田西學(xué)，李　勝，李　宏，李會(huì)玲，楊漢卿，賈　青，趙彩會(huì)，田　間，李　潔，雒亞璇

(陜西省飼料監(jiān)測(cè)所，陜西 西安710016)

影響生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)結(jié)果的因素探討

田西學(xué)，李勝，李宏，李會(huì)玲，楊漢卿，賈青，趙彩會(huì)，田間，李潔，雒亞璇

(陜西省飼料監(jiān)測(cè)所，陜西 西安710016)

摘要：生鮮乳質(zhì)量安全關(guān)系人身健康，我國(guó)農(nóng)業(yè)部將β-內(nèi)酰胺酶等6種物質(zhì)列入生鮮乳中的非法添加物，明令禁止并通告全國(guó)。為了探討影響生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)結(jié)果的因素，我們?cè)谑?nèi)奶畜養(yǎng)殖較為密集的涇陽(yáng)、富平、臨潼、大荔等地開展了生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶特別監(jiān)督抽檢。結(jié)果表明：在奶價(jià)持續(xù)走低，高密度監(jiān)測(cè)、嚴(yán)管、嚴(yán)查、嚴(yán)打的情況下，生鮮乳中人為添加β-內(nèi)酰胺酶的可能性不大，生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶的來(lái)源主要與奶畜個(gè)體健康狀況、飼養(yǎng)管理水平、養(yǎng)殖環(huán)境衛(wèi)生與飲水等因素有關(guān)。

關(guān)鍵詞：生鮮乳 ； β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)結(jié)果；影響因素

β-內(nèi)酰胺酶是一種青霉素鉀或青霉素鈉的酶，是β-內(nèi)酰胺類抗生素的分解劑、解抗劑或隱蔽劑，俗稱金玉蘭酶劑。β-內(nèi)酰胺酶的提取物主要來(lái)自于霉菌的代謝產(chǎn)物，其本身是一種絲氨酸蛋白酶的衍生物，屬于蛋白質(zhì)多肽。固態(tài)時(shí)呈白色粉末、液態(tài)呈淺黃色或微黃色。關(guān)于生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶的來(lái)源，國(guó)內(nèi)外一些報(bào)道認(rèn)為：生鮮乳中的β-內(nèi)酰胺酶的來(lái)源有兩種，一種是內(nèi)源性的即由奶牛體內(nèi)的耐用菌株為排斥抗生素而產(chǎn)生的。另一種是外源性人為添加的。即不法分子為了降解生鮮乳中殘留的抗生素逃避檢測(cè)而通過(guò)外源性添加到生鮮乳中去。

由于β-內(nèi)酰胺酶具有分解β-內(nèi)酰胺類抗生素的作用，在抗生素乳中加入β-內(nèi)酰胺酶后，乳中抗生素作為抗原與β-內(nèi)酰胺酶活性中心成分結(jié)合，產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制，使抗生素作為抗原暫時(shí)失活，當(dāng)利用抗生素檢測(cè)卡檢測(cè)牛奶中抗生素時(shí)，呈陰性檢出，即檢測(cè)不出抗生素，但將加有β-內(nèi)酰胺酶的抗生素乳進(jìn)行乳酸菌接種試驗(yàn)時(shí)，其抗抑菌效果依然存在。這說(shuō)明β-內(nèi)酰胺酶并不能使乳中抗生素完全失活，只是不法分子為了規(guī)避抗生素檢測(cè)而采取的一種規(guī)避手段。

我國(guó)農(nóng)業(yè)部將β-內(nèi)酰胺酶列入牛奶違禁添加物明令禁止，并以公告形式發(fā)布全國(guó)。各地奶業(yè)管理部門要加強(qiáng)監(jiān)管，嚴(yán)厲打擊，形成高壓態(tài)勢(shì)。為了探討影響生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)結(jié)果的因素，我們?cè)谖沂∧绦箴B(yǎng)殖密集區(qū)開展了β-內(nèi)酰胺酶特別監(jiān)督抽檢工作。

1抽檢范圍

根據(jù)我省奶業(yè)生產(chǎn)實(shí)際，由省飼料監(jiān)測(cè)所統(tǒng)一組織技術(shù)培訓(xùn)、技術(shù)指導(dǎo)并提供檢測(cè)所需設(shè)備及耗材，選擇我省奶畜養(yǎng)殖較為密集的涇陽(yáng)、臨潼、富平、大荔等四縣作為生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶監(jiān)測(cè)特別監(jiān)督抽查點(diǎn)。

2方案與方法

2.1摸底監(jiān)測(cè)

以涇陽(yáng)、臨潼、富平、大荔四縣的生鮮乳收購(gòu)站為具體監(jiān)測(cè)點(diǎn)，以收購(gòu)站奶罐中的混合乳為監(jiān)測(cè)對(duì)象，由各縣奶業(yè)監(jiān)管部門具體負(fù)責(zé)并實(shí)施監(jiān)測(cè)工作，每天監(jiān)測(cè)一次，連續(xù)跟蹤監(jiān)測(cè)15～20 d，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)匯總。

2.2篩查監(jiān)測(cè)

即乳頭奶監(jiān)測(cè)，由各縣奶業(yè)監(jiān)管部門在轄區(qū)內(nèi)選擇2個(gè)條件較好的健康奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)，每場(chǎng)選擇5頭健康產(chǎn)奶奶牛，連續(xù)5 d監(jiān)測(cè)同一頭奶牛乳頭奶中的β-內(nèi)酰胺酶情況，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)匯總。

2.3技術(shù)跟進(jìn)與指導(dǎo)

篩查監(jiān)測(cè)期間，省所組織了技術(shù)力量開展檢測(cè)前的技術(shù)培訓(xùn)與熟化，在檢測(cè)過(guò)程中，派出技術(shù)人員進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)跟進(jìn)和現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)指導(dǎo)，解決技術(shù)難點(diǎn)和檢測(cè)過(guò)程中出現(xiàn)的各種問題，以保證檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

2.4跟蹤調(diào)查

檢測(cè)期間，及時(shí)匯總各個(gè)檢測(cè)點(diǎn)上反饋的檢測(cè)結(jié)果，積極組織技術(shù)人員深入奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)戶,針對(duì)生鮮乳中的β-內(nèi)酰胺酶檢出情況，開展調(diào)查工作，尋找β-內(nèi)酰胺酶的影響因素。

3抽檢與調(diào)查結(jié)果

3.1摸底監(jiān)測(cè)結(jié)果

此次摸底監(jiān)測(cè)，共檢測(cè)生鮮乳收購(gòu)站321個(gè)，監(jiān)測(cè)生鮮乳樣品4118批次，檢出β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性樣品20批次，檢出率為0.46%。經(jīng)過(guò)對(duì)20批次β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性樣品(采用杯碟法)進(jìn)行確證后，20批次樣品均含有β-內(nèi)酰胺酶。

3.2篩查結(jié)果

持續(xù)監(jiān)測(cè)8個(gè)養(yǎng)殖環(huán)境較好的奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)的40頭健康奶牛的乳頭奶，監(jiān)測(cè)乳頭奶樣品200批次，全部采用現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，結(jié)果全部呈現(xiàn)陰性，即未檢出β-內(nèi)酰胺酶。

3.3跟蹤調(diào)查結(jié)果

根據(jù)β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性樣品，我們深入奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)戶,采取現(xiàn)場(chǎng)座談、提問、實(shí)際查看飼喂現(xiàn)場(chǎng)和走訪群眾等方式進(jìn)行實(shí)際調(diào)研，并對(duì)一些群眾觀點(diǎn)和認(rèn)識(shí)，采取了逐一核實(shí)和現(xiàn)場(chǎng)采樣檢測(cè)的方法進(jìn)行印證，通過(guò)以上細(xì)致工作，我們認(rèn)為影響生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)結(jié)果的因素有以下幾個(gè)方面：

3.3.1有病個(gè)體或長(zhǎng)期不干凈飲水乳頭奶監(jiān)測(cè)結(jié)果表明：連續(xù)5 d測(cè)定利用人工擠奶方法從健康個(gè)體奶牛乳頭上擠出的牛奶進(jìn)行β-內(nèi)先胺酶檢測(cè)，均未檢出β-內(nèi)先胺酶；但有病?；虿唤】档哪膛Ｋa(chǎn)的牛奶均被檢出β-內(nèi)先胺酶。除此之外，調(diào)查還發(fā)現(xiàn)，給奶牛長(zhǎng)期飲用不干凈或高溫環(huán)境放置時(shí)間較長(zhǎng)的自來(lái)水，牛奶中也會(huì)檢出β-內(nèi)先胺酶。這些現(xiàn)象表明：生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶的來(lái)源，不僅與奶牛個(gè)體健康與否有關(guān)，還與飼養(yǎng)管理?xiàng)l件及飲水衛(wèi)生有關(guān)。

3.3.2乳的種類及新鮮程度生鮮乳具有生物活性，產(chǎn)生β內(nèi)酰胺酶是生鮮乳內(nèi)生物菌群的一種自我機(jī)能反應(yīng)。剛擠出健康奶牛個(gè)體所產(chǎn)生的生鮮乳β內(nèi)酰胺酶監(jiān)測(cè)呈陰性，當(dāng)儲(chǔ)存不當(dāng)、放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或冷凍時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，同樣會(huì)被檢出β內(nèi)酰胺酶。我們將β內(nèi)酰胺酶陰性樣品冷藏到4℃冰箱中3 d后，取出解凍后進(jìn)行β內(nèi)酰胺酶檢測(cè)，結(jié)果被檢出陽(yáng)性；將新鮮的β內(nèi)酰胺酶陰性樣品自然放置2 d后進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果也呈陽(yáng)性。這說(shuō)明β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)結(jié)果與生鮮乳的新鮮程度有關(guān)。

3.3.3檢測(cè)卡的選擇性與差異性不同的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)卡，對(duì)乳的種類有著明顯的選擇性，用前要進(jìn)行技術(shù)評(píng)價(jià)。用維德維康的β內(nèi)酰胺酶檢測(cè)卡，對(duì)牛奶和羊奶的添加樣進(jìn)行β內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試驗(yàn)，結(jié)果β內(nèi)酰胺酶檢測(cè)卡對(duì)牛奶非常敏感，對(duì)羊奶的敏感程度不如牛奶，因而出現(xiàn)個(gè)別假陽(yáng)性。另外，使用相同批次的陽(yáng)性樣品和陰性樣品，對(duì)兩家公司的β內(nèi)酰胺酶檢測(cè)卡進(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí)，其測(cè)試結(jié)果的陽(yáng)性差異率與陰性差異率也相差較大。

3.3.4環(huán)境溫度與檢測(cè)卡的穩(wěn)定性試驗(yàn)用同一β內(nèi)酰胺酶的陽(yáng)性牛奶，用相同的檢測(cè)卡在高溫和低溫環(huán)境下進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果陽(yáng)性重合率只有80%。這說(shuō)明β內(nèi)酰胺酶檢測(cè)卡的穩(wěn)定性受檢測(cè)環(huán)境溫度影響較大。使用同一β內(nèi)酰胺酶的陽(yáng)性和陰性牛奶，對(duì)北京尤尼賽斯科技有限公司、北京維德維康科技有限公司、深圳綠詩(shī)源有限公司的檢測(cè)卡進(jìn)行比較試驗(yàn)，結(jié)果表明：不同的檢測(cè)卡，在相同條件下，其檢測(cè)結(jié)果的陽(yáng)性重合率與陰性重合率也存在不同程度的差異。因此，使用檢測(cè)卡時(shí)，要先進(jìn)行技術(shù)評(píng)價(jià)和環(huán)境溫度測(cè)評(píng)，保證環(huán)境溫度符合檢測(cè)要求。

3.3.5采樣工具的衛(wèi)生潔凈程度生鮮乳樣品采集時(shí)，所用的采樣瓶的衛(wèi)生潔凈程度，對(duì)β內(nèi)酰胺酶檢測(cè)結(jié)果同樣會(huì)產(chǎn)生影響。用污染或不干凈的采樣瓶，采集健康奶牛的乳頭奶，有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)β內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性結(jié)果，這主要是因?yàn)槲廴净虿桓蓛舻牟蓸悠坑心承┙Y(jié)構(gòu)類似β內(nèi)酰胺酶的抗原物質(zhì)，會(huì)導(dǎo)致β內(nèi)酰胺酶被檢出。

3.3.6一些治療奶牛乳房炎的抗菌藥物調(diào)查中，據(jù)用戶反映，一些標(biāo)注“無(wú)抗”用于治療奶牛乳房炎的抗菌藥物直接注射進(jìn)奶牛乳房后，奶牛所產(chǎn)的牛奶會(huì)被檢出β內(nèi)酰胺酶，在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，將這些“無(wú)抗”藥滴加到陰性樣品中進(jìn)行β內(nèi)酰胺酶檢測(cè)時(shí)，樣品均呈陽(yáng)性。另外，用戶還反映，含“無(wú)抗”藥物的牛奶，藥效持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，殘留在管道中清洗3次后，奶樣仍會(huì)檢出β內(nèi)酰胺酶。

4結(jié)論與建議

根據(jù)這次生鮮乳中β內(nèi)酰胺酶的特別監(jiān)督抽查結(jié)果，我們認(rèn)為目前在奶價(jià)持續(xù)走低，高密度監(jiān)測(cè)、嚴(yán)管、嚴(yán)查、嚴(yán)打的情況下，人為添加的可能性不大，而影響生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)結(jié)果的主要因素與奶畜個(gè)體健康狀況、飼養(yǎng)管理水平、養(yǎng)殖衛(wèi)生環(huán)境及飲水等有關(guān)。為了避免或減少生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶的污染情況，切實(shí)提高我省生鮮乳質(zhì)量安全水平，特作如下建議。

4.1要積極倡導(dǎo)“健康養(yǎng)殖理念”

努力提高飼養(yǎng)管理水平，降低奶畜疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，要加強(qiáng)科學(xué)養(yǎng)殖技術(shù)、技術(shù)規(guī)范、技術(shù)方法方面

的培訓(xùn)和指導(dǎo)，積極倡導(dǎo)“健康養(yǎng)殖理念”，大力推進(jìn)科學(xué)養(yǎng)殖實(shí)用技術(shù)的普及、引導(dǎo)和推廣，杜絕養(yǎng)殖環(huán)節(jié)違禁獸藥、添加劑的添加和使用現(xiàn)象，努力改善奶畜養(yǎng)殖及飲水的衛(wèi)生環(huán)境，不斷提高奶畜飼養(yǎng)管理水平，降低奶畜疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。要加強(qiáng)對(duì)有病奶畜的登記和分群管理，防止有病奶畜乳、休藥期乳、有抗酸敗奶流入市場(chǎng)，努力提升奶源生鮮乳質(zhì)量安全水平。

4.2要加快奶站化驗(yàn)室條件與能力建設(shè)

增強(qiáng)違禁添加物的預(yù)防與控制能力，要通過(guò)宣傳引導(dǎo)、法律規(guī)范、項(xiàng)目資金和財(cái)政資金支持，加快奶站化驗(yàn)室條件建設(shè)與檢測(cè)能力建設(shè)。重點(diǎn)加強(qiáng)奶站檢測(cè)儀器設(shè)備建設(shè)和奶站檢測(cè)人員檢測(cè)技術(shù)能力建設(shè)?？焖偬嵘陶净?yàn)室的快速檢測(cè)技術(shù)水平。

4.3持續(xù)開展生鮮乳中β內(nèi)酰胺酶等違禁物質(zhì)的抽檢

加強(qiáng)跟蹤摸排與溯源工作，我國(guó)農(nóng)業(yè)部將β-內(nèi)酰胺酶列入牛奶違禁添加物并以公告形式發(fā)布全國(guó)。嚴(yán)厲打擊違法添加行，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)，及時(shí)移送司法機(jī)關(guān)進(jìn)行追查，發(fā)現(xiàn)一起，查處一起，絕不手軟。各地奶業(yè)監(jiān)管部門要持續(xù)開展生鮮乳中β內(nèi)酰胺酶等違禁物質(zhì)抽檢與跟蹤監(jiān)測(cè)，形成嚴(yán)管、嚴(yán)打之勢(shì)，確保生鮮乳質(zhì)量安全。

4.4加強(qiáng)“無(wú)抗”類藥物成份的分析和研究

進(jìn)一步查明乳中“β內(nèi)酰胺酶”是否與“無(wú)抗”類藥物有關(guān),根據(jù)調(diào)查和用戶反映，“無(wú)抗”類藥物有可能會(huì)引起生鮮乳中β內(nèi)酰胺酶檢出，建議開展“無(wú)抗”類藥物成份分析和研究，進(jìn)一步查明乳中“β內(nèi)酰胺酶”是否與“無(wú)抗”類藥物有關(guān)。

4.5要加大技術(shù)培訓(xùn)

不斷提高生鮮乳質(zhì)量安全檢測(cè)技術(shù)水平,β內(nèi)酰胺酶快速檢測(cè)技術(shù)經(jīng)過(guò)培訓(xùn)全省現(xiàn)已基本掌握，但在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中，還有很多問題需要注意，如乳的種類、乳的新鮮程度、β-內(nèi)先胺酶檢測(cè)的穩(wěn)定性、采樣工具的潔凈程度等諸多因素都會(huì)影響到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，要不斷地學(xué)習(xí)、交流和總結(jié)，努力提升檢測(cè)隊(duì)伍的技術(shù)水平。

[收稿日期]2015-10-18

[作者簡(jiǎn)介]田西學(xué)(1959-)，男，陜西富平人,本科，研究員，主要從事畜牧技術(shù)推廣和飼料與生鮮乳質(zhì)量安全監(jiān)測(cè)與管理工作。

[中圖分類號(hào)]TS 252

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1004-6704(2016)02-0064-02