侯曉琳　尚坤

【摘 要】 目的：延冰片是由延胡索、冰片以及輔料制成的片劑，臨床用于冠心病、心絞痛的治療。研究通過對流動相、峰形、分離度以及出峰時間等做比較，旨在制定延冰片中延胡索乙素的含量限度。方法：以延胡索乙素為延冰片的指標(biāo)成分，利用高效液相色譜法測定其含量，以甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺調(diào)pH值6.0）（55∶45）為流動相；檢測波長為280nm。結(jié)果：延胡索乙素可以作為延冰片的定性鑒別；為本制劑制定了含量限定，而每克含胡索乙素不低于5.20mg。結(jié)論：采用高效液相色譜法測定延胡索乙素的含量，該方法精確、快速，可行性良好，適用于延冰片的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 延冰片；延胡索乙素；含量測定

【中圖分類號】R284.1 【文獻標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2015）22-0011-03

延胡索為罌粟科紫堇屬多年生草本植物延胡索（Corydalis yanhusuo W.T.Wang）的干燥塊莖，民間又稱為玄胡、元胡、玄胡索，主要分布于河北、山東、江蘇、浙江、內(nèi)蒙古等地[1]，與山芥、將離、浙貝等并稱“浙八味”。延胡索是活血止痛、利氣之良藥，是活血化瘀，理氣止痛，鎮(zhèn)靜和催眠之佳品，尤以止痛、鎮(zhèn)痛之功效著稱于世[2-3]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，中藥制劑延胡索醇提物可以降低心肌耗氧量，同時可以有效地緩解心絞痛和刺激引起的疼痛、失眠、焦慮等[4]。依據(jù)延冰片處方中藥材有效成分的化學(xué)性質(zhì)研究[5]，采用高效液相色譜法測定三批延冰片試樣中延胡索乙素的含量，同時制定延冰片片劑中延胡索乙素的含量限度。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀；EL-204十萬分之一分析天平。

1.2 試劑 延胡索乙素對照品（批號：0726-200208，中國藥品生物制品研究院）；延胡索藥材均由長春宏檢藥材公司提供；甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 吸收波長（λmax）的選擇 精密移取延胡索乙素對照品溶液和供試品溶液，以無水乙醇溶液為空白，在190～350nm處進行波長掃描，結(jié)果見圖1、2。

2.2 色譜條件的確定 參考相關(guān)文獻及預(yù)試驗，使用Agilent1260 高效液相色譜儀，以甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺調(diào)pH值至6.0）（55∶45）為流動相；檢測波長為280nm。[1]

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備 取延胡索乙素對照品適量，加甲醇制成每1ml含46μg的溶液，即得。

2.3.2 供試品溶液的制備 取本品粉末約0.5g（過三號篩），置錐形瓶中，精密加入濃氨試液-甲醇（1∶20）混合溶液50ml，冷浸1h后加熱回流1h，冷卻至室溫，搖勻，濾過。取續(xù)濾液25ml，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，過濾膜即得。

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定。結(jié)果見圖3、4。

2.4 不同提取方法對延胡索乙素含量的影響 按照2010版《中國藥典》一部中決明子含量測定項下供試品溶液的制備中，延胡索采用回流提取的方法，同時選擇超聲提取與其對比，提取時間為30min，后續(xù)分離純化方法相同。將延胡索乙素對照品與兩個不同方法處理的供試品溶液注入液相色譜儀10μl，結(jié)果見表1。

由表1可知，回流提取與超聲提取延胡索乙素含量無較明顯差異，為使提取方法簡單省時，實驗采用超聲提取30min的方法對供試品粉末進行提取。

2.5 中試藥材的延胡索乙素含量測定

2.5.1 藥材的制備 取本品粉末約1g，過三號篩，電子天平精密稱定，置燒瓶中，精密加入濃氨試液-甲醇（1∶20）混合溶液50ml，超聲處理30min后，冷卻至室溫，定容，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液15ml，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，過濾膜即得[1]。

精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，結(jié)果見圖5、表2。

由表2可知，三批藥材延胡索乙素的平均含量為0.65mg/g。按2010版《中國藥典》延胡索含量的規(guī)定，本品按干燥品計算，含延胡索乙素（C21H25NO4）不得少于0.050%，所以三批藥材均為合格藥材。

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 線性范圍的考察 分別精密吸取濃度為0.044mg/ml的延對照品溶液4、8、12、16、22、24μl，設(shè)定序列，注入液相色譜儀，橫坐標(biāo)以對照品進樣量為參數(shù)，縱坐標(biāo)以峰面積為參數(shù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程為：y=41.346x+2，1924，R2=1。表明進樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。見表3、圖6。

2.6.2 精密度試驗 取濃度為0.044mg/ml的對照品溶液，連續(xù)進樣6次，進樣量為10μl，測定其峰面積。計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，由表4數(shù)據(jù)可知，精密度試驗相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.42%，符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。

2.6.5 加樣回收率試驗 取6份與重現(xiàn)性試驗同批次的片劑，即已知含量為5.01mg/g，精密稱定，分別精密加入濃度為0.044mg/ml的延胡索乙素對照品0.25g，按含量測定項下供試品溶液的制備方法進行操作，計算其加樣回收率，結(jié)果片劑的回收率均在95%～105%之間，平均回收率是99.04%，均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。見表7。

2.7 延冰片中延胡索乙素的含量測定 按延冰片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測定項下方法，制備三批供試品溶液。進樣量為10μl，注入色譜儀，結(jié)果三批延冰片片劑樣品中延胡索乙素的平均含量為5.435mg/g。見表8。

3 討論

本試驗對流動相的篩選做了大量嘗試，試用了不同溶劑及不用比例、不同pH的溶液進行試驗，結(jié)果以本文中所述的流動相為最佳，峰形、分離度、出峰時間等較好。

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)含量測定成分的分析：考慮延胡索中延胡索乙素的含量、轉(zhuǎn)移率、加速與長期穩(wěn)定性均符合要求。參照2010版《中國藥典》一部延胡索含量測定項，確定延冰片的檢測成分為延胡索乙素。根據(jù)三批延冰片片劑樣品中延胡索乙素的平均含量為5.435mg/g，在平均含量的基礎(chǔ)上，總含量下浮20%制定本制劑含量限度，即本品每克中含延胡索乙素（C21H25NO4）不得少于5.20mg，為本品制定了含量限度。

參考文獻

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 劉芳，羅躍娥.延胡索研究概況[J].天津中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2005，24（4）：240-242.

[3] 黃云，陳華師.中藥延胡索的研究進展[C]//中華中醫(yī)藥學(xué)會中藥炮制分會.2011年學(xué)術(shù)年會論文集，2011.

[4] Corey E J， Cheng X M. The logic of chemical synthesis[M].New York： John Wiley&Sons， 1989.

[5] 張萍.延胡索提取物治療冠心病室性心律失常的機理研究[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

（收稿日期：2015.08.05）

2.6.3 穩(wěn)定性試驗 取濃度為0.044mg/ml的對照品溶液和供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12h注入高效液相色譜儀，進樣量10μl。結(jié)果表明，延胡索乙素對照品溶液和供試品溶液穩(wěn)定性的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.46%和2.64%，說明二者在12h內(nèi)穩(wěn)定性較好，符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。

2.6.4 重現(xiàn)性試驗 取批號為20131101的片劑樣品，精密稱量，平行處理6份作為供試品溶液，注入液相色譜儀，進樣量為10μl，結(jié)果延冰片片劑中延胡索乙素的平均含量5.01mg/g，其相應(yīng)的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.89%，符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。見表6。