劉小河，馬艷紅，何麗清，傅延齡

(1.湖北省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，武漢 430015;2.北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，北京 100029)

梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯及其合方對(duì)反流性食管炎模型大鼠胃腸激素的影響

劉小河1，馬艷紅2，何麗清2，傅延齡2

(1.湖北省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，武漢 430015;2.北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，北京 100029)

目的:探討梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯及其合方對(duì)混合性反流性食管炎大鼠食管黏膜及胃腸激素的影響及作用機(jī)制。方法:采用食管十二指腸吻合術(shù)建立反流性食管炎模型，1周后假手術(shù)組、模型組給予生理鹽水灌胃，西藥組大鼠灌胃莫沙必利，各中藥組分別灌胃梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯及合方;術(shù)后5周處死大鼠計(jì)算食管系數(shù)并做組織病理學(xué)觀察;檢測(cè)血清中胃腸激素GAS、MIL、VIP含量。結(jié)果:三方均可顯著降低血清中GAS、MIL含量，提高血清中VIP含量，降低食管系數(shù)，改善食管大體及病理組織評(píng)分，其中合方效果最顯著。結(jié)論:梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯及合方能夠提高反流性食管炎大鼠GAS、MIL水平和降低VIP水平，增強(qiáng)食管下括約壓力，制止胃腸內(nèi)容物反流到食管，從而保護(hù)食管黏膜起到治療反流性食管炎的作用。

梔子甘草豉湯;大黃黃連瀉心湯;反流性食管炎;胃腸激素

反流性食管炎(reflux esophagitis，RE)是胃食管反流病的一種，是指胃十二指腸內(nèi)容物反流入食管，不僅引起燒心和反流等癥狀，還會(huì)引起咽喉、氣道等食管鄰近的組織損害。目前西藥治療本病常用的藥物主要有促胃腸動(dòng)力藥、H2受體拮抗劑、PPI和抗酸藥等，雖然有一定的療效，但副作用較大，經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)重且易復(fù)發(fā)。筆者采用清宣郁熱、暢利氣機(jī)治法，選用梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯及其合方。前期課題組觀察其對(duì)反流性食管炎模型大鼠氧化應(yīng)激的影響［1-2］，此實(shí)驗(yàn)觀察兩方及其合方對(duì)反流性食管炎模型大鼠胃腸激素的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康清潔級(jí)雄性3月齡SDIGS大鼠72只，體質(zhì)量(240±20)g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供(許可證號(hào)SCXK(京)2007-0001)。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品

梔子甘草豉湯是由梔子、甘草、淡豆豉組成，用量為成人每日用量梔子20 g、生甘草10 g、淡豆豉20 g。臨床用量按成人60 kg體質(zhì)量計(jì)算單位體質(zhì)量日服生藥量，大鼠用藥劑量為人用藥劑量的7倍(下同)。藥物加適量的水煎煮2次合并濾液，濃縮成含生藥0.583 g/ml的混懸液。大黃黃連瀉心湯是由大黃、黃連、黃芩組成，用量為成人每日用量制大黃8 g、黃連8 g、黃芩15 g。藥物加適量的水煎煮2次，合并濾液濃縮成0.362 g/ml的混懸液。梔子甘草豉湯合大黃黃連瀉心湯(簡(jiǎn)稱合方)由梔子、生甘草、淡豆豉、大黃、黃連、黃芩組成，用量為梔子、淡豆豉各10 g，生甘草5 g，制大黃、黃連各4 g、黃芩8 g。藥物加適量的水煎煮2次，合并濾液濃縮成0.478 g/ml的混懸液。西藥為枸櫞酸莫沙必利分散片，制成0.175 mg/ml的混懸液(批號(hào)071207，成都大西南制藥股份有限公司生產(chǎn))。

1.3 動(dòng)物分組

雄性大鼠72只，在同樣環(huán)境下給予基礎(chǔ)飼料常規(guī)飼養(yǎng)1周后，體質(zhì)量均衡隨機(jī)分成6組，每組12只，即假手術(shù)組、模型組、西藥對(duì)照組、梔子甘草豉湯組、大黃黃連瀉心湯組及其合方組(以下分別簡(jiǎn)稱假手術(shù)組、模型組、西藥組、梔豉組、瀉心組、合方組)。

1.4 動(dòng)物模型［3］

結(jié)合對(duì)雙載式多層穿梭車立體倉(cāng)庫(kù)聯(lián)合進(jìn)出庫(kù)流程的分析，設(shè)單次入庫(kù)兩個(gè)貨物分別為i和j，貨架的列方向?yàn)閤，層方向?yàn)閥，目標(biāo)貨位分別為(xi，yi)和(xj，yj)；出庫(kù)兩個(gè)貨物分別為m和n，所在貨位分別為(xm，ym)和(xn，yn)；I/O位置用o點(diǎn)表示。按照進(jìn)出庫(kù)貨物是否在同一層，單次聯(lián)合進(jìn)出庫(kù)分為以下4種情況進(jìn)行分類討論：

各組大鼠均于術(shù)前24 h禁食，術(shù)前禁水2～4 h，應(yīng)用1%戊巴比妥鈉腹腔注射(30～45 mg/kg體質(zhì)量)進(jìn)行麻醉。固定在手術(shù)臺(tái)上，嚴(yán)格按照無(wú)菌操作進(jìn)行模型制作。沿腹正中線開(kāi)腹，將食管下段分離出迷走神經(jīng)及血管，切斷食管;縫合賁門并荷包包埋入胃中，保留全胃，在十二指腸距幽門1 cm處側(cè)壁縱行切開(kāi)0.4 cm，將其與食管下段進(jìn)行端側(cè)吻合，用6-0無(wú)創(chuàng)傷縫線進(jìn)行全層間斷密集縫合。關(guān)腹前，用無(wú)菌紗布吸盡腹腔中的液體，注入2～3 ml含有慶大霉素的生理鹽水(1萬(wàn)/ml)。術(shù)后24 h禁食不禁水，術(shù)后1周內(nèi)大鼠每日腹腔注射青霉素(1.6萬(wàn)/100 g體質(zhì)量)。假手術(shù)組行假手術(shù)，開(kāi)腹后約10 min即關(guān)腹。

1.5 給藥方法

術(shù)后1周開(kāi)始給藥。假手術(shù)組、模型組每日給予生理鹽水1 ml/100 g體質(zhì)量灌胃，西藥組每日灌服莫沙必利1 ml/100 g體質(zhì)量(0.175 mg/ml);梔豉組、瀉心組、合方組每日按1 ml/100 g體質(zhì)量灌胃相應(yīng)的湯藥。每周禁食稱重1次，連續(xù)給藥4周，觀察大鼠的活動(dòng)表現(xiàn)、攝食量、進(jìn)水量及精神狀態(tài)。

1.6 標(biāo)本采集與檢測(cè)

末次給藥后禁食不禁水24 h，用10%水合氯醛按4 ml/kg體質(zhì)量腹腔注射麻醉。腹主動(dòng)脈取全血放入肝素鈉管中，3500 r/min離心20 min，取上清冷藏待測(cè)。將大鼠食管從咽部至吻合口整段取出縱行剖開(kāi)，精密電子天平稱重后肉眼觀察并評(píng)分。將食管縱切一分為二，一份放入4%中性多聚甲醛溶液中固定48 h，常規(guī)組織脫水、透明、浸蠟、包埋。石蠟切片用于HE染色和免疫組化染色。另一份稱重后用生理鹽水制備10%食管勻漿，4℃3500 r/min，離心15 min取上清待測(cè)。

1.7 指標(biāo)測(cè)定

1.7.2 食管系數(shù) 食管系數(shù)=食管濕重/體質(zhì)量。

1.7.3 食管黏膜肉眼及病理形態(tài)學(xué)觀察 將食管從咽部至吻合口整段取出，生理鹽水輕輕沖洗食管，濾干稱重后縱行剖開(kāi)觀察肉眼大體表現(xiàn)。石蠟切片、HE染色后進(jìn)行光鏡觀察。

1.7.4 血清檢測(cè) 血清中胃腸激素 GAS、MIL、VIP的檢測(cè)由北京華英生物工程研究所代測(cè)。運(yùn)用放免分析法(RIA)檢測(cè)大鼠血清中胃泌素(GAS)、胃動(dòng)素(MTL)、血管活性腸肽(VIP)的含量影響。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SAS8.2統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，正態(tài)分布及方差齊性檢驗(yàn)后用F檢驗(yàn)進(jìn)行多組均數(shù)的兩兩比較，方差不齊者用秩和檢驗(yàn)，P＜0.05，P＜0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

實(shí)驗(yàn)中死亡大鼠共5只，均在術(shù)后1周內(nèi)出現(xiàn)。其中模型組2只，西藥組、瀉心組、合方組大鼠各死亡1只。術(shù)后主要死亡原因?yàn)楣Ｗ?、腹腔撕裂等，死亡?dòng)物不進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。表1顯示，模型組、西藥組、梔豉組、瀉心組、合方組大鼠的體質(zhì)量增長(zhǎng)幅度明顯低于假手術(shù)組，梔豉組與合方組的平均體質(zhì)量增加明顯高于模型組。

表1 各組大鼠體質(zhì)量增加、食管系數(shù)和黏膜損傷評(píng)分(±s)

表1 各組大鼠體質(zhì)量增加、食管系數(shù)和黏膜損傷評(píng)分(±s)

注:與假手術(shù)組比較:△P＜0.05，△△P＜0.01;與模型組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與西藥組比較:▽P＜0.05，▽▽＜0.01

組 別 例數(shù) 體質(zhì)量增加(g)食管系數(shù) 黏膜損傷評(píng)分假手術(shù)組12 141.40±36.14 6.77±0.64 0.00±0.00模 型 組 10 73.56±30.73△△ 13.58±2.32△△▽▽ 3.50±0.97△△西 藥 組 11 81.00±41.52△△ 11.69±1.85△△﹡﹡ 2.73±1.01△△梔 豉 組 12 102.80±19.91△△﹡10.31±1.03△△﹡﹡▽ 2.42±0.99△△﹡瀉 心 組 11 81.00±25.63△△ 10.34±1.15△△﹡﹡▽ 2.27±0.90△△﹡﹡合 方 組 11 106.33±30.52△﹡ 10.01±0.67△△﹡﹡▽ 2.00±0.82△△﹡﹡▽

2.2 食管系數(shù)及黏膜損傷評(píng)分

與假手術(shù)組比較，各組大鼠食管系數(shù)均明顯增高。與模型組比較，各治療組大鼠的食管系數(shù)均有明顯降低，各中藥組效果明顯優(yōu)于西藥組。與假手術(shù)組比較，各組大鼠的黏膜損傷顯著。與模型組比較，梔豉組、瀉心組、合方組大鼠的黏膜損傷有不同程度的改善，合方組減輕黏膜損傷的效果明顯優(yōu)于西藥組。

2.3 食管大體形態(tài)觀察及病理組織學(xué)變化

圖1顯示，假手術(shù)組大鼠食管黏膜完整、光滑且呈白色。經(jīng)過(guò)造模手術(shù)后的大鼠食管黏膜粗糙，散在分布糜爛及潰瘍，出現(xiàn)不同程度的“樹(shù)皮樣”黏膜增生外觀，吻合口處最重逐漸向上累及，范圍可達(dá)食管的黏膜各段，食管壁明顯增厚，下段不規(guī)則擴(kuò)張，但以模型組最為明顯，其他各治療組食管損傷程度明顯減輕。

圖1

光鏡下形態(tài)學(xué)改變看，圖2觀察到假手術(shù)組食管黏膜除上皮細(xì)胞層內(nèi)間或存在少量炎細(xì)胞外，無(wú)其他明顯異常表現(xiàn)，其余各實(shí)驗(yàn)組均可見(jiàn)不同程度的幾種組織學(xué)改變:一是炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，主要為中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及少量嗜酸性粒細(xì)胞;二是鱗狀上皮過(guò)度增生，食管上皮層不同程度增厚，以基底層及棘層細(xì)胞增生為主，成纖維細(xì)胞增生;三是固有層乳頭延長(zhǎng)，向表面延伸達(dá)上皮層厚度的2/3，角化過(guò)度，淺層毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血;四是糜爛、潰瘍，食管上皮部分或全層缺損，底部覆以滲出物及肉芽組織。各組組織學(xué)改變由下向上逐漸減輕，各治療組病理學(xué)改變均有不同程度的減輕。

圖2

2.4 血清中胃腸激素GAS、MIL、VIP的測(cè)定

表4顯示，模型組大鼠與假手術(shù)組大鼠比較，GAS、MIL明顯降低(P＜0.01)，VIP明顯升高(P＜0.01)。與模型組比較，各治療組GAS、MIL均有上升趨勢(shì)。與西藥組比較，各中藥組GAS均有增加，且合方組顯著(P＜0.05);瀉心組和合方組MIL均增加，且合方組極顯著(P＜0.01)。與模型組比較，西藥組、梔豉組、瀉心組、合方組VIP均下降。與西藥組比較，梔豉組、瀉心組和合方組VIP值更小，且合方組明顯(P＜0.05)。

表4 胃腸激素GAS、MIL、VIP的影響比較(±s)

表4 胃腸激素GAS、MIL、VIP的影響比較(±s)

注:與假手術(shù)組比較:△P＜0.05，△△P＜0.01;與模型組比較:﹡P＜0.05，﹡﹡P＜0.01;與西藥組比較:▽P＜0.05，▽▽P＜0.01

GAS MIL VIP假手術(shù)組組 別 例數(shù)12 36.47±5.82 316.40±49.11 24.03±11.47模 型 組 10 26.10±6.27△△ 219.01±64.78△△▽▽ 45.52±17.40△△西 藥 組 11 29.79±10.09 296.88±63.11＊＊ 38.66±17.27△梔 豉 組 12 36.72±10.62＊＊ 285.07±48.78* 32.00±15.15*瀉 心 組 11 32.91±4.23 303.63±32.74＊＊ 31.91±14.21*合 方 組 11 39.06±9.70＊＊▽ 393.71±97.46△△＊＊▽▽22.90±10.17＊＊▽

3 討論

梔子甘草豉湯見(jiàn)于《傷寒論》第76條:“發(fā)汗吐下后，虛煩不得眠，若劇者，必反復(fù)顛倒，心中懊，梔子豉湯主之。若少氣者，梔子甘草豉湯主之?！睏l文中提到虛煩不得眠、心中懊，以及梔子豉湯類方主治病證可能見(jiàn)到的“胸中窒”“心中結(jié)痛”等癥狀，與RE的燒心、反酸、胸痛等臨床表現(xiàn)頗為相似，故后世有用于治療RE者。梔子質(zhì)稟輕浮，味苦性寒，能上入心胸而清熱除煩，常用于心熱、肝熱及胃熱諸癥，能迫熱下行而利小便，清除胃中積熱;生甘草性平、味甘，能益氣補(bǔ)中、緩急止痛、調(diào)和藥性;淡豆豉性涼、味甘辛，能解表除煩又能和降胃氣;甘草、淡豆豉與梔子苦寒藥同用，可護(hù)胃益氣和中，防其苦寒傷胃，三藥同用可清宣郁熱、益氣和中。

大黃黃連瀉心湯見(jiàn)于《傷寒論》第154條:“心下痞，按之濡，其脈關(guān)上浮者，大黃黃連瀉心湯主之。”第164條:“傷寒大下后，復(fù)發(fā)汗，心下痞，惡寒者，表未解也。不可攻痞，當(dāng)先解表，表解乃可攻痞。解表宜桂枝湯，攻痞宜大黃黃連瀉心湯?！睏l文中大黃黃連瀉心湯用于治療熱痞，臨床表現(xiàn)為胃脘部有堵悶痞塞感覺(jué)、吞咽不利、口干等。本實(shí)驗(yàn)所用大黃黃連瀉心湯由大黃、黃連、黃芩組成，三藥皆為苦寒之品，大黃瀉熱、和胃、開(kāi)結(jié)，有推陳致新之力;黃芩、黃連清心胃之火，三藥合用邪熱得除，氣機(jī)流暢。

在本研究中，術(shù)后各組大鼠的體質(zhì)量增加均明顯低于假手術(shù)組，可能與術(shù)中損傷較大或術(shù)后病變形成較重而影響營(yíng)養(yǎng)有關(guān)。梔豉組與合方組的平均體質(zhì)量增加明顯高于模型組。梔子甘草豉湯及合方均能清宣郁熱、益氣和胃，促進(jìn)正氣恢復(fù)，故大鼠體質(zhì)量增加效果明顯。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯及其合方均能減輕黏膜損傷程度，組織病理也較模型組有明顯改善，三方效果均優(yōu)于莫沙必利。反流性食管炎突出的病理特點(diǎn)即鱗狀上皮增生和炎細(xì)胞浸潤(rùn)，各治療組的食管系數(shù)較模型組均有顯著降低，提示莫沙必利、梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯以及合方均可不同程度地抑制食管黏膜增生以及減輕局部炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，其中合方效果最好，優(yōu)于莫沙必利。關(guān)于三方抑制上皮增生以及抗炎機(jī)制將在今后的研究中進(jìn)一步深入探討。

胃動(dòng)素(MIL)、胃泌素(GAS)以及血管活性腸肽(VIP)是調(diào)控胃腸運(yùn)動(dòng)的重要因素，可直接與相應(yīng)受體結(jié)合發(fā)揮效應(yīng)，也可通過(guò)迷走神經(jīng)介導(dǎo)，在中樞和外周水平上對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)進(jìn)行精細(xì)調(diào)節(jié)［4］。GAS是最強(qiáng)的促胃酸分泌的激素，可使壁細(xì)胞最大限度地分泌胃酸［5］。下食管括約肌作為RE發(fā)病中的一個(gè)關(guān)鍵因素，其受胃腸激素的影響也較大，MIL、GAS均可增加下食管括約肌壓力(LESP)，而VIP可降低下食管括約肌壓力［6］。本實(shí)驗(yàn)研究表明，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠GAS和MIL明顯下降，而VIP明顯上升。用藥治療后，與模型組比較各治療組GAS和MIL明顯上升，而VIP明顯下降。證實(shí)了反流性食管炎不僅與胃腸激素GAS、MIL和VIP有關(guān)，而且梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯及合方對(duì)其的治療可能是通過(guò)影響GAS、MIL和VIP實(shí)現(xiàn)的。進(jìn)一步推測(cè)，梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯及合方能提高反流性食管炎大鼠GAS、MIL水平和降低VIP水平，增強(qiáng)食管下括約壓力，制止胃腸內(nèi)容物反流到食管，從而保護(hù)食管黏膜，起到治療反流性食管炎的作用。

［1］馬艷紅，劉小河，何麗清，等.梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯及其合方對(duì)反流性食管炎模型大鼠氧化應(yīng)激影響［J］.山西中醫(yī)，2009，15(1):49-52.

［2］劉小河，馬艷紅，傅延齡.黃芩湯對(duì)反流性食管炎模型大鼠氧化應(yīng)激和胃腸激素的影響［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2011，22(7): 1778-1780.

［3］王雯，李兆申，許國(guó)銘，等.不同方式建立3種反流性食管炎模型［J］.解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2000，25(3):171-173.

［4］Grundy D，AI-Chaer ED，Aziz Q，et al.Fundamentals of neurogastroenterology:basicscience［J］.Gastroenterology，2006，130:1391-1411.

［5］Feng G，Xu X，Wang Q，et al.The protective effects of calcitonin gene-related peptide on gastric mucosa injury after cerebral ischemia reperfusion in rats［J］.Regul Pept，2010，160(1-3): 121-128

［6］魏良洲.胃食管反流?。跰］.北京:人民軍醫(yī)出版社，2004:9.

Effects of Zhizi Gancao Chi Decoction，Dahuang Huanglian Xiexin Decoction and Their Combined Decoction on the Gastrointestinal Hormone in the Rat Model of Anti Reflux Esophagitis

LIU Xiao-he1，MA Yan-hong2，HE Li-qing2，F(xiàn)U Yan-ling2
(1.Hubei Provincial Hospital of Integrated Chinese＆Western Medicine，Wuhan 430015，China; 2.Basic Medicine College in Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China)

Objective:To observe the effects of Zhizi Gancao Chi Decoction(ZGCD)，Dahuang Huanglian Xiexin Decoction(DHXD)and the Integrated Decoction(ID)on Reflux esophagitis and the mechanism of action of Gastrointestinal hormones in rat’s esophagus mucosa.Method:Using esophagoduodenostomy to estabish the model of reflux esophagitis，after 1 week，normal saline was given to sham operated group and model group by intragastric administration，Mosapride was given to western medicine control group，corresponding Chinese crude drug was given to each Chinese drugs group which was ZGCD，PHXD and ID.After 5 weeks of operation execute all the rats，calculate esophago coefficient，do histopathology observation and test gastrointestinal hormones GAS，MIL，VIP content of serum.Result:The three decoctions could significantly reduce serum GAS，MIL content，increased serum levels of VIP，and improved esophagus body and score of pathological tissue，ID is best.Conclusion:ZGCD，PHXD and ID can increase GAS and MIL level，and lower VIP level with reflux esophagitis in rats，and then enhance the lower esophageal sphincter pressure and stop the gastrointestinal contents into the esophagus，thus protecting the esophageal mucosa，play the important role to treat the reflux esophagitis.

Zhizi Gancao Chi Decoction;Dahuang Huanglian Xiexin Decoction;Reflux esophagitis;Gastrointestinal hormones

R285.5

B

1006-3250(2016)06-0768-03

2015-12-01

劉小河(1978-)，男，副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)博士，從事中醫(yī)藥防治心血管疾病的臨床與研究。