楊緒莉 綜述，姚登福審校（南通大學(xué)附屬醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)研究中心，江蘇南通226001）

血管生成因子-2表達對NSCLC的診斷及其靶向治療價值*

楊緒莉 綜述，姚登福△審校
（南通大學(xué)附屬醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)研究中心，江蘇南通226001）

非小細(xì)胞肺癌/診斷；血管生成素2；靶向治療；綜述

起源于支氣管黏膜或腺體的肺癌分為非小細(xì)胞性肺癌（NSCLC，約85%）和小細(xì)胞性肺癌（SCLC，約15%），為多病因、多中心連續(xù)發(fā)展的惡性腫瘤。NSCLC 5年生存率低，術(shù)后復(fù)發(fā)率高，預(yù)后差［1-2］。肺癌的生長伴隨癌組織缺氧誘導(dǎo)因子（HIFs）活性增加［3-4］，激活下游靶基因轉(zhuǎn)錄并編碼血管生成因子-2（Ang-2）等表達增加，促進血管重建，改變血管通透性［5］，與癌基因（如ras，c-myc）、抑癌基因（如VHL、p53、PTEN）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）及微小RNA（miRNA）改變等明顯相關(guān)，不僅影響肺癌的放化療，而且使癌細(xì)胞更具侵襲性，易轉(zhuǎn)移，但其機制尚待闡明。本文就Ang-2表達對NSCLC的診斷和靶向治療的新進展作一綜述。

1　Ang-2　分子結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能

血管生成素家族包括Ang-1、Ang-2、Ang-3和Ang-4，基因分別定位于8q22、8q23、20q13和20q13，肽鏈分別由498、496、523和503個氨基酸組成。Ang-2共含有9個外顯子和8個內(nèi)含子，基因核苷酸中開放閱讀框架（ORF）為1 491 bp，肽鏈相對分子質(zhì)量為75×103，N端信號肽由含20個疏水的氨基酸組成，其中約200個氨基酸卷曲成螺旋結(jié)構(gòu)域，折疊彎曲形成四級結(jié)構(gòu)，是由內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的一組結(jié)構(gòu)相似的糖蛋白，并存儲在威貝爾-帕拉德小體（Weibel-Palade bodies，WPB），在受到刺激后可以被迅速釋放，主要受體是血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的受體酪氨酸激酶-2（Tie-2），通過與Tie受體結(jié)合，可調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞Tie-2活性［6］，使內(nèi)皮細(xì)胞激活，降低內(nèi)皮細(xì)胞的穩(wěn)定性，破壞血管穩(wěn)定性，并刺激已存在的血管及淋巴管增殖，形成新的血管及淋巴管，促進腫瘤生長及轉(zhuǎn)移［3］。

2　NSCLC組織Ang-2　的異常表達

與非肺癌患者相比，肺癌患者，尤其是NSCLC患者，Ang-2的表達呈進行性增加，腫瘤的形成、進展、惡性程度和轉(zhuǎn)移與血清中Ang-2水平明顯相關(guān)［6-7］。NSCLC有較高的Ang-2和VEGF血清水平，且血清Ang-2與VEGF水平相互關(guān)聯(lián)，Ang-2在破壞血管穩(wěn)定性的同時，使VEGF的促血管生成作用增強［8］。Ang-1和Ang-2的配體均是表達在內(nèi)皮細(xì)胞上的Tie-2，二者在血管發(fā)生中起關(guān)鍵作用［6］。NSCLC中Ang-1減少、Ang-2的表達明顯增加，Ang-2通過活化Tie-2受體，拮抗Ang-1的作用，抑制平滑肌細(xì)胞及管旁細(xì)胞對血管形成的限制，破壞血管穩(wěn)定性，使血管滲透性增加［9］，并激活內(nèi)皮細(xì)胞，誘發(fā)和促進血管新生，Ang-2的表達與微血管密度成正相關(guān)［10］。癌組織血管內(nèi)皮細(xì)胞大量增殖，促進腫瘤生長［5］。因此，血清Ang-2是NSCLC的臨床標(biāo)志［7］。

3　Ang-2　表達異常的機制

Ang-2是Ang-1的天然拮抗劑，通過自分泌作用與血管內(nèi)皮細(xì)胞和管周細(xì)胞細(xì)胞膜Tie-2受體結(jié)合，抑制Ang-1，激活Tie-2［6］。NSCLC組織中Ang-2及其受體的表達明顯高于癌旁組織，顯示Ang-2與肺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)［3，8］。癌周血管重建區(qū)在毛細(xì)血管尚未形成時即可見癌組織中Ang-2表達增加，Ang-2參與血管新生的起始及延續(xù)過程，利于NSCLC細(xì)胞的增殖和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移［11］。

3.1Ang-2破壞血管穩(wěn)定性Ang-2通過激活β1整聯(lián)蛋白破壞血管穩(wěn)定性［12］。Ang-1與Tie-2結(jié)合，保持血管穩(wěn)定性。Ang-2激活β1整聯(lián)蛋白，破壞血管穩(wěn)定性。自分泌Ang-2信號令Tie-2沉默，促進β1整聯(lián)蛋白正向拉長基質(zhì)粘連，調(diào)節(jié)含鈣粘連蛋白（VE-cadherin）的內(nèi)皮細(xì)胞間的細(xì)胞-細(xì)胞連接。VE-cadherin和β1整聯(lián)蛋白使Tie-2沉默的血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞間的連接降低。Tie-2沉默的單層細(xì)胞的完整性被β1整聯(lián)蛋白、磷酸肌醇-3激酶或Rho激酶抑制，或通過重新表達膜結(jié)合的Tie-2胞外域所拯救。此外，Tie-2沉默增加，而Ang-2阻滯抑制體外經(jīng)內(nèi)皮的腫瘤細(xì)胞遷移，Ang-2介導(dǎo)的β1整合素激活是內(nèi)皮細(xì)胞不穩(wěn)定的催化劑，解釋了Ang-1和Ang-2有爭議的血管功能。Ang-2通過β1整聯(lián)蛋白沉積，促進細(xì)胞骨架改變、Tie-2沉默［13］。Ang-2調(diào)節(jié)血管中含VE-cadherin的內(nèi)皮細(xì)胞間的細(xì)胞-細(xì)胞連接，破壞血管穩(wěn)定性［12］。NSCLC組織中Ang-2過表達時，VEGFA呈優(yōu)勢表達，促進內(nèi)皮細(xì)胞增生［14］，Ang-2通過破壞原始腫瘤的內(nèi)皮細(xì)胞-周細(xì)胞的相互作用，有利于促進血管新生和增強血管通透性。

Ang-2通過配體-受體相互作用，募集表達Tie-2的單核細(xì)胞（TEMS）至腫瘤，從而促進血管形成。肺部內(nèi)皮細(xì)胞鈣-活化T細(xì)胞核因子（NFAT）途徑特異性激活，通過刪除其內(nèi)源抑制劑，DSCR-1上調(diào)鈣神經(jīng)素通路，NFAT過表達，Ang-2導(dǎo)致肺轉(zhuǎn)移顯著增加。特別在肺中VEGF水平的增加，可觸發(fā)鈣-NFAT信號，反式激活肺內(nèi)皮細(xì)胞的Ang-2。此外，在小鼠模型中，DSCR-1或Ang-2的受體、可溶性Tie-2的過度表達，可防止激活肺血管內(nèi)皮，抑制肺轉(zhuǎn)移。這些研究發(fā)現(xiàn)了在預(yù)轉(zhuǎn)移性龕中血管生成的機制，并為肺轉(zhuǎn)移提供新的靶點［13］。

3.2Ang-2促進腫瘤轉(zhuǎn)移血管周細(xì)胞在腫瘤進展中促進或限制轉(zhuǎn)移。增強周細(xì)胞消耗，缺氧腫瘤的Ang-2信號，可促進血管缺陷和轉(zhuǎn)移。利用小鼠模型顯示，血管靶向療法阻滯Ang-2的作用，抑制肺轉(zhuǎn)移［8］。晚期腫瘤的淋病奈瑟菌（NG）陽性周細(xì)胞消耗也能降低腫瘤的生長，在NG2-TK小鼠中，晚期腫瘤的周細(xì)胞消耗可減少腫瘤體積60%［15］，PDGFRβ-TK小鼠減少了25%［8］，原發(fā)腫瘤微環(huán)境周細(xì)胞如同重要的警衛(wèi)員，阻止腫瘤的進展和轉(zhuǎn)移；周細(xì)胞減少造成缺氧相關(guān)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和蛋氨酸信號通路介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移［15］。VEGF激活鈣調(diào)神經(jīng)磷酸NFAT通路，增加肺內(nèi)皮細(xì)胞Ang-2的優(yōu)先轉(zhuǎn)錄，促進肺腫瘤轉(zhuǎn)移。表明腫瘤來源的VEGF和Ang-2誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移的機制有一定聯(lián)系。在內(nèi)皮細(xì)胞，VEGF的信號增加細(xì)胞內(nèi)鈣水平，從而激活NFAT介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄靶基因。VEGF結(jié)合血管內(nèi)皮生長因子受體-2（VEGFR-2）引起胞內(nèi)鈣離子增加，其激活了肺內(nèi)皮細(xì)胞中NFAT介導(dǎo)的Ang-2的轉(zhuǎn)錄。盡管炎癥細(xì)胞不表達Ang-2，激活的NFAT在轉(zhuǎn)移相關(guān)炎癥細(xì)胞中或許以一種與Ang-2無關(guān)的方式增強了其轉(zhuǎn)移前功能［16］。VEGF、Ang-1及其他因子如成纖維細(xì)胞生長因子2等刺激淋巴管生成［17］，與新生血管可促進腫瘤的轉(zhuǎn)移。此外，高劑量白介素-2（HDIL-2）治療晚期惡性腫瘤時可刺激Ang-2的分泌，血清Ang-2濃度升高，增加內(nèi)皮通透性，與腫瘤轉(zhuǎn)移和肺功能障礙相關(guān)［18］。

3.3microRNAs（miRNAs）在NSCLC中表達異常miRNAs在NSCLC的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。miRNA是一類高度保守的非編碼小RNA分子，約有18～25個核苷酸長度，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因的表達；在內(nèi)皮細(xì)胞功能和血管生成中起重要作用，主要分為促進和抑制腫瘤生長、血管生成兩類。其表達失調(diào)與NSCLC的惡性轉(zhuǎn)化、血管生成和腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)［19］。NSCLC腫瘤體積增大，造成細(xì)胞缺氧，miRNA可通過缺氧誘導(dǎo)因子（HIF-1α）信號通路［20］或整聯(lián)蛋白β受體［19］，直接或間接作用于Ang-2，破壞血管平滑肌功能［21］，調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞，調(diào)控血管生成。核轉(zhuǎn)錄因子6（KLF6）調(diào)節(jié)VEGFA的表達和分泌，miRNA通過抑制KLF6并提高體內(nèi)VEGFA水平，促進血管新生，增加微血管密度［22］，或直接靶向 VEGF而破壞腫瘤誘導(dǎo)的血管形成［23-25］。部分 miRNA與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）/間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)化（MET）調(diào)節(jié)相關(guān)。EMT使細(xì)胞間的黏附減弱，細(xì)胞極性喪失，并使細(xì)胞獲得遷移和侵襲特性，利于轉(zhuǎn)移。MET允許癌細(xì)胞從原位癌轉(zhuǎn)移至遠(yuǎn)處器官并克隆，如miRNA-200家族［26］。miRNA-200也可靶向腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞分泌的IL-8和CXCL1，抑制EMT和血管新生。miRNA可通過上調(diào)p21和下調(diào)cyclinD1的表達或抑制Src蛋白及其引發(fā)的Src/Ras/ ERK通路，從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖和生長及血管生成，抑制癌細(xì)胞的生長、黏附、遷移和侵襲能力［27-28］。在NSCLC中，部分miRNA表達上調(diào)，通常被認(rèn)為是一種癌基因［29］。

4　Ang-2　表達對NSCLC的靶向治療價值

NSCLC中Ang-2高表達可破壞血管穩(wěn)定性，增強VEGF的促血管形成作用，聯(lián)合應(yīng)用Ang-2和VEGF抑制法，抑制NSCLC組織中Ang-2和VEGF［30］?；蚶没蚬こ谭椒ǎ种瓢┙M織中Ang-2和VEGF的轉(zhuǎn)錄、翻譯，將有利于抗血管治療，也有助于了解NSCLC生長和轉(zhuǎn)移的具體機制［3］。Ang-2的阻滯劑干擾Ang-2與Tie-2間的相互作用［6］，增強內(nèi)皮細(xì)胞-細(xì)胞節(jié)點的完整性及Tie-2信號轉(zhuǎn)導(dǎo)來提高內(nèi)皮細(xì)胞間連接的完整性，阻斷Ang-2，抑制NSCLC細(xì)胞穿過內(nèi)皮細(xì)胞層，繼而抑制腫瘤生長、腫瘤血管生成及淋巴結(jié)和肺轉(zhuǎn)移［12-13，31-32］。雖然循環(huán)TEMs促血管生成，暴露于腫瘤衍生的Ang-2能刺激這些細(xì)胞表現(xiàn)出更廣泛的、促進腫瘤生長的表型出現(xiàn)。這樣，Ang-2-TEM軸可成為抗血管生成的癌癥療法的新靶點［33］。Ang-2募集TEMs至腫瘤部位，釋放細(xì)胞因子表達促血管生成表型［34］。通過干擾TEM信號，抗體靶向Ang-2抑制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移［35］。腫瘤中復(fù)雜的血管生長的調(diào)節(jié)參與提供自適應(yīng)機制，這些機制包括遺傳變異和微環(huán)境的相互作用，從而促進抗血管生成治療應(yīng)答中的耐藥機制迅速出現(xiàn)［36-37］。

Ang-2也介導(dǎo)炎癥過程。Ang-2在多發(fā)性炎癥性疾病中表達上調(diào)，并涉及直接控制炎癥相關(guān)的信號途徑，因此，靶向治療Ang-2應(yīng)考慮此因子在調(diào)節(jié)血管生成和炎癥反應(yīng)中的雙重作用。NSCLC中，Ang-2上調(diào)抵消了靶向VEGF的抗血管生成治療，VEGF和Ang-2的雙重抑制大大增強了抗血管治療的療效。Ang-2是聯(lián)合抗癌治療的一個有希望的候選療法，因為靶向2個主要的促腫瘤生成的過程，血管生成和炎癥［38］。靶向Ang-2的抗血管生成作用依賴藥物濃度，藥物的滲透能力取決于其理化性質(zhì)，但其中的低傳遞的主要原因為腫瘤異常的血管，這是化療藥物均勻分布到腫瘤組織的關(guān)鍵障礙［39］。NSCLC血管異常也會導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對放療和許多化療藥物的耐藥性。血管壁結(jié)構(gòu)的異常（如內(nèi)皮細(xì)胞間存在較大的間隙），周細(xì)胞覆蓋和功能缺失，不連續(xù)或基底膜缺失，以及促血管生成因子（如Ang-2和VEGF）的存在，有助于增加腫瘤血管的通透性。其直接后果是血流速度緩慢下降和血漿大分子的流出增加（如纖維蛋白原），導(dǎo)致間質(zhì)高滲透壓。在同種腫瘤和不同腫瘤的血管通透性的空間和時間性變化，使這種情況的復(fù)雜性增加［40］。

NSCLC的腫瘤治療方法中，有一種被稱為“血管促進療法”的方法，通過增加腫瘤血管密度、血流量、滲漏和擴張，可以增加化療藥物傳遞和細(xì)胞內(nèi)藥物的吸收和減少缺氧，從而降低腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。低劑量抗血管生成藥物西侖吉肽能增強腫瘤血管新生，鈣通道阻滯劑可增加血管擴張和血流，因此推測，聯(lián)合使用以上2種藥物將提高化療藥物吉西他濱的傳遞。化療藥物吉西他濱攝取到細(xì)胞內(nèi)是由平衡核苷轉(zhuǎn)運蛋白1（ENT1）和ENT2調(diào)節(jié)，以及由集中核苷轉(zhuǎn)運蛋白3（CNT3）。這項研究提供了一個有趣的治療癌癥的方法，即通過促進血管形成，而非抑制來治療。這些結(jié)果指向了治療策略一個可能的根本性改變，通過血管的促進治療，顯著減少化療藥物的有效用量。通過提高腫瘤內(nèi)傳遞和細(xì)胞間攝取細(xì)胞毒性藥物，血管促進治療可最大限度減少治療的不良反應(yīng)。這一策略可提供機會延長治療，并不會降低生活質(zhì)量［41］。VEGF抑制劑的血管正?；且粋€增強抗腫瘤作用的策略化療藥物，但呈時間和劑量依賴，因此，難以實現(xiàn)臨床。血管促進療法和抗凝治療目前正在成為新的機會，以提高抗癌療法的療效［42］。

miRNA通過抑制mRNA的穩(wěn)定性或靶基因的翻譯，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因的表達，其在NSCLC的Ang-2靶向治療中發(fā)揮著重要作用。Ang-2在血管生成和腫瘤進展中起重要作用，而miRNA是新興的血管生成重要調(diào)節(jié)劑。miRNA靶向作用Ang-2，通過破壞Ang-2的促血管生成活性抑制腫瘤進展。例如，miRNA-542-3p通過結(jié)合Ang-2mRNA的3′非轉(zhuǎn)錄區(qū)域（UTR），從而抑制Ang-2 mRNA的轉(zhuǎn)錄，減弱血管生成和腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。此外，miRNA-542-3p水平與腫瘤進展呈負(fù)相關(guān)。這一現(xiàn)象揭示了一種新的調(diào)控通路，抗血管生成的miRNA-542-3p，通過該通路直接靶向促血管生成的關(guān)鍵蛋白Ang-2，提示miRNA-542-3p是抗血管生成治療的希望靶點和監(jiān)測疾病進展的潛在標(biāo)志物［43］。miRNA在調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的抗癌治療敏感性中起重要作用。通過靶向VEGF-VEGFR2途徑，調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的敏感性［26］。靶向VEGF信號通路上的Ras基因抑制miRNA，可以減少NSCLC細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移及浸潤［44-45］。

5　Ang-2　表達對NSCLC的診斷及預(yù)后價值

5.1Ang-2表達對NSCLC的診斷價值肺癌組織的增長和癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移均依賴于新生血管的生成。血管生成相關(guān)的Ang-2表達，和VEGF的表達一樣，是缺氧引起的，是大部分癌癥的一個標(biāo)志性的特征［3，46］。腫瘤體積增大，缺氧增加，組織中缺氧誘導(dǎo)因子（HIF-1α）表達增加，誘導(dǎo)Ang-2及VEGF過表達［47］。隨著NSCLC的階段發(fā)展，血清Ang-2水平增加，有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者比沒有轉(zhuǎn)移的患者水平高，因此，血清Ang-2是NSCLC的臨床標(biāo)志。無創(chuàng)性成像在癌癥評估中起關(guān)鍵作用，新的功能和分子成像技術(shù)可以深入了解腫瘤的標(biāo)志，包括血管生成［48］。預(yù)測早期NSCLC患者術(shù)后生存率和復(fù)發(fā)率的潛在標(biāo)志。miRNA參與肺癌的發(fā)生及耐藥，miRNA與克服耐藥并使癌細(xì)胞對化療、放療及靶向治療重新敏感相關(guān)。miRNA將來可以輔助肺癌的診斷和治療［49］。

5.2Ang-2表達對NSCLC的預(yù)后價值隨訪NSCLC患者，Ang-2和VEGF低者總生存率高，生存時間較長，Ang-2、VEGF高者，無復(fù)發(fā)，生存率低，患者預(yù)后差［50］。Ang-2過表達與腫瘤的侵襲性密切相關(guān)。高密度淋巴管和高密度腫瘤內(nèi)微血管被證明是NSCLC的獨立預(yù)后指標(biāo)［17］。體循環(huán)中的Ang-2 mRNA水平對預(yù)測靶向治療相關(guān)的生存利益來說是一個有力的指標(biāo)［51］。血Ang-2表達在早期NSCLC中常見［52］，是診斷NSCLC有用的標(biāo)志［53］。miR-141和miR-200c高表達，通過間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)化和血管生成，使NSCLC腺癌患者生存期縮短，是獨立的預(yù)后因素［22］。miR-200通過抑制關(guān)鍵促血管生成因子（IL-8、CXCL1）調(diào)節(jié)血管生成，IL-8高表達與肺癌的不良預(yù)后相關(guān)［54］。NSCLC中miR-182高表達與腫瘤細(xì)胞遷移和轉(zhuǎn)移、低生存率相關(guān)，是一個獨立的陽性預(yù)后因子［55］。

6　展　望

NSCLC是最常見的惡性腫瘤，發(fā)病機制復(fù)雜，是連續(xù)、多病因及多中心的不斷發(fā)展過程，其發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有賴于肺新血管形成，Ang-2在NSCLC發(fā)展過程中起重要作用。以肺癌中Ang-2靶向治療可抑制腫瘤血管形成，從而阻斷肺癌生長或轉(zhuǎn)移的營養(yǎng)和氧氣供給。針對Ang-2/Tie-2需更多臨床試驗研究其靶向作用。NSCLC的miRNA的靶向Ang-2治療及抗血管生成藥物的前景，需要臨床驗證預(yù)后和預(yù)測生物標(biāo)記，以確定患者的最有效的治療方法。

［1］Goldstraw P，Ball D，Jett JR，et al.Non-small-cell lung cancer［J］.Lancet，2011，378（9804）：1727-1740.

［2］Jemal A，Bray F，Certer MM，et al.Global cancer statistics［J］.CA Cancer J Clin，2011，61（2）：69-90.

［3］Farnsworth RH，Lackmann M，Achen MG，et al.Vascular remodeling in cancer［J］.Oncogene，2014，33（27）：3496-3505.

［4］Ren W，Mi D，Yang K，et al.The expression of hypoxia-inducible factor-1α and its clinical significance in lung cancer：a systematic review and metaanalysis［J］.Swiss Med Wkly，2013，143：w13855.

［5］ Benest AV，Kruse K，Savant S，et al.Angiopoietin-2 is critical for cyto kine-induced vascular leakage［J］.PLoS One，2013，8（8）：e70459.

［6］Naumnik W，Naumnik B，Niewiarowska K，et al.Angiogenic axis angio poietin-1 and angiopoietin-2/Tie-2 in non-small cell lung cancer：a bron choalveolar lavage and serum study［J］.Adv Exp Med Biol，2013，788：341-348.

［7］Yu Q，Stamenkovic L.Angiopoietin-2 Is Implicated in the Regulation of Tumor Angiogenesis［J］.Am J Pathol，2001，158（2）：563-570.

［8］Naumnik W，Chyczewska E，Ossolinska M.Serum levels of angiopoietin-1，angiopoietin-2，and their receptor tie-2 in patients with nonsmall cell lung cancer during chemotherapy［J］.Cancer Invest，2009，27（7）：741-746.

［9］Cheng X，Zhang X，Cheng W，et al.Tumor-specific delivery of histidinerich glycoprotein suppresses tumor growth and metastasis by anti-angiogenesis and vessel normalization［J］.Curr Gene Ther，2014，14（2）：75-85.

［10］Holopainen T，Saharinen P，D′Amico G，et al.Effects of angiopoietin-2-blocking antibody on endothelial cell-cell junctions and lung metastasis［J］. J Natl Cancer Inst，2012，104（6）：461-475.

［11］Keskin D，Kim J，Cooke VG，et al.Targeting vascular pericytes in hypoxic tumors increases lung metastasis via angiopoietin-2［J］.Cell Rep，2015，10 （7）：1066-1081.

［12］Park JH，Choi H，Kim YB，et al.Serum angiopoietin-1 as a prognostic marker in resected early stage lung cancer［J］.Cancer Lung，2009，66（3）：359-364.

［13］Hakanpaa L，Sipila T，Leppanen VM，et al.Endothelial destabilization by angiopoietin-2 via integrinb1 activation［J］.Nat Commun，2015，6：5962.

［14］Nasarre P，Thomas M，Kruse K，et al.Host-derived angiopoietin-2 affects early stages of tumor development and vessel maturation but is dispensable for later stages of tumor growth［J］.Cancer Res，2009，69（4）：1324-1333.

［15］Ho CS，Yap SH，Phuah NH，et al.MicroRNAs associated with tumour migration，invasion and angiogenic properties in A549 and SK-Lu1 human lung adenocarcinoma cells［J］.Lung Cancer，2014，83（2）：154-162.

［16］Andersen S，Donnem T，Al-Shibli K，et al.Prognostic impacts of angiopoietins in NSCLC tumor cells and stroma：VEGF-a impact is strongly associated with Ang-2［J］.PLoS One，2011，6（5）：e19773.

［17］Jin W，Reddy MA，Chen Z，et al.Small RNA sequencing reveals micro-RNAs that modulate angiotensinⅡ effects in vascular smooth muscle cells［J］.J Biol Chem，2012，287（19）：15672-15683.

［18］Minami T，Jiang S，Schadler K，et al.The calcineurin-NFAT-angiopoietin-2 signaling axis in lung endothelium is critical for the establishment of lung metastases［J］.Cell Rep，2013，4（4）：709-723.

［19］Ng CS，Wan S，Wong RH，et al.Angiogenic response to major lung resection for non-small cell lung cancer with video-assisted thoracic surgical and open access［J］.Scientific World J，2012，2012：636754.

［20］Mao G，Liu Y，F(xiàn)ang X，et al.Tumor-derived microRNA-494 promotes angiogenesis in non-small cell lung cancer［J］.Angiogenesis，2015，18（3）：3733-3782.

［21］Parums DV.Current status of targeted therapy in non-small cell lung cancer［J］.Drugs Today（Barc），2014，50（7）：503-525.

［22］Tejero R，Navarro A，Campayo M，et al.miR-141 and miR-200c as markers of overall survival in early stage non-small cell lung cancer adenocarcinoma［J］.PLoS One，2014，9（7）：e101899.

［23］Ebrahimi F，Gopalan V，Smith RA，et al.miR-126 in human cancers：clinical roles and current perspectives［J］.Exp Mol Pathol，2014，96（1）：98-107.

［24］Hu J，Cheng Y，Li Y，et al.microRNA-128 plays a critical role in human non-small cell lung cancer tumourigenesis，angiogenesis and lymphangiogenesis by directly targeting vascular endothelial growth factor-C［J］.Eur J Cancer，2014，50（13）：2336-2350.

［25］Valencia K，Luis-Ravelo D，Bovy N，et al.miRNA cargo within exosomelike vesicle transfer influences metastatic bone colonization［J］.Mol Oncol，2014，8（3）：689-703.

［26］Cooke VG，LeBleu VS，Keskin D，et al.Pericyte depletion results in hy-poxia-ssociated epithelial-to-mesenchymal transition and metastasis mediated by met signaling pathway［J］.Cancer Cell，2012，21（1）：66-81.

［27］Luo J，Meng C，Tang Y，et al.miR-132/212 cluster inhibits the growth of lung cancer xenografts in nude mice［J］.Int J Clin Exp Med，2014，7（11）：4115-4122.

［28］Wang N，Liang H，Zhou Y，et al.miR-203 suppresses the proliferation and migration and promotes the apoptosis of lung cancer cells by targeting SRC［J］.PLoS One，2014，9（8）：e105570.

［29］Guan P，Yin Z，Li X，et al.Meta-analysis of human lung cancer microRNA expression profiling studies comparing cancer tissues with normal tissues［J］. J Exp Clin Cancer Res，2012，31：54.

［30］Forde PM，Ettinger DS.Targeted therapy for non-small-cell lung cancer：past，present and future［J］.Expert Rev Anticancer Ther，2013，13（6）：745-758.

［31］Zheng W，Nurmi H，Appak S，et al.Angiopoietin 2 regulates the transformation and integrity of lymphatic endothelial cell junctionset［J］.Genes Dev，2014，28（14）：1592-1603.

［32］Albini A，Noonan DM.Angiopoietin2 and Tie-2：tied to lymphangiogenesis and lung metastasis.New perspectives in antimetastatic antiangiogenic therapy［J］.J Natl Cancer Inst，2012，104（6）：429-431.

［33］Coffelt SB，Tal AO，Scholz A，et al.Angiopoietin-2 Regulates Gene Expression in TIE-2-Expressing Monocytes and Augments Their Inherent Proangiogenic Functions［J］.Cancer Res，2010，70（13）：5270-5280.

［34］Holopainen T，Saharinen P，D′Amico G，et al.Effects of angiopoietin-2-blocking antibody on endothelial cell-cell junctions and lung metastasis［J］. J Natl Cancer Inst，2012，104（6）：461-475.

［35］Mazzieri R，Pucci F，Moi D，et al.Targeting the ANG-2/TIE-2 axis inhibits tumor growth and metastasis by impairing angiogenesis and disabling rebounds of proangiogenic myeloid cells［J］.Cancer Cell，2011，19（4）：512-526.

［36］Vasudeb NS，Reyonlds AR.Anti-angiogenic therapy for cancer：current progress，unresolved questions and future directions［J］.Angiogenesis，2014，17（3）：471-494.

［37］Vidal SJ，Rodriquez-Bravo V，Galsky M，et al.Targeting cancer stem cells to suppress acquired chemotherapy resistance［J］.Oncogene，2014，33（36）：4451-4463.

［38］Scholz A，Plate KH，Reiss Y.Angiopoietin-2：a multifaceted cytokine that functions in both angiogenesis and inflammation［J］.Ann N Y Acad Sci，2015，1347（1）：45-51.

［39］Shi S，Chen L，Huang G.Antiangiogenic therapy improves the antitumor effect of adoptive cell immunotherapy by normalizing tumor vasculature［J］. Med Oncol，2013，30（4）：698.

［40］Jain RK.Normalizing tumor microenvironment to treat cancer：bench to bedside to biomarkers［J］.J Clin Oncol，2013，31（17）：2205-2218.

［41］Wong PP，Demircioglu F，Ghazaly E，et al.Dual-action combination therapy enhances angiogenesis while reducing tumor growth and spread［J］.Cancer Cell，2015，27（1）：123-137.

［42］Huang D，Lan H，Liu F，et al.Anti-angiogenesis or pro-angiogenesis for cancer treatment：focus on drug distribution［J］.Int J Clin Exp Med，2015，8（6）：8369-8376.

［43］He T，Qi F，Jia L，et al.MicroRNA-542-3p inhibits tumour angiogenesis by targeting Angiopoietin-2［J］.J Pathol，2014，232（5）：499-508.

［44］Desroches-Castan A，Quélard D，Demeunynck M，et al.A new chemical inhibitor of angiogenesis and tumorigenesis that targets the VEGF signaling pathway upstream of Ras［J］.Oncotarget，2015，6（7）：5382-5411.

［45］Carlomagno F，Chiariello M.Growth factor transduction pathways：paradigm of anti-neoplastic targeted therapy［J］.J Mol Med（Berl），2014，92（7）：723-733.

［46］Albini A，Noonan DM.Angiopoietin2 and Tie-2：tied to lymphangiogenesis and lung metastasis.New perspectives in antimetastatic antiangiogenic therapy［J］.J Natl Cancer Inst，2012，104（6）：429-431.

［47］Choi JH，Nguyen MP，Lee D，et al.Hypoxia-induced endothelialpro genitorcell function is blunted in angiotensinogen knockout mice［J］.Mol Cells，2014，37（6）：487-496.

［48］García-Figueiras R，Padhani AR，Beer AJ，et al.Tumor angiogenesis for radiologists-part2：clinical utility［J］.Curr Probl Diagn Radiol，2015，44（5）：425-436.

［49］MacDonagh L，Gray SG，F(xiàn)inn SP，et al.The emerging role of microRNAs in resistance to lung cancer treatments［J］.Cancer Treat Rev，2015，41（2）：160-169.

［50］Carrillo de Santa Pau E，Arias FC，Caso Peláez E，et al.Prognostic significance of the expression of vascular endothelial growth factors A，B，C，and D and their receptors R1，R2，and R3 in patients with nonsmall cell lung cancer［J］.Cancer，2009，115（8）：1701-1712.

［51］Coelho AL，Araújo A，Gomes M，et al.Circulating Ang-2 mRNA expression levels：looking ahead to a new prognostic factor for NSCLC［J］.PLoS One，2014，9（2）：e90009.

［52］Reinmuth N，Piegelbrock E，Raedel M，et al.Prognostic significance of vessel architecture and vascular stability in non-small cell lung cancer［J］. Lung Cancer，2007，55（1）：53-60.

［53］Fawzy A，Gaafar R，Kasem F，et al.Importance of serum levels of angiopoietin-2 and survivin biomarkers in non-small cell lung cancer［J］.J Egypt NatlCanc Inst，2012，24（1）：41-45.

［54］Pecot CV，Rupaimoole R，Yang D，et al.Tumour angiogenesis regulation by the miR-200 family［J］.Nat Commun，2013，4：2427.

［55］Stenvold H，Donnem T，Andersen S，et al.Stage and tissue-specific prognostic impact of miR-182 in NSCLC［J］.BMC Cancer，2014，14：138.

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.07.019

A

1009-5519（2016）07-1014-05

國家國際科技合作專項（2013DFA32150）。

△，E-mail：yaodf@ahnmc.com。

（2015-12-10）