2和Bax的表達(dá)[J］.中國(guó)組織工程研究，2012，16（16）：2943-2946.

[8]趙永超.不同金屬烤瓷全冠對(duì)種植體齦溝液中TNF-α和MMP-8水平的影響[D］. 石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2008：25-26.

Study on the Exp ression of MMP-2 and MMP-13 in Hum an Gingival Fibroblast Cells of Porcelain Fused to Metal Crown

LIU Limei Department of Stomatology， The Affiliated Hospital of Jinlin Medical College， Jilin Jilin 132013， China

Ob jective To observe the effects of different kinds of porcelain fused to metal crown on the expression of MMP-2 and MMP-13 in human gingival fibroblast cells. Methods The preparation of pure titanium and cobalt chrom ium， nickel chrom ium alloy and gold extraction， by means of a modified tissue to fibroblast cells were cultured on the gums around， after leaching liquid immersion， were collected on a sample cell supernatant， the expression level of MMP-13 was determined as the sample determination method for ILISA determ ination. Resu lts The expression of CO Cr alloy and Ni Cr alloy MKMP-13 was higher than the negative control group and experimental group， comparison of various indexes， the difference was statistically significant （P＜0.05）. There was no significant difference in the expression level of MMP-13 and the negative control group （P＞0.05） in the gold and pure titanium alloy group. Conclusion Co Cr alloy and Ni Cr alloy MKMP-13 high expression level， to a certain extent w ill damage the gingival fibroblast； gold， pure titanium alloy biocompatibility is good.

Metal protein， Enzyme， Metal extraction， Cell culture，Gingival fibroblast

R-33

A

1674-9308（2016）27-0011-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.27.007

吉林醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院口腔科，吉林 吉林 132013