高陽,白艷紅（菏澤市傳染病醫(yī)院，山東 菏澤 274000；菏澤市榮軍醫(yī)院，山東 菏澤 274000）

抑癌基因XEDAR和LKb1在胃癌中表達(dá)及預(yù)后關(guān)系的研究

高陽,白艷紅
（菏澤市傳染病醫(yī)院，山東 菏澤 274000；菏澤市榮軍醫(yī)院，山東 菏澤 274000）

目的探討抑癌基因XEDAR和LKb1在胃癌中表達(dá)及預(yù)后關(guān)系。方法采用免疫組織化學(xué)(SP)法檢測115例胃癌組織和20例胃正常組織中LKB1的表達(dá)及預(yù)后關(guān)系。結(jié)果抑癌基因XEDAR在胃癌組織中有多種表達(dá)形式,其中以低表達(dá)或不表達(dá)為主。胃癌患者黏膜組織的臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移、LAuren's分型以及患者預(yù)后與抑癌基因LKB1的表達(dá)低有關(guān)(P＜0.05)。結(jié)論XEDAR基因作為抑癌基因參與胃癌的發(fā)生和發(fā)展；胃癌組織黏膜的發(fā)展演變與LKB1的表達(dá)低有關(guān)，并且對于評估胃癌的惡性程度及其預(yù)后判斷具有重要的臨床參考價值。

抑癌基因；XEDAR；LKb1；胃癌

1 臨床資料

1.1 一般資料 胃癌標(biāo)本115例，男性83例，女37例，年齡36～79歲，平均年齡60歲。20例胃正常組織均取自于胃鏡下活檢組織且經(jīng)病理證實為正常胃黏膜組織。

1.2 方法

1.2.1 實驗方法 用10%福爾馬林溶液將全部標(biāo)本先固定處理，再用石蠟包埋，用德國徠卡切片機(jī)連續(xù)切片，厚度4 μ m，備用，分別采用HE法和免疫組織化學(xué)（SP）法免疫組化染色，將制備好的石蠟切片先脫蠟處理，再水化，后用自來水沖洗3次，根據(jù)第一抗體對相應(yīng)胃癌組織的抗原修復(fù)要求，PBS液沖洗，每次3 min，連續(xù)沖洗3次，然后滴加相應(yīng)的第一抗體，4℃恒溫條件下過夜。第二天再用PBS液沖洗，每次3 min，連續(xù)沖洗3次，將PBS液除去，把相應(yīng)的生物素標(biāo)記的第二抗體滴加上，20℃室溫條件下孵育15 min，再用PBS液沖洗，每次3 min，連續(xù)沖洗3次，將PBS液除去，最后用新鮮配制的DAB顯色試劑顯色處理，自來水沖洗后顯色終止，再用配制好的蘇木素行切片復(fù)染，PBS液最后返藍(lán)，經(jīng)75%乙醇浸泡1 min、80%乙醇浸泡1 min、95%乙醇浸泡1 min、100%乙醇浸泡2 min的梯度酒精進(jìn)行干燥脫水處理，二甲苯透明，用中性樹膠將標(biāo)本切片封存固定。本研究實驗染色設(shè)陽性和陰性對照。用已知的陽性組織標(biāo)本切片作陽性對照，用PBS液代替一抗作陰性對照。

1.2.2 方法 XEDAR作用機(jī)制可能為：可通過抑制靶基因c-Myc表達(dá)，進(jìn)而下調(diào)P21基因的表達(dá),同時細(xì)胞周期蛋白CDK2/CDK4復(fù)合物可與P21蛋白結(jié)合，導(dǎo)致其活性受到抑制，從而使腫瘤細(xì)胞周期滯于G1期，最終細(xì)胞增殖受抑制[2]。另有研究基因表達(dá)的學(xué)者發(fā)現(xiàn)XEDAR基因表達(dá)的調(diào)節(jié)還需要P53蛋白，同時XEDAR已經(jīng)被證實通過與P53蛋白相互作用來調(diào)節(jié)基因CDKN1A和SMAD3的轉(zhuǎn)錄及腫瘤生長。XEDAR的功能還與細(xì)胞增殖、分化和調(diào)亡等有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)野生型的P53基因本身就是一種抑癌基因，它將各種不同分子應(yīng)激信號途徑融為一體，通過轉(zhuǎn)錄激活相關(guān)靶基因參與細(xì)胞發(fā)展演變過程，從而完成對細(xì)胞分裂、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞分化各個環(huán)節(jié)的調(diào)控。一般情況下，P53基因被激活后對細(xì)胞的潛在影響有兩種：其一是使細(xì)胞增值停滯在細(xì)胞周期的G1期或G2期，修復(fù)損傷的細(xì)胞；其二是誘發(fā)細(xì)胞凋亡，剃除已經(jīng)變異的細(xì)胞[3]。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) 對免疫組化結(jié)果采用雙盲閱片法，依據(jù)KountourAkis等對基因研究的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn):LKB1表達(dá)主要是棕黃色顆粒沉著于胞漿或胞核。+：胞漿或胞核無染色或腫瘤細(xì)胞表達(dá)10%以下。++:胞漿或胞核10%以上輕微或者少表達(dá)。+++:全部細(xì)胞膜中度以下染色或者胞漿輕中度表達(dá)10%以上。++++: 10%以上的腫瘤細(xì)胞均強(qiáng)表達(dá)。

2 結(jié)果

2.1 胃組織中LKB1基因的表達(dá) 正常胃黏膜組織20例，+者1例，++者5例，+++者8例，++++者6例。胃癌組織中115例患者LKB1基因的表達(dá)：+者91例，++ 者11例，+++者9例，++++者4例。其中在胃癌組織中LKB1基因的陽性表達(dá)率為20.9%，正常胃組織中陽性表達(dá)率為95.0%，兩組比較，P＜0.01,有顯著性差異。

2.2 LKB1的臨床病理特征 胃癌患者黏膜組織的臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移、LAuren's分型以及患者預(yù)后與抑癌基因LKB1的表達(dá)低有關(guān)。發(fā)病年齡＜60歲，LKB1陽性40例，陰性7例，陽性率14.9%。發(fā)病年齡＞60 歲LKB1陽性51例，陰性17例，陽性率25.0%。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N0陽性27例，陰性16例，陽性率37.2%。N1 /N2/N3陽性64例，陰性8例，陽性率11.1%。TNM分期Ⅰ期陽性11例，Ⅱ/Ⅲ/Ⅳ期陽性80例，陰性10例，陽性率11.1%。LAuren's分型中腸型陽性50例，陰性5例，陽性率27.5%，彌漫型陽性41，陰性5例，陽性率10.9%。

3 討論

XEDA基因作為一種染色質(zhì)重塑因子，在多種癌組織中頻繁發(fā)生失活性基因突變，顯示出其重要性的腫瘤抑制作用，代表其死亡受體演變的早期階段可能先于其死亡結(jié)構(gòu)域的出現(xiàn)，同時在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡中和胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用。

XEDAR是新近分離出來的腫瘤抑制蛋白，是腫瘤壞死因子受體家族成員。但于眾多的腫瘤壞死因子受體有所不同，XEDAR基因本身雖然缺乏死亡結(jié)構(gòu)域但仍具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力[4]。研究確定了XEDAR蛋白在抑制細(xì)胞增殖中的作用，其作為一種染色質(zhì)重塑因子還有多個關(guān)鍵性的問題尚待闡明。例如其頻繁發(fā)生失活性基因突變的具體機(jī)制仍不清晰，研究較為零散，且在腫瘤發(fā)生發(fā)展方面研究較少，需進(jìn)行系統(tǒng)研究。

在一些細(xì)胞當(dāng)中LKB1分布比較廣泛，在成人組織和胎兒組織當(dāng)中經(jīng)常會出現(xiàn)其表達(dá)，出現(xiàn)在成人組織中，一般都會是在睪生精小關(guān)上表達(dá)比較強(qiáng)一些。LKB1主要使細(xì)胞增值停滯在細(xì)胞周期的G1期，從而促進(jìn)細(xì)胞的凋亡[5]。另外，LKB1對胚胎血管形成還有細(xì)胞誘導(dǎo)等多個方面都是具有生物學(xué)意義，同時它還是一種重要的抑癌基因。本研究中檢測到胃癌組織中LKB1基因存在表達(dá)下調(diào)，LKB1蛋白的缺失表達(dá)與胃癌關(guān)系緊密聯(lián)系著，且LKB1抑癌作用機(jī)制有可能出現(xiàn)一些負(fù)性的調(diào)節(jié)效果。

綜上所述，抑癌基因ARID1A和LKb1在抑制胃癌的作用中起著積極的作用，值得進(jìn)一步深入研究并運用到臨床中。在本研究中，通過免疫組織化學(xué)方法驗證了LKb1在胃癌發(fā)生發(fā)展中可能起著重要的抑制作用，并且這種基因的表達(dá)可能對患者的預(yù)后有著重要的幫助作用[6]，對胃癌患者在延長其術(shù)后總體生存時間方面也具有積極作用?？梢?，LKB1基因作為候選抑癌基因在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用機(jī)制值得引起關(guān)注。

腫瘤的發(fā)生是多基因參與的復(fù)雜過程，在胃癌發(fā)生發(fā)展中，ARID1A和LKB1可能為相對獨立而又相互作用的抑癌基因，目前研究較為零散，二者的抑癌機(jī)制仍需進(jìn)行系統(tǒng)研究。

[1] 夏雷，莫伏根，李剛，等.胃癌中HER-2和HER-3的表達(dá)及臨床意義[J].實用老年醫(yī)學(xué)，2013，27(11):903-907．

[2] 閆毓秀,張淑萍,滑靜.p53基因研究進(jìn)展[J].北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報, 2009,24(2):74-77

[3] Stammberger HR,Kenney DW.Paranasal sinuse:Anatomict erminology and nomen clature[J].Ann OtoRhinol Laryngol,2011,1 67(s u p p l):7-16.

[4] Kountourakis P，Pavlakis K，Psyrri A，et al.Prognostic significAnce of HER3 And HER4 protein expression in colorectAlAdenocArcinomAs ［J］.BMC CAncer，2006，28(6):46．

[5] She lbourne K D，Brue ckmann RR.Rush-pinfiXation of supracon dylarand intercondy larfracture softhefemur［J］.JBone Joint Surg Am，2010，6 4(2):161–169.

[6] Khanma,Combscs,Bruntem,et al.Positrone mission tomography scanningin the evaluation of hepatocellul ar arcinoma[J].AnnNucl Med,2009,14(2):121-126.

R735.2

：A

：1008-4118（2016）01-0027-02

10.3969/j.issn.1008-4118.2016.01.010胃癌是世界各國常見的癌癥之一，是一種消化道的惡性腫瘤，且發(fā)病率非常高，死亡率也很高，在我國胃癌也是發(fā)病率最高的消化道腫瘤[1]，但胃癌的診治一直是個難題，并且多種基因分子的突變參與胃癌組織的發(fā)展演變過程，故在基因水平上找尋新的預(yù)后指標(biāo)對胃癌診斷具有指導(dǎo)意義。為此我們對抑癌基因XEDAR和LKB1在胃癌中的表達(dá)進(jìn)行了測定?，F(xiàn)報道如下。

2015-12-17