劉志威，王學群，李甜甜

惠州市博羅縣人民醫(yī)院內(nèi)二科，廣東 惠州 516100

潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道菌群變化的臨床意義

劉志威，王學群，李甜甜

惠州市博羅縣人民醫(yī)院內(nèi)二科，廣東 惠州 516100

目的 觀察潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)患者腸道大腸桿菌、雙歧桿菌和乳酸桿菌的變化，探討其與免疫異常的關系。方法 收集博羅縣人民醫(yī)院2012年3月-2015年7月診治的UC患者46例，緩解期20例、活動期26例。另取同期接受腸鏡檢查未見腸道病變的健康體檢者28名作為對照。大腸桿菌、雙歧桿菌和乳酸桿菌糞便標本培養(yǎng)計算含菌量，Th17和Treg細胞使用流式細胞儀檢測。結(jié)果 UC組大腸桿菌數(shù)量顯著高于對照組(P<0.05)，UC組雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量顯著低于對照組(P<0.05)。UC緩解期患者大腸桿菌數(shù)量顯著低于活動期患者(P<0.05)，UC緩解期患者雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量顯著高于活動期患者(P<0.05)。UC組Th17細胞顯著高于對照組(P<0.05)，UC組Treg細胞顯著低于對照組(P<0.05)。UC緩解期患者Th17細胞顯著低于活動期患者(P<0.05)，UC緩解期患者Treg細胞顯著高于活動期患者(P<0.05)。UC患者大腸桿菌數(shù)量與Th17細胞呈正相關(r=0.312，P<0.05)，而與Treg細胞呈負相關(r=-0.241，P<0.05)。雙歧桿菌數(shù)量與Th17細胞呈負相關(r=-0.267，P<0.05)， 而與Treg細胞呈正相關(r=0.236，P<0.05)。乳酸桿菌數(shù)量與Th17細胞呈負相關(r=-0.226，P<0.05)，而與Treg細胞呈正相關(r=0.215，P<0.05)。結(jié)論 UC患者大腸桿菌數(shù)量增加，而雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量減少，這種菌群紊亂破壞了機體Th17/Treg細胞的免疫平衡，參與了UC病變的發(fā)生、發(fā)展過程。

潰瘍性結(jié)腸炎；腸道菌群；Th17細胞；Treg細胞

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis, UC)是一種非特異性慢性腸道疾病，病變主要局限在結(jié)腸黏膜和黏膜下層，臨床表現(xiàn)為腹瀉、腹痛，甚至黏液膿血便，其發(fā)病機制目前仍不清楚，涉及到多種因素，其中腸道菌群紊亂曾被認為是UC的重要原因[1]，以改善患者腸道菌群紊亂為目標的治療也可能取得顯著的臨床療效[2-3]，本研究觀察了UC患者腸道大腸桿菌、雙歧桿菌、乳酸桿菌的變化，探討其與免疫異常的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集博羅縣人民醫(yī)院2012年3月-2015年7月診治的UC患者46例，UC的診斷參照《炎癥性腸病診斷及治療的共識意見(2012)》[4]。46例UC患者中男21例，女25例，年齡32～67歲，平均年齡(54.8±10.3)歲。排除標準：曾應用益生菌、糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑或免疫調(diào)節(jié)劑治療者，伴發(fā)其他免疫系統(tǒng)異常疾病者，伴發(fā)其他腸道急慢性炎癥者或惡性腫瘤者，哺乳妊娠期女性。另取同期接受腸鏡檢查未見腸道病變的健康體檢者28名作為對照，男12名，女16名，年齡29～65名，平均年齡(53.7±10.6)歲。UC組與對照組在性別、年齡方面相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),具有可比性。46例UC患者根據(jù)Mayo評分[5]分為緩解期20例和活動期26例。

1.2 菌群的檢測 采集所有受試者清晨新鮮糞便標本，交由檢驗科在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3 d，選取3塊生長均勻的平板計算菌落平均數(shù)，以lgCFU/g濕便的形式表示每克標本中的含菌量，細菌培養(yǎng)基購自青島海博生物技術有限公司。

1.3 輔助性T細胞(Th17)和調(diào)節(jié)性 T 細胞(Treg)的檢測 采集所有受試者清晨抗凝靜脈血5 ml，交由檢驗科按照熒光抗體試劑盒說明書使用美國BD 公司FACSCalibur流式細胞儀完成Th17和Treg細胞檢測。FITC-CD4、APC-CD17和PE-CD25熒光抗體購自美國BD公司。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 16.0軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，相關性分析采用Person相關分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 UC患者腸道菌群的變化 UC組大腸桿菌數(shù)量為(8.86±1.13) lgCFU/g，顯著高于對照組的(7.78±1.02) lgCFU/g(P<0.05)，UC組雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量分別為(8.42±0.94 ) lgCFU/g和(6.32±0.74) lgCFU/g，顯著低于對照組的(9.42±1.16) lgCFU/g和(7.28±0.82) lgCFU/g(P<0.05)。

2.2 UC患者活動性與腸道菌群的關系 UC緩解期患者大腸桿菌數(shù)量為(8.53±1.08) lgCFU/g，顯著低于UC活動期患者的(9.12±1.21) lgCFU/g(P<0.05)； UC緩解期患者雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量分別為(8.71±1.05)lgCFU/g和(6.62±0.71) lgCFU/g，顯著高于UC活動期患者的(8.18±0.83) lgCFU/g和(6.09±0.65) lgCFU/g(P<0.05)。

2.3 UC患者Th17和Treg細胞的變化 UC組Th17細胞為(5.26±1.25)%,顯著高于對照組的(3.52±0.64)%(P<0.05)，UC組Treg細胞為 (6.31±1.03)%,顯著低于對照組的(8.67±1.56)%(P<0.05)。

2.4 UC患者活動性與Th17和Treg細胞的關系 UC緩解期患者Th17細胞為(4.46±0.81)%,顯著低于活動期患者(5.88±1.35)%(P<0.05)，UC緩解期患者Treg細胞為(7.52±1.37)%,顯著高于活動期患者的(5.38±0.92)%(P<0.05)。

2.5 UC患者腸道菌群與Th17和Treg細胞的相關性分析 UC患者大腸桿菌數(shù)量與Th17細胞呈正相關(r=0.312，P<0.05)，而與Treg細胞呈負相關(r=-0.241，P<0.05)。雙歧桿菌數(shù)量與Th17細胞呈負相關(r=-0.267，P<0.05)，而與Treg細胞呈正相關(r=0.236，P<0.05)。乳酸桿菌數(shù)量與Th17細胞呈負相關(r=-0.226，P<0.05)，而與Treg細胞呈正相關(r=0.215，P<0.05)。

3 討論

腸道菌群失調(diào)可引起多種消化道疾病，有學者[6]建議應將腸道微生物群視為一個獨立器官，判斷疾病風險或給予治療時應把機體與體內(nèi)微生物環(huán)境間的相互影響考慮進來。人體內(nèi)的腸道菌群是一個復雜的微生態(tài)系統(tǒng)，如雙歧桿菌和乳酸桿菌能產(chǎn)生細菌素、有機酸等對抗條件致病菌對腸黏膜的侵襲，大腸桿菌是一個條件致病菌，腸道菌群平衡失調(diào)時，其侵襲力加強，損傷局部腸黏膜[7]。本研究觀察到UC患者大腸桿菌數(shù)量顯著高于健康對照者，而雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量顯著低于健康對照者，UC活動期患者大腸桿菌數(shù)量顯著高于UC緩解期患者，UC活動期患者雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量顯著高于UC緩解期患者，上述結(jié)果說明UC的發(fā)生、發(fā)展過程中存在保護菌群的減少和致病菌群的增加，可能正是這種腸道菌群的失調(diào)導致了腸道局部慢性炎癥反應的發(fā)生，最終引起了UC的局部腸損傷[8]。

Th17和Treg細胞是新發(fā)現(xiàn)的一類CD4+T細胞亞群，Th17細胞起到促進炎癥的作用，而Treg細胞則起著抑制炎癥反應的作用，二者在機體內(nèi)也維持著一種動態(tài)平衡[9]，UC本身就是一種非特異性炎癥疾病，體內(nèi)的高炎癥狀態(tài)是腸腔黏膜損傷的病理生理基礎，本研究觀察到UC患者Th17細胞顯著高于健康對照者，而Treg細胞顯著低于健康對照者，UC活動期患者Th17細胞顯著高于UC緩解期患者，UC活動期患者Treg細胞顯著高于UC緩解期患者，上述結(jié)果說明UC的發(fā)生、發(fā)展過程中存在Th17/Treg細胞的失衡，Ueno等[10]的研究也觀察到在腸道炎癥性疾病中這種失衡的存在。相關性分析顯示UC患者大腸桿菌數(shù)量與Th17細胞呈正相關而與Treg細胞呈負相關，雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量與Th17細胞呈負相關而與Treg細胞呈正相關，可能因為UC患者腸道菌群的紊亂擾亂了患者正常機體的免疫反應，從而進一步加速了病變的發(fā)生、發(fā)展。

綜上所述，本研究顯示UC患者大腸桿菌數(shù)量增加，而雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量減小，這種菌群紊亂破壞了機體Th17/Treg細胞的免疫平衡，導致了病變的發(fā)生、發(fā)展，本研究可為UC的菌群調(diào)節(jié)治療提供新的理論支持。

[1]Becker C, Neurath MF, Wirtz S. The intestinal microbiota in inflammatory bowel disease [J]. ILAR J, 2015, 56(2): 192-204.

[2]Zhou J, Zhu JP, Zhu XP. Action mechanisms and application of probiotics in intestinal diseases [J]. Chinese Journal of New Drugs, 2015, 24(13): 1484-1487. 周潔, 朱俊萍, 諸欣平. 益生菌對腸道疾病的作用機制及應用進展[J]. 中國新藥雜志, 2015, 24(13): 1484-1487.

[3]Huang HZ, Yi XH. Influence of bifid triple viable on bowel movement and its efficacy in irritable bowel syndrome patients [J]. World Clinical Drugs, 2015, 36(5): 327-330. 黃漢忠, 易星航. 雙歧三聯(lián)活菌制劑對腸易激綜合征患者腸運動功能影響及其療效[J]. 世界臨床藥物, 2015, 36(5): 327-330.

[4]Inflammatory Bowel Disease Study Group of Digestive Disease Branch of the Chinese Medical Association. The diagnosis and treatment of inflammatory bowel disease consensus [J]. Chin J Dig, 2012, 12(32): 796-813. 中華醫(yī)學會消化病學分會炎癥性腸病學組. 炎癥性腸病診斷及治療的共識意見[J]. 中華消化雜志, 2012, 12(32): 796-813.

[5]Bewtra M, Brensinger CM, Tomov VT, et al. An optimized patient-reported ulcerative colitis disease activity measure derived from the Mayo score and the simple clinical colitis activity index [J]. Inflamm Bowel Dis, 2014, 20(6): 1070-1078.

[6]Hua C, Cao HT. Changes of intestinal microflora in children with irritable bowel syndrome by SYBR green I real time fluo-rescent quantitative PCR method [J]. Med & Pharm J Chin PLA, 2014, 26(9): 93-96. 華川, 曹海濤. SYBR GreenⅠ實時熒光定量 PCR 法分析腸易激綜合征患兒腸道菌群的變化[J]. 解放軍醫(yī)藥雜志, 2014, 26(9): 93-96.

[7]Li NN, Hao WW, Wen HZ, et al. Intestinal flora and ulcerative colitis [J]. Journal of Liaoning University of TCM, 2013, 15(11): 101-103. 歷娜娜, 郝微微, 溫紅珠, 等. 腸道菌群與潰瘍性結(jié)腸炎[J]. 遼寧中醫(yī)藥大學學報, 2013, 15(11): 101-103.

[8]Liang J, Sha SM, Wu KC. Role of the intestinal microbiota and fecal transplantation in inflammatory bowel diseases [J]. J Dig Dis, 2014, 15(12): 641-646.

[9] Yao J, Wei C, Wang JY, et al. Effect of resveratrol on Treg/Th17 signaling and ulcerative colitis treatment in mice [J]. World J Gastroenterol, 2015, 21(21): 6572-6581.

[10]Ueno A, Jijon H, Chan R, et al. Increased prevalence of circulating novel IL-17 secreting Foxp3 expressing CD4+T cells and defective suppressive function of circulating Foxp3+regulatory cells support plasticity between Th17 and regulatory T cells in inflammatory bowel disease patients [J]. Inflamm Bowel Dis, 2013, 19(12): 2522-2534.

(責任編輯：王豪勛)

The clinical significance of intestinal flora changes in patients with ulcerative colitis

LIU Zhiwei, WANG Xuequn, LI Tiantian

Department of the Second Internal Medicine, Boluo People’s Hospital, Huizhou 516100, China

Objective To detect the changes of intestinal Escherichia coli, Bacillus and Lactobacillus in patients with ulcerative colitis (UC) and explore their relationship with immune abnormalities. Methods A total of 46 UC patients were enrolled in this study. Another 28 cases of healthy people were selected as control group. The numbers of Escherichia coli, Bacillus and Lactobacillus were calculated by stool specimens culture. The Th17 and Treg cells were detected by cytometry analysis. Results The number of Escherichia coli in UC group was significantly higher than that in control group (P<0.05). The numbers of Bacillus and Lactobacillus in UC group were significantly lower than those in control group (P<0.05). The number of Escherichia coli in UC remission stage was significantly lower than that in UC active stage (P<0.05). The numbers of Bacillus and Lactobacillus in UC remission stage were significantly higher than those in UC active stage (P<0.05). The percent of Th17 cells in UC group was significantly higher than that in control group (P<0.05). The percent of Treg cells in UC group was significantly lower than that in control group (P<0.05). The percent of Th17 cells in UC remission stage was significantly lower than that in UC active stage (P<0.05). The percent of Treg cells in UC remission stage was significantly higher than that in UC active stage (P<0.05). The number of Escherichia coli in UC patients was positively correlated with Th17 cells (r=0.312,P<0.05), but negatively correlated with Treg cells (r=-0.241,P<0.05). The number of Bacillus was negatively correlated with Th17 cells (r=-0.267,P<0.05), and positively correlated with Treg cells (r=0.236,P<0.05). The number of Lactobacillus was negatively correlated with Th17 cells (r=-0.226,P<0.05), but positively correlated with Treg cells (r=0.215,P<0.05). Conclusion The number of Escherichia coli is increased and Bacillus and Lactobacillus are decreased in UC patients, which destroye immune balance of Th17/Treg cells and involve in the occurrence and development of UC.

Ulcerative colitis; Intestinal flora; Th17 cells; Treg cells

劉志威，主治醫(yī)師，研究方向：消化系統(tǒng)疾病的治療。E-mail：360921387qq.com

10.3969/j.issn.1006-5709.2016.05.018

R574.62

A

1006-5709(2016)05-0554-03

2015-09-30