沈永順 賴(lài)愛(ài)萍 凌素環(huán) 王虎 程雅婷

串聯(lián)質(zhì)譜用于檢測(cè)濕疹兒童維生素D水平的臨床研究

沈永順 賴(lài)愛(ài)萍 凌素環(huán) 王虎 程雅婷

目的研究分析串聯(lián)質(zhì)譜用于檢測(cè)濕疹兒童維生素D水平的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法200例兒科門(mén)診治療的濕疹患兒作為觀察組,同期進(jìn)行體檢的200例兒童中作為對(duì)照組,對(duì)比分析兩組的血清維生素D水平以及T淋巴細(xì)胞亞群,并分析維生素D水平與T淋巴細(xì)胞亞群相關(guān)性,予以觀察組患兒糠酸莫米松凝膠外用患處,2次/d、口服維生素D3400 IU,1次/d,治療30 d后再檢測(cè)觀察組治療后上述指標(biāo)的變化。結(jié)果治療前兩組的總維生素D及維生素D3水平比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；觀察組與對(duì)照組CD8+CD28+及CD28+分布為(22.7±2.6)、(64.3±6.8)%和(19.2±4.6)、(44.7±5.3)%,觀察組明顯高于對(duì)照組(P<0.01)；觀察組CD8+CD28-百分比為(5.8±2.6)%,明顯低于對(duì)照組的(8.2±2.3)%(P<0.01)。隨著維生素D水平的下降,CD8+CD28+及CD28+的百分比逐漸上升,CD8+CD28-的百分比不斷下降,觀察組經(jīng)過(guò)治療后,維生素D水平明顯上升。結(jié)論串聯(lián)質(zhì)譜對(duì)于檢測(cè)濕疹兒童維生素D水平的具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)；維生素D；濕疹；兒童

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展,醫(yī)療技術(shù)隨之進(jìn)步,質(zhì)譜檢測(cè)在臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值已經(jīng)得到廣泛的認(rèn)可。氣相、高效液相色譜聯(lián)用技術(shù)以及串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)很大程度擴(kuò)展了質(zhì)譜技術(shù)的應(yīng)用范圍,其中串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)成為臨床生化檢驗(yàn)中較為常用的檢測(cè)手段［1］。兒童濕疹是一種變態(tài)反應(yīng)性皮膚病,也叫過(guò)敏性皮膚病,目前臨床認(rèn)為導(dǎo)致本病發(fā)生的主要原因是對(duì)吸入物、食物以及接觸物過(guò)敏或不耐受導(dǎo)致,患兒主要的臨床表現(xiàn)為起病初期皮膚發(fā)紅、皮疹,皮膚脫屑,濕疹患兒遇熱或遇濕均可加重臨床表現(xiàn)［2］。本文主要針對(duì)串聯(lián)質(zhì)譜用于檢測(cè)濕疹兒童維生素D水平的臨床應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行探究。

1 資料與方法

1.1 一般資料 從2013年5月～2014年5月深圳市大鵬新區(qū)婦幼保健醫(yī)院兒科門(mén)診治療的濕疹患兒中隨機(jī)選取200例作為觀察組,并同期在深圳市大鵬新區(qū)婦幼保健醫(yī)院進(jìn)行體檢的兒童中隨機(jī)選取200例作為對(duì)照組。觀察組男120例,女80例,年齡1～12歲,平均年齡(6.48±3.41)歲；對(duì)照組男109例,女91例,年齡1～11歲,平均年齡(6.15±3.67)歲。所有研究對(duì)象于研究前2周均未應(yīng)用皮質(zhì)類(lèi)固醇激素以及抗組織胺藥物。兩組性別、年齡等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2 儀器與方法 檢查儀器：采用的儀器包括Quantum Access型三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀和Surveyor型高效液相色譜儀。試劑包括去離子水、甲醇、乙酰胺。檢查時(shí)間：所有的患者均于空腹采集靜脈血,靜置后離心。

1.3 治療方法 對(duì)觀察組患兒進(jìn)行糠酸莫米松凝膠外用患處［3］,2次/d、口服維生素D3400 IU,1次/d,治療30 d后再檢測(cè)觀察組治療后上述指標(biāo)的變化。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性檢驗(yàn)采用Pearson分析。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對(duì)象血清維生素D水平檢測(cè)結(jié)果 兩組研究對(duì)象總維生素D及維生素D3水平比較差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療后觀察組患者的維生素D水平明顯上升。見(jiàn)表1。

2.2 兩組T淋巴細(xì)胞亞群分析 觀察組與對(duì)照組CD8+CD28+及CD28+分布為(22.7±2.6)、(64.3±6.8)%和(19.2±4.6)、(44.7± 5.3)%,觀察組明顯高于對(duì)照組(P<0.01)；觀察組CD8+CD28-百分比為(5.8±2.6)%,明顯低于對(duì)照組的(8.2±2.3)%(P<0.01)。見(jiàn)表2。

表1 兩組血清維生素D水平檢測(cè)結(jié)果比較(±s,ng/ml)

表1 兩組血清維生素D水平檢測(cè)結(jié)果比較(±s,ng/ml)

注：與對(duì)照組比較,aP<0.05；與本組治療后比較,bP<0.05

指標(biāo) 觀察組(n=200) 對(duì)照組(n=200) 觀察組治療后(n=200)總維生素D 23.78±2.37ab 31.52±4.20 26.84±3.45維生素D2 4.29±2.48ab 3.29±5.82 3.45±2.05維生素D3 23.03±2.06ab 29.16±4.92 25.79±3.94

表2 兩組外周血T淋巴細(xì)胞亞群比較 (±s,%)

表2 兩組外周血T淋巴細(xì)胞亞群比較 (±s,%)

注：與對(duì)照組比較,aP<0.01

組別 例數(shù) CD8+ CD8+CD28+ CD8+CD28- CD28+觀察組 200 24.5±4.0 22.7±2.6a 5.8±2.6a 64.3±6.8a對(duì)照組 200 25.6±4.3 19.2±4.6 8.2±2.3 44.7±5.3觀察組治療后 200 24.9±4.2 20.1±3.0 6.9±2.5 56.3±6.1t1.54 16.32 13.68 33.78P>0.05 <0.01 <0.01 <0.01

2.3 維生素D水平與T淋巴細(xì)胞亞群相關(guān)性 隨著維生素D水平的下降,CD8+CD28+及CD28+的百分比逐漸上升,CD8+CD28-的百分比則在不斷的下降。見(jiàn)表3?？梢?jiàn)CD8+與維生素D水平無(wú)相關(guān)性,CD8+CD28+、CD28+淋巴細(xì)胞亞群百分比與維生素D水平呈負(fù)相關(guān),CD8+CD28-則與維生素D水平呈正相關(guān)。見(jiàn)表4。

表3 各組外周血T淋巴細(xì)胞亞群比較(±s,%)

表3 各組外周血T淋巴細(xì)胞亞群比較(±s,%)

組別 例數(shù) CD8+ CD8+CD28+ CD8+CD28- CD28+觀察組1 18 22.8±3.8 23.5±3.9 5.5±1.8 69.2±7.5觀察組2 60 22.8±3.6 22.7±2.7 5.8±1.5 66.9±8.6觀察組3 122 24.6±3.7 21.5±2.5 7.2±3.5 58.6±7.1對(duì)照組 200 25.6±3.3 18.6±2.8 8.7±3.6 47.2±6.5t1.44 15.12 12.78 35.10P>0.05 <0.01 <0.01 <0.01

表4 不同T淋巴細(xì)胞亞群與維生素D水平的Pearson分析

3 討論

維生素D是機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育所必需的一類(lèi)物質(zhì),其來(lái)源主要為從食物獲取以及由機(jī)體皮膚合成［4］。機(jī)體維生素D經(jīng)過(guò)腎臟以及肝臟等在體內(nèi)羥化作用后,生成25(OH)D3以存在于機(jī)體血液循環(huán)中。25(OH)D3經(jīng)1α-羥化酶進(jìn)一步進(jìn)行羥化作用,可變?yōu)樯锘钚愿鼮閺?qiáng)大的1,25(OH)2D3。正常情況下機(jī)體內(nèi)的單核細(xì)胞可在1,25(OH)2D3的介導(dǎo)作用下進(jìn)一步的分化和成熟,逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)槊庖呋钚愿鼜?qiáng)的巨噬細(xì)胞。同時(shí)在1,25(OH)2D3的刺激作用下,巨噬細(xì)胞產(chǎn)生分泌產(chǎn)生前列腺素E2,從而對(duì)趨化因子以及炎癥細(xì)胞因子的分泌起到抑制性作用。維生素D對(duì)機(jī)體樹(shù)突狀細(xì)胞的作用同時(shí)具有一定的調(diào)節(jié)性。機(jī)體的抗原遞呈主要依靠樹(shù)突狀細(xì)胞,根據(jù)樹(shù)突狀細(xì)胞的來(lái)源可將其分為淋巴系以及髓系兩大類(lèi)。1,25(OH)2D3可對(duì)機(jī)體樹(shù)突狀細(xì)胞的分化以及成熟起到一定程度的抑制性作用,使樹(shù)突狀細(xì)胞處于未成熟狀態(tài),從而使共刺激分子以及主要組織相容性抗原-Ⅱ(MHC-Ⅱ)的表達(dá)水平下調(diào),進(jìn)一步抑制白細(xì)胞介素-2(IL-2)以及干擾素-γ(IFN-γ)的分泌作用,促使白細(xì)胞介素-10(IL-10)的分泌。從而使得機(jī)體樹(shù)突狀細(xì)胞凋亡,對(duì)機(jī)體的Th1反應(yīng)起到間接性的抑制作用。另外,活化T細(xì)胞的分化也受到機(jī)體1,25(OH)2D3的影響。上述指出,1,25(OH)2D3可抑制機(jī)體IL-2以及IFN-γ的分泌作用,對(duì)機(jī)體的Th1細(xì)胞反應(yīng)產(chǎn)生抑制,同時(shí)其還可通過(guò)促使機(jī)體IL-4、IL-5以及IL-10等的產(chǎn)生,起到對(duì)Th2細(xì)胞反應(yīng)的增強(qiáng)作用。在1,25(OH)2D3對(duì)機(jī)體Th1/Th2細(xì)胞反應(yīng)進(jìn)行相關(guān)調(diào)節(jié)的同時(shí),間接對(duì)B細(xì)胞的活化增殖起到抑制作用,同時(shí)降低機(jī)體Ig的分泌產(chǎn)生。維生素D在機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)中起到極為重要的作用。

兒童濕疹的發(fā)生主要與機(jī)體的免疫細(xì)胞反應(yīng)相關(guān),濕疹患兒主要存在體液免疫以及細(xì)胞免疫的失衡狀態(tài)。當(dāng)Ⅰ型速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)發(fā)生時(shí),受到致敏物質(zhì)的刺激作用,IgE抗體不斷產(chǎn)生,與朗格漢斯細(xì)胞表面的IgE受體結(jié)合并作用,產(chǎn)生砌墻的致敏狀態(tài),誘發(fā)濕疹皮損。Ⅳ型遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)發(fā)生時(shí),T細(xì)胞受到抗原刺激而致敏,機(jī)體的Th1/Th2細(xì)胞的動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)受到嚴(yán)重破壞,機(jī)體細(xì)胞因子的分泌處于極度紊亂狀態(tài),從而誘發(fā)濕疹炎癥性反應(yīng)的發(fā)生以及不斷發(fā)展。而維生素D具有對(duì)機(jī)體IgE水平以及Th1/Th2細(xì)胞反應(yīng)的動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)進(jìn)行調(diào)節(jié)的作用,因此通過(guò)對(duì)機(jī)體維生素D水平高低的檢測(cè)可在一定程度上反應(yīng)兒童濕疹發(fā)生的狀態(tài)。

本次研究結(jié)果顯示,采用串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)血清維生素D發(fā)現(xiàn),患有濕疹的患兒血清維生素D水平明顯低于健康兒童,并且濕疹患兒經(jīng)過(guò)治療后,血清維生素水平升高,此外兩組T淋巴細(xì)胞亞群比較,觀察組患兒CD8+CD28+及CD28+百分比均高于對(duì)照組,而CD8+CD28-百分比則較對(duì)照組低(P<0.01)。并且隨著維生素D水平的下降,CD8+CD28+及CD28+的百分比逐漸上升,CD8+CD28-的百分比則在不斷的下降。并且經(jīng)過(guò)治療后觀察組維生素D水平明顯上升。

綜上所述,串聯(lián)質(zhì)譜在檢測(cè)濕疹兒童維生素D水平具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

［1］郭守東,崔華東,?；?等.液相串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)糖尿病患者血漿25-羥基維生素D3.泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2014,35(3):161-164.

［2］Allen KJ,Koplin JJ,Ponsonby AL,et al.Vitamin D insufficiency is associated with challenge-proven food allergy in infants.Journal of Allergy & Clinical Immunology,2013,131(4):1-6.

［3］Wang SS,Hon KL,Kong APS,et al.Eczema phenotypes are associated with multiple vitamin D pathway genes in Chinese children.Allergy,2014,69(1):118-124.

［4］黃新文,楊建濱,童凡,等.串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)對(duì)新生兒遺傳代謝病的篩查及隨訪研究.中華兒科雜志,2011,49(10):765-770.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.20.123

2016-09-28］

518120 深圳市大鵬新區(qū)婦幼保健院兒科(沈永順賴(lài)愛(ài)萍 凌素環(huán) 王虎)；廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心(程雅婷)