吳孝杰，吳　紅

(甘肅畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，甘肅 武威733006)

一例獺兔兔瘟的診斷與治療

吳孝杰，吳紅*

(甘肅畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，甘肅 武威733006)

摘要：兔瘟是由兔出血癥病毒引起一種急性、熱性、高度接觸性、高度致死性傳染病，發(fā)病迅速，傳播猛烈，發(fā)病率及病死率很高，對(duì)養(yǎng)兔業(yè)危害甚大，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本文結(jié)合養(yǎng)殖場(chǎng)的實(shí)際案例，從該病的臨床癥狀、剖檢特征、診斷及防治措施等進(jìn)行闡述，希望對(duì)該病預(yù)防和治療的方法有所幫助。

關(guān)鍵詞：兔瘟；診斷；防治

兔瘟(rabbit hemorrhagic disease,RHD)，是一種急性、熱性、高度接觸性、高度致死性傳染病，是由兔出血癥病毒引起的一種以呼吸系統(tǒng)出血、肝壞死、實(shí)質(zhì)器官水腫、瘀血和出血為特征的傳染疾病。該病主要經(jīng)消化道、呼吸道和皮膚傷口傳播，自然潛伏期2～3 d，根據(jù)癥狀分為最急性、急性和慢性三種型。不同品種和性別的兔均可感染發(fā)病，但以長(zhǎng)毛兔最敏感，3月齡以上的青年兔與成年兔發(fā)病率和死亡率最高(90%～100%)，2月齡以內(nèi)的仔兔感染一般發(fā)病較少。病兔、隱性感染兔和康復(fù)兔為主要傳染源。本病因潛伏期短，發(fā)病急、病程短、傳播快、發(fā)病率和病死率極高，常呈暴發(fā)性流行，給養(yǎng)兔業(yè)造成極大的經(jīng)濟(jì)損失，已成為危害養(yǎng)兔業(yè)最嚴(yán)重的一種疾病。2015年11月初，武威市涼州區(qū)某獺兔場(chǎng)發(fā)生兔瘟，現(xiàn)將這起兔瘟的診斷和治療情況報(bào)道如下，以供參考借鑒。

1基本情況和臨床癥狀

2015年11月12日武威市涼州區(qū)小泉村一獺兔場(chǎng)發(fā)病，繁殖兔舍共有106只母兔和340只哺乳仔兔，5 d內(nèi)不明原因死亡42只母兔，仔兔死亡68只。養(yǎng)殖者用氨基糖苷類與喹諾酮類藥物飲水、青霉素和鏈霉素注射治療，效果不理想。據(jù)發(fā)病癥狀分析及死亡兔的剖檢變化可判斷是兔瘟。隨即交待養(yǎng)殖者按照筆者開(kāi)具的治療辦法進(jìn)行治療，7 d后，對(duì)養(yǎng)殖者進(jìn)行回訪得知病情基本得到了控制，繼發(fā)感染停止，其中母兔死亡 11只，仔兔死亡2只，其他發(fā)病輕的病情逐漸好轉(zhuǎn)，可以少量進(jìn)食，精神逐漸恢復(fù)。

經(jīng)問(wèn)診、現(xiàn)場(chǎng)查看，病兔主要表現(xiàn)為食欲不振，飲水增加，精神萎頓，皮毛無(wú)光澤，迅速消瘦；測(cè)量發(fā)現(xiàn)病兔體溫高達(dá)41 ℃。臨死前病兔表現(xiàn)短期興奮、狂奔、驚跑、咬籠架，繼而前肢俯伏，后肢支起，全身顫抖，倒地抽搐，四肢不斷劃動(dòng)，角弓反張并發(fā)出悲慘的尖叫聲，死前肛門松弛，肛門四周被毛和糞球上附有少量淡黃色黏液。

2剖檢特征

對(duì)具有代表性的可疑病兔和病死兔15只進(jìn)行病理剖檢，病死兔外觀呈角弓反張狀，鼻孔流出鮮紅色分泌物，臟器病變主要表現(xiàn)為廣泛性實(shí)質(zhì)器官和官腔器官的淤血、出血、水腫、壞死。鼻腔、喉頭和氣管黏膜有小點(diǎn)狀或彌漫性出血，氣管內(nèi)充滿大量淺紅色帶血泡沫狀液體。肺臟有不同程度充血、出血，出現(xiàn)數(shù)量不等的出血斑點(diǎn)。脾臟充血腫脹，由正常寬3 mm、長(zhǎng)4 cm變?yōu)閷? cm、長(zhǎng)7 cm，顏色變?yōu)榍嘧仙８闻K淤血腫大，有出血斑點(diǎn)，呈淺黃色，表面有灰白色壞死灶、質(zhì)脆。腎臟充血腫大，呈紫黑色。膀胱積尿，內(nèi)有黃褐色濃稠尿液。十二指腸和空腸黏膜有點(diǎn)狀出血，腸系淋巴結(jié)腫大，有出血點(diǎn)。

3診斷

3.1初步診斷

根據(jù)傳染性極強(qiáng)，呼吸系統(tǒng)出血，實(shí)質(zhì)器官水腫、淤血和出血性變化等流行特點(diǎn)，結(jié)合該獺兔場(chǎng)發(fā)病情況、臨床癥狀和剖檢變化初步診斷為兔瘟，并分別采集病死兔脾、肝、肺、腎等典型病變臟器進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。

3.2細(xì)菌試驗(yàn)

因兔瘟與兔巴氏桿菌病臨床癥狀和病理變化有很多相似之處，故無(wú)菌取肺、肝、脾等病料分別接種于普通瓊脂平板、鮮血瓊脂平板上，于37 ℃溫箱中培養(yǎng)48 h，未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)；用病料涂片，進(jìn)行堿性美藍(lán)染色、鏡檢，也未見(jiàn)兩極濃染的短小桿菌，故可排除巴氏桿菌感染。

3.3血凝試驗(yàn)

利用兔瘟病毒能夠凝集人“O”型紅細(xì)胞的特性，通過(guò)血凝試驗(yàn)可以確定病死兔體內(nèi)是否含有該病毒。無(wú)菌采集的病兔肝臟、肺臟、脾臟剪碎，用PBS做1:10倍稀釋，研磨制成乳劑，將乳劑倍比稀釋，使其稀釋度為10、20、40、80、160、320、640、1280。采用玻片凝集法，取倍比稀釋的乳劑各50 uL滴于玻璃板上，再取50 uL 2% 人“O”型紅血球懸液與乳劑混合，輕輕搖動(dòng)玻板，置室溫5 min，觀察結(jié)果。設(shè)PBS稀釋液作陰性對(duì)照。結(jié)果顯示：PBS中紅細(xì)胞均勻、渾濁，而被檢乳劑中紅細(xì)胞呈塊狀凝集，HA效價(jià)為1:80-1:640。因此說(shuō)明樣品中含有兔瘟病毒。

3.4RT-PCR

參照兔出血病病毒(RHDV)基因序列(GenBank Aeession AF45761)，設(shè)計(jì)一對(duì)引物，擴(kuò)增的片段大小為581 bp。按Trizol法提取RNA后，按照胡迎東等方法進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)。PCR反應(yīng)條件為：94 ℃ 1 min，61 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，94 ℃ 3 min，35個(gè)循環(huán)后，于72 ℃延伸5 min。取5 uL PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。結(jié)果顯示樣品在581處有光亮條帶，與理論設(shè)計(jì)值大小相符(見(jiàn)圖1)。因此可確定此分離病毒為兔出血病病毒。

圖1　RT-PCR擴(kuò)增凝膠電泳圖

3.5動(dòng)物感染試驗(yàn)

將12只3月齡健康獺兔分成3組，每組4只，取病料懸液采用肌肉注射第1組家兔，每只0.5 mL；將該病料懸液與兔瘟陽(yáng)性血清混合均勻，37 ℃作用2 h左右，然后再皮下注射第2組家兔，每只0.5 mL；第3組為對(duì)照組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，第1組家兔在接種后2-36 h死亡，其臨床癥狀和病理變化與病死兔一致；而第2組和第3組獺兔連續(xù)觀察7 d，仍健康無(wú)發(fā)病現(xiàn)象，故可確診造成家兔感染死亡的原因?yàn)橥梦敛《靖腥尽?/p>

4防控措施

4.1隔離消毒

搞好衛(wèi)生，嚴(yán)格消毒，病死兔作無(wú)害化處理。兔舍、兔籠、用具及周圍環(huán)境加強(qiáng)消毒，每天5% 來(lái)蘇爾消毒2次。對(duì)飼養(yǎng)管理用具、污染的環(huán)境、糞便等用2% 燒堿溶液消毒，對(duì)被污染的飼料進(jìn)行高溫等無(wú)害化處理，兔毛和兔皮用福爾馬林熏蒸消毒，及時(shí)隔離病兔及可疑兔，封鎖疫點(diǎn)，將病死兔焚燒深埋，以切斷污染源。

4.2緊急接種

對(duì)所有尚未發(fā)病兔采用兔瘟組織滅活疫苗進(jìn)行緊急免疫接種。其過(guò)程如下：將剖檢癥狀明顯的病兔的肝、腎、脾、肺臟無(wú)菌取出，分別剔除結(jié)締組織后，用生理鹽水清洗，于每100 g含毒組織中加入事先經(jīng)預(yù)熱的含1.2% 甲醛的無(wú)菌生理鹽水溶液450 mL，置于高速的組織搗碎機(jī)(10 000～20 000 r/min)中搗碎4～5 min,取出后以3層滅菌紗布過(guò)濾于玻璃容器中，于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中滅活48 h，每天上午、下午各均勻擺動(dòng)兩次，取出后再加等量的不含甲醛的無(wú)菌生理鹽水，搖勻后分裝于滅菌的玻璃瓶中，再于每500 mL中加入青霉素、鏈霉素各100萬(wàn)IU，搖勻。45日齡以上兔每只皮下注射1 mL，45日齡以下兔每只皮下注射0.5 mL，21 d后加強(qiáng)免疫一次。

4.3及時(shí)治療

對(duì)隔離的病兔立即注射兔瘟高免血清，每只3 mL，10 d后再注射兔瘟疫苗。對(duì)所有存欄兔全部用復(fù)方大青葉注射液2 mL肌肉注射，每天一次，連用3 d。對(duì)體質(zhì)虛弱的獺兔可用5% 葡萄糖鹽水20～30 mL、維生素C 2～5 mL、維生素B1 2～5 mL，一次性耳靜脈緩慢注射；伴有腹瀉者可加入慶大霉素2～5萬(wàn)IU，每天2次，兩用3-5 d。經(jīng)采取以上措施，疫情從防治后第5 d即開(kāi)始趨向好轉(zhuǎn)，除少數(shù)患兔死亡外，疫情基本得到控制，到12月10日以后沒(méi)有再出現(xiàn)死亡。

5討論與小結(jié)

5.1 重在預(yù)防

兔瘟發(fā)病急、傳播快，流行面廣，病情嚴(yán)重，死亡率高。因此，重在預(yù)防。目前，最有效的預(yù)防措施是定期預(yù)防接種病毒性出血癥滅活苗。仔兔35～40日齡首免，55～60日齡加強(qiáng)免疫，以后每隔4個(gè)月免疫一次，劑量1 mL/只。注射后3 d即能產(chǎn)生高滴度的內(nèi)源性干擾素阻止病毒復(fù)制；注射后7 d～10 d產(chǎn)生免疫力。

堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，從不從疫區(qū)購(gòu)買種兔，并認(rèn)真執(zhí)行獸醫(yī)衛(wèi)生防疫措施；定期消毒，禁止外人進(jìn)入兔場(chǎng)；引種時(shí)嚴(yán)格檢疫，并隔離飼養(yǎng)觀察至少兩周，無(wú)病時(shí)方可入群飼養(yǎng)。加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，提高兔群抗病力，搞好環(huán)境衛(wèi)生，做好兔舍、兔籠、用具及周圍環(huán)境的定期消毒工作。

5.2控制措施

本病尚無(wú)特效藥物治療，預(yù)防接種是防止兔瘟的最佳途徑。一旦發(fā)生本病，封鎖疫點(diǎn)、暫時(shí)停止種兔調(diào)劑，關(guān)閉兔及兔產(chǎn)品交易市場(chǎng)。對(duì)病兔立即進(jìn)行撲殺深埋或焚燒，對(duì)兔舍和籠具用3% 氫氧化鈉嚴(yán)格消毒，按預(yù)防量的3倍量緊急注射兔瘟疫苗，以上對(duì)控制疫情的擴(kuò)大具有積極作用。

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A Diagnosis and Cure of Rabbit Hemorrhagic Disease

WU Xiao-jie, WU Hong

(GansuPolytechnicCollegeofAnimalHusbandryandEngineering,WuweiGansu733006)

Abstract:Rabbit hemorrhagic disease is caused by the rabbit hemorrhagic disease viral. It’s an acute, febrile, high direct contact and lethal diseases. Moreover, the characteristic of Rabbit hemorrhagic disease are develop rapidly, spread fiercely, high incidence and mortality, and it can create huge harm and economic loss. This paper integrated a practical case of a farm, and summarized from the clinical symptoms, pathological traits, laboratory diagnosis, prevention, control and other aspects. The aim was to help counterparts to prevent and control the rabbit plague.

Key words:rabbit hemorrhagic disease;diagnose;prevention and cure

[收稿日期]2015-10-18

[作者簡(jiǎn)介]吳孝杰(1983-)，女，吉林永吉人，講師，碩士，從事畜牧獸醫(yī)專業(yè)教學(xué)。E-mail：wuxiaojie334@163.com *[通訊作者]吳紅(1970-)，女，甘肅酒泉人，本科，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，主要從事動(dòng)物疫病診療和實(shí)驗(yàn)室化驗(yàn)工作。E-mail：wuxiaojie334@163.com

[中圖分類號(hào)]S 858.291

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]C

[文章編號(hào)]1004-6704(2016)02-0137-03