潘暉　夏燕　張玲

鼠胚實(shí)驗(yàn)在新建體外受精胚胎培養(yǎng)室質(zhì)量控制中的作用研究

潘暉夏燕張玲

目的 研究鼠胚實(shí)驗(yàn)在新建體外受精胚胎培養(yǎng)室質(zhì)量控制中的作用。方法 在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中將小鼠分為體內(nèi)受精組與體外受精組，對(duì)其培養(yǎng)狀況進(jìn)行記錄和統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 體內(nèi)受精組的受精率高于體外受精組（P＜0.05）。體內(nèi)受精組與體外受精組的囊胚形成率對(duì)比，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 鼠胚實(shí)驗(yàn)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)新建胚胎培養(yǎng)室的培養(yǎng)體系進(jìn)行評(píng)估。

鼠胚實(shí)驗(yàn)；培養(yǎng)室；質(zhì)量控制

歷經(jīng)數(shù)十年的發(fā)展我國(guó)輔助生殖技術(shù)日益規(guī)范化，目前能夠開(kāi)展該項(xiàng)治療的醫(yī)療機(jī)構(gòu)已經(jīng)達(dá)到300多家，每年能夠?yàn)榧s20萬(wàn)患者提供輔助生殖支持[1］。而在這一過(guò)程中胚胎培養(yǎng)室則被稱(chēng)為人類(lèi)胚胎的加工廠(chǎng)，是實(shí)現(xiàn)輔助生殖的重要環(huán)節(jié)。

因此，建設(shè)高標(biāo)準(zhǔn)的胚胎培養(yǎng)室是至關(guān)重要的，而新建胚胎培養(yǎng)室的各項(xiàng)環(huán)境和設(shè)備指標(biāo)是否能夠達(dá)到有效輔助胚胎體外生長(zhǎng)的要求，就成為新建體外受精胚胎培養(yǎng)室必須解決的問(wèn)題[2］。本文以本院新建的胚胎培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室鼠胚實(shí)驗(yàn)為依據(jù)，對(duì)鼠胚實(shí)驗(yàn)（MEA）方法在實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制中的作用進(jìn)行如下報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 材料

研究選取約4～6周齡以上的昆明白雌鼠，體重25～28 g；8周齡以上的昆明白雄鼠，體重30～35 g。實(shí)驗(yàn)小鼠的飼養(yǎng)溫度21℃～25℃，相對(duì)濕度30%～50%；實(shí)驗(yàn)小鼠保證水供應(yīng)，飼料夜間供應(yīng)。使用PMSG和HCG均為：獸用，寧波三生藥業(yè)產(chǎn)，均為1 000 IU粉劑/支。用0.9%生理鹽水10 ml溶解，用1 ml注射器每支分裝1 ml在-20℃冷凍保存。使用前恢復(fù)至室溫后進(jìn)行注射。

1.2方法

在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中將小鼠分為體內(nèi)受精組與體外受精組。體內(nèi)受精組：分7批次（5只為一批次）對(duì)健康的雌性小鼠在統(tǒng)一的時(shí)間內(nèi)（18：00）進(jìn)行腹腔PMSG 10 IU（0.1 m l）注射；注射48 h后進(jìn)行HCG 10 IU（0.1 ml）注射。然后按照雄鼠：雌鼠為1：2的比例將雌雄小鼠進(jìn)行合籠。在合籠完成16 h以后將雌鼠單獨(dú)培養(yǎng)，隔日晨10：00利用后頸椎脫臼法讓雌鼠死亡，并在無(wú)菌環(huán)境下取出其輸卵管，將其置于培養(yǎng)皿中，利用一次性注射器在輸卵管上制造切口并通過(guò)輕擠壓方式釋放出受精卵[3］。對(duì)獲取的受精卵進(jìn)行洗滌后置于卵裂培養(yǎng)皿中，以10個(gè)受精卵為一觀察液滴，將其放置到環(huán)境適宜的培養(yǎng)箱中。

體外受精組：分為7個(gè)批次采用上述體內(nèi)受精組方法注射雌鼠，HCG注射后隔日早10：00同法讓雌鼠死亡，同法處理輸卵管，通過(guò)輕擠壓方式釋放出卵冠丘復(fù)合體，對(duì)獲取的卵冠丘復(fù)合體進(jìn)行洗滌后置于受精皿中，以15個(gè)受精卵為一觀察單元，將其放置到環(huán)境適宜的培養(yǎng)箱中[4］。隨后采集雄鼠的精液利用集中受精法進(jìn)行體外受精。

1.3觀察指標(biāo)

本次實(shí)驗(yàn)中觀察的指標(biāo)包括：2-細(xì)胞率、受精率、囊胚形成率等。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次研究采用了SPSS19.0進(jìn)行分析，計(jì)量資料用（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

在本院新建設(shè)的培養(yǎng)室環(huán)境下，開(kāi)展了7個(gè)批次的昆明白小鼠體內(nèi)受精，在總共35個(gè)周期內(nèi)一共獲卵1 136枚，其中2-細(xì)胞數(shù)1 058個(gè)。同時(shí)開(kāi)展了7個(gè)批次的昆明白小鼠體外受精，在總共35個(gè)周期內(nèi)一共獲卵1 486枚，其中1 254枚受精。通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的記錄和分析可知，體內(nèi)受精組的2-細(xì)胞率為（93.07±1.25）%，體外受精組的受精率為（85.21±2.66）%；由此可知體內(nèi)受精組的受精率高于體外受精組（P＜0.05）。體內(nèi)受精組與體外受精組的囊胚形成率分別為（90.22±2.01）%和（91.02±1.88）%，兩組的囊胚率對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3　討論

繁衍后代是絕大多數(shù)生物在其生命歷程中都需要經(jīng)歷的重要一環(huán)，體外受精胚胎培養(yǎng)室在輔助人類(lèi)生育上發(fā)揮著“加工廠(chǎng)”的作用，而這個(gè)“加工廠(chǎng)”的培養(yǎng)室質(zhì)量控制則成為學(xué)術(shù)界關(guān)注的重點(diǎn)[5-6］。

通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的記錄和分析可知，在本院新建設(shè)的培養(yǎng)室環(huán)境下，本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示采用兩種方法的鼠胚囊胚率均大于80%，研究報(bào)道囊胚形成率達(dá)到 80%即可以做為胚胎實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)體系符合要求的標(biāo)準(zhǔn)[7］，且本研究結(jié)果顯示采用兩種方法的質(zhì)量控制結(jié)果沒(méi)有差異，因此，以上兩種方法均可以用于胚胎實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制。

但筆者認(rèn)為體外授精囊胚培養(yǎng)法更適宜用于新建實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制。其原因在于：已有的研究結(jié)果顯示體外受精比體內(nèi)受精的鼠胚胎對(duì)胚胎發(fā)育的影響因素更為敏感，更有利于檢測(cè)出不利因素對(duì)胚胎發(fā)育的影響[8］，發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)體系中存在的問(wèn)題；也是對(duì)實(shí)驗(yàn)操作者技術(shù)能力的檢驗(yàn)，可以培訓(xùn)和提高實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員的技術(shù)能力。

鼠胚實(shí)驗(yàn)是目前較為常用的胚胎培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制檢測(cè)方法之一。很多因素會(huì)影響到胚胎的質(zhì)量和囊胚率，故只有盡可能控制那些影響胚胎生長(zhǎng)發(fā)育的胚胎培養(yǎng)體系中的可控因素，胚胎培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的整個(gè)培養(yǎng)體系才能為胚胎的生長(zhǎng)發(fā)育提供相對(duì)適宜的條件，才可能培養(yǎng)出生長(zhǎng)發(fā)育潛能好的胚胎。

[1]王輝田，李濤，黎偉豪，等.鼠胚實(shí)驗(yàn)在新建體外受精胚胎培養(yǎng)室質(zhì)量控制中的作用[J］.實(shí)用婦產(chǎn)科雜志，2015，31（2）：115-119.

[2]王輝田，李濤，宏蘋(píng)蘋(píng)，等.新建IVF實(shí)驗(yàn)室中揮發(fā)性有機(jī)化合物的濃度變化及其對(duì)鼠胚體外發(fā)育的影響[J］.生殖與避孕，2016，36（1）：15-20.

[3]胡衛(wèi)華，侯文文，吳滿(mǎn)意，等.鼠胚實(shí)驗(yàn)在新建IVF胚胎培養(yǎng)室中的質(zhì)控研究[J］.皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，32（3）：181-183.

[4]蘇亮，羅平，羅江霞.不同來(lái)源小鼠胚胎培養(yǎng)在輔助生殖實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制中的應(yīng)用[J］.華夏醫(yī)學(xué)，2012，25（1）：16-18.

[5]王巍，邱卓琳，馬海蘭，等.小鼠體外受精胚胎培養(yǎng)在新建IVF實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制中的作用[J］.華夏醫(yī)學(xué)，2011，24（6）：649-652.

[6]劉云，李峰，陳小芳，等.小鼠胚胎培養(yǎng)在新建體外受精實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制驗(yàn)證[J］.中國(guó)婦幼保健，2014，29（26）：4300-4301.

[7]李小平，郝朝亮，高庭，等.鼠胚實(shí)驗(yàn)在新建胚胎培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制中的作用[J］.中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志，2013，41（1）：21-23.

[8]高亞可，杜姍姍.新建輔助生殖實(shí)驗(yàn)室的鼠胚實(shí)驗(yàn)報(bào)告[J］.廣西醫(yī)學(xué)，2016，38（3）：304-307.

The Effect of Mouse Embryo Test on the Quality Control of New ly Built in Vitro Fertilization Embryo Culture Room

P
AN Hui XIA Yan ZHANG Ling Assisted Reproduction Center， Urumqi Maternal and Child Health Care Hospital， Urumqi Xinjiang 830002， China

Ob jective To study the effect of mouse embryo test on the quality control of new ly constructed in vitro fertilization and embryo culture room. Method s In the course of the experiment， the mice were divided into the in vivo fertilization group and the in vitro fertilization group， recording and statistical analysis of their training status. Resu lts The fertilization rate of in vivo fertilization group was higher than in in vitro fertilization group （P＜0.05）. In vivo fertilization group and in vitro fertilization group blastocyst formation rate contrast， the difference is not statistically significant （P＞0.05）. Conclusion The experiment of mouse embryo can be carried out to evaluate the culture system of the new embryo culture room.

Mouse embryo experiment， Culture room， Quality control

R-33

A

1674-9308（2016）27-0012-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.27.008

新疆烏魯木齊市（自治區(qū)）婦幼保健院輔助生殖中心，新疆 烏魯木齊 830002