蔣 銳,姜海斌,劉柏炎,楊麗潔,金 娟
(1.常德職業(yè)技術(shù)學(xué)院內(nèi)科教研室,湖南常德 415000; 2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一中醫(yī)臨床學(xué)院,湖南長(zhǎng)沙 410208)
參七合劑對(duì)高脂血癥大鼠載脂蛋白AⅠ、B
及血液流變學(xué)指標(biāo)的影響*
蔣 銳1,姜海斌1,劉柏炎2,楊麗潔1,金 娟1
(1.常德職業(yè)技術(shù)學(xué)院內(nèi)科教研室,湖南常德 415000; 2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一中醫(yī)臨床學(xué)院,湖南長(zhǎng)沙 410208)
目的:觀察參七合劑對(duì)高脂血癥大鼠載脂蛋白AⅠ、B(apoAⅠ、apoB)及血液流變學(xué)指標(biāo)的影響,探討其降脂機(jī)制。方法:將120只SD大鼠雌雄分開(kāi),按隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組(20只)和造模組(100只),使用高脂飼料喂養(yǎng)造模。于第11天將造模組大鼠先按血脂水平分層,再隨機(jī)分為模型組、辛伐他汀組(給予辛伐他汀0.002 g·kg-1)參七合劑低、中、高劑量組(給予參七合劑1,2,4 g·kg-1),每組20只。繼續(xù)喂養(yǎng)20 d后,按照試劑盒要求檢測(cè)apoAⅠ、apoB、總膽固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoproteins,LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoproteins,HDL-C)。使用DWN-90型血液流變分析儀檢測(cè)血液流變學(xué)指標(biāo)。HE染色觀察肝臟組織病理形態(tài)學(xué)改變情況。結(jié)果:與辛伐他汀比較,參七合劑低、中劑量降低apoB、LDL-C及TC,升高apoAⅠ及HDL-C,減輕肝細(xì)胞脂肪變性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:參七合劑通過(guò)促使apoAⅠ合成增加、apoB合成減少消除增加,降低血脂水平。
參七合劑;高脂血癥;載脂蛋白AⅠ、B;血液流變學(xué);肝細(xì)胞脂肪變性
高脂血癥通常是指血漿中膽固醇和(或)甘油三酯升高所致的疾病,與冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化、脂肪肝等疾病關(guān)系密切,嚴(yán)重威脅著人類(lèi)健康。目前,他汀類(lèi)藥物是治療高脂血癥的首選西藥,但長(zhǎng)期用藥所產(chǎn)生的不良反應(yīng)如肝腎功能損害、橫紋肌溶解等依然是治療中的難題[1]。中藥降脂研究已成為當(dāng)前的熱點(diǎn),具有現(xiàn)實(shí)的臨床意義。前期實(shí)驗(yàn)研究顯示,參七合劑對(duì)高脂血癥大鼠有較好的降脂作用[2]。本研究旨在通過(guò)實(shí)驗(yàn)觀察參七合劑對(duì)高脂血癥大鼠載脂蛋白AⅠ、B(apoAⅠ、apoB)及血液流變學(xué)指標(biāo)的影響,進(jìn)一步探討參七合劑的降脂機(jī)制。
1.1 動(dòng)物
SD大鼠SPF級(jí)120只,雌雄各半,體質(zhì)量(236 ±14)g,購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司(動(dòng)物許可證號(hào)SCXK(湘)2009-0004)。湖南中醫(yī)藥大學(xué)SPF實(shí)驗(yàn)室,溫度20~22℃,相對(duì)濕度50%~60%。
1.2 高脂飼料[2]
按蛋黃粉10%(安徽亳州市眾意蛋業(yè)有限責(zé)任公司,批號(hào)20130426)、豬油5%、膽固醇5%(天津博迪化工股份有限公司,批號(hào) 20120814)、膽鹽0.5%(上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司,批號(hào)20120906)、甲硫氧嘧啶0.2%(天津博迪化工有限公司,批號(hào)201211093)、基礎(chǔ)飼料79.3%組成。
1.3 藥物
參七合劑由西洋參、三七、熟何首烏組成,3種藥物的飲片均購(gòu)自長(zhǎng)沙九芝堂藥材公司。飲片粉碎過(guò)200目篩,鈷60消毒。辛伐他汀10 mg/片,哈藥集團(tuán)三精明水藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(批準(zhǔn)文號(hào)國(guó)藥準(zhǔn)字H20010454)。
1.4 試劑
總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、apoA、apoB試劑盒均購(gòu)置于北京北化康泰臨床試劑有限公司(生產(chǎn)批號(hào)依次為20130308、20130412、20130603、20130210、20130424、20130207)。
1.5 儀器
日立750型自動(dòng)生化分析儀(日本日立),DWN-90型血液流變分析儀(北京多米諾科技有限公司),OlympusAH-2顯微鏡(日本奧林巴斯)。
2.1 造模及分組
120只SD大鼠普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后先將雌雄分開(kāi),然后分別將雌雄SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組20只,造模組100只,2組中雌雄各半。對(duì)照組給予普通飼料,造模組給予高脂飼料,自然攝食,連續(xù)喂養(yǎng)10 d。第11天120只SD大鼠腹腔注射烏拉坦1.5 g·kg-1麻醉,尾靜脈采血檢測(cè)TC、TG、LDL-C、HDL-C。將造模組大鼠雌雄分開(kāi),按照血脂4項(xiàng)水平分別分層,然后隨機(jī)分成模型組、辛伐他汀組、參七合劑低、中、高劑量組各20只,雌雄各半。對(duì)照組繼續(xù)給予普通飼料,模型組、藥物干預(yù)各組均給予高脂飼料,繼續(xù)喂養(yǎng)20 d。
2.2 給藥
給藥劑量換算方法[4]:,人、鼠的體形系數(shù)分別為R人=0.1、 R鼠=0.09。根據(jù)臨床藥理試驗(yàn)研究,以臨床等效劑量的1、2、4倍量作為SD大鼠的低、中、高劑量,則參七合劑低、中、高劑量組每只SD大鼠的給藥量分別為0.2 g、0.4 g、0.8 g。辛伐他汀(10 mg/片)溶于蒸餾水,配置成0.2 mg·mL-1的溶液。參七合劑溶于蒸餾水,配置成0.1 g·mL-1、0.2 g·mL-1、0.4 g ·mL-1的溶液。藥物干預(yù)各組分別給予辛伐他汀或參七合劑溶液2 mL/只灌胃,對(duì)照組和模型組均給予蒸餾水2 mL/只灌胃,給藥在晚8時(shí)進(jìn)行。
2.3 指標(biāo)檢測(cè)
第31天,SD大鼠腹腔注射烏拉坦1.5 g·kg-1麻醉,心臟采血。自動(dòng)生化分析儀檢測(cè) TC、TG、LDL-C、HDL-C、apoAⅠ、apoB。以部分抗凝血做全血黏度測(cè)定(測(cè)定溫度37℃,設(shè)低切為10 s-1、高切為200 s-12個(gè)切變率)。用微量毛細(xì)管吸取全血,用毛細(xì)管式離心機(jī)12000 r/min離心5 min測(cè)定紅細(xì)胞壓積,部分全血3000 r/min離心15 min制備血漿,測(cè)定血漿黏度[3]。10%福爾馬林固定肝臟。標(biāo)本用乙醇逐級(jí)脫水,石蠟包埋,連續(xù)切片,切片厚5 μm,HE染色,光鏡下觀察肝組織脂肪變性情況并采集圖片。
2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較采用t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3.1 高脂血癥大鼠模型建立
表1顯示,各組內(nèi)雌雄之間TC、TG、LDL-C、HDL-C比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與對(duì)照組比較,造模組 TC、TG、LDL-C顯著升高(P<0.01),HDL-C無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),符合高脂血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)[4],表明造模成功。
表1 喂食10 d后高脂飼料對(duì)SD大鼠血脂4項(xiàng)的影響(±s)
表1 喂食10 d后高脂飼料對(duì)SD大鼠血脂4項(xiàng)的影響(±s)
注:與對(duì)照組比較:*P<0.01。
組 別 鼠數(shù) TC/mmol·L-1 TG/mmol·L-1 LDL-C/mmol·L-1 HDL-C/mmol·L-1對(duì)照組1.51±0.27 20 2.04±0.28 0.40±0.14 1.85±0.41 1.47±0.32模型組 100 10.17±3.36* 1.03±0.11* 8.58±2.43*
3.2 參七合劑對(duì)高脂血癥大鼠血脂4項(xiàng)含量的影響
表2顯示,各組內(nèi)雌雄之間 TC、TG、LDL-C、HDL-C比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與模型組比較,參七合劑各組、辛伐他汀組TC、TG、LDL-C降低(P<0.01,P<0.05),HDL-C升高(P<0.01),表明參七合劑、辛伐他汀均能明顯降低高脂血癥大鼠TC、TG、LDL-C的含量,且能升高其HDL-C的含量。參七合劑低、中劑量組與辛伐他汀組比較,TC、LDL-C降低,HDL-C升高顯著(P<0.01),TG差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),參七合劑高劑量組與辛伐他汀組TC、TG、LDL-C、HDL-C比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),表明參七合劑低、中劑量對(duì)高脂血癥大鼠TC、LDL-C、HDL-C的影響優(yōu)于辛伐他汀。
3.3 參七合劑對(duì)高脂血癥大鼠apoAⅠ、apoB含量的影響
表3顯示,各組內(nèi)雌雄之間apoB、apoAⅠ含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。參七合劑各組、辛伐他汀組與模型組比較,apoB含量降低(P<0.01),apoAⅠ含量升高(P<0.01),表明參七合劑、辛伐他汀均能明顯降低高脂血癥大鼠apoB的含量,并能升高其apoAⅠ含量。與辛伐他汀組比較,參七合劑低、中劑量組apoB降低,apoAⅠ升高顯著(P<0.01),高劑量組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),表明參七合劑低、中劑量對(duì)高脂血癥大鼠 apoAⅠ、apoB的影響優(yōu)于辛伐他汀。
表2 參七合劑對(duì)高脂血癥大鼠血脂4項(xiàng)的影響(±s)
表2 參七合劑對(duì)高脂血癥大鼠血脂4項(xiàng)的影響(±s)
注:與對(duì)照組比較:*P<0.01;與模型組比較:▲P<0.05,▲▲P<0.01;與辛伐他汀組比較:#P<0.01
組別 鼠數(shù) TC/mmol·L-1 TG/mmol·L-1 LDL-C/mmol·L-1 HDL-C/mmol·L-1對(duì) 照 組20 2.23±0.37 0.44±0.12 1.77±0.25 1.52±0.26模 型 組 20 23.71±6.82 1.62±0.48 19.40±4.91 1.66±0.29辛 伐 他 汀 組 20 16.52±4.40*▲▲ 1.38±0.15*▲ 14.79±3.18*▲▲ 2.88±0.26*▲▲參七合劑(低)組 20 11.74±3.39*▲▲# 1.41±0.21*▲ 10.03±3.51*▲▲# 4.77±1.05*▲▲#參七合劑(中)組 20 12.65±5.33*▲▲# 1.40±0.17*▲ 11.04±2.81*▲▲# 3.91±0.43*▲▲#參七合劑(高)組 20 17.11±4.24*▲▲ 1.39±0.38*▲ 15.73±4.06*▲▲ 2.61±0.32*▲▲
表3 參七合劑對(duì)高脂血癥大鼠apoAⅠ、apoB的影響(±s)
表3 參七合劑對(duì)高脂血癥大鼠apoAⅠ、apoB的影響(±s)
注:與對(duì)照組比較:*P<0.01;與模型組比較:▲P<0.01;與辛伐他汀組比較:★P<0.01
組別 20 apoAⅠ/mg·L-1 apoB/mg·L-1對(duì) 照 組20 111.3±14.6 244.7±38.2模 型 組 20 57.1±18.2 862.5±48.4辛 伐 他 汀 組 20 76.5±15.7*▲ 447.2±54.6*▲參七合劑(低)組 20 94.3±13.9*▲★ 319.4±31.8*▲★參七合劑(中)組 20 91.3±11.3*▲★ 331.4±40.3*▲★參七合劑(高)組 20 74.8±14.9*▲ 451.0±49.4*▲
3.4 參七合劑對(duì)高脂血癥大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響
表4顯示,與對(duì)照組比較,模型組大鼠全血黏度及血漿黏度升高(P<0.01),紅細(xì)胞壓積無(wú)明顯變化(P>0.05)。與模型組比較,辛伐他汀組、參七合劑低、中、高劑量組全血黏度及血漿黏度均降低(P<0.01),紅細(xì)胞壓積無(wú)明顯變化(P>0.05)。與辛伐他汀組比較,參七合劑低、中劑量組的各血液流變學(xué)指標(biāo)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),高劑量組全血黏度及血漿黏度均低于辛伐他汀組(P<0.01)。
表4 參七合劑對(duì)高脂血癥大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響(±s)
表4 參七合劑對(duì)高脂血癥大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響(±s)
注:與對(duì)照組比較:*P<0.01;與模型組比較:▲P<0.01;與辛伐他汀組比較:★P<0.01
組別 鼠數(shù) 全血黏度/mPa·s /%對(duì) 照 組 20 4.43±0.51 10.58±2.10 1.15±0.30 43.24±5.13 200 s-1 10 s-1 血漿黏度/mPa·s 紅細(xì)胞壓積42.67±4.41模 型 組 20 8.59±1.63* 15.39±3.54* 2.87±0.37* 42.49±4.81辛 伐 他 汀 組 20 6.42±0.84▲ 13.75±2.66▲ 1.81±0.24▲ 42.86±5.44參七合劑(低)組 20 6.51±0.49▲ 12.60±2.58▲ 1.69±0.11▲ 43.17±4.74參七合劑(中)組 20 6.37±0.50▲ 12.88±2.41▲ 1.74±0.16▲ 42.22±3.80參七合劑(高)組 20 5.42±0.72▲★ 11.66±3.68▲★ 1.31±0.21▲★
3.5 參七合劑對(duì)高脂血癥大鼠肝組織病理形態(tài)學(xué)的影響
表5圖1顯示,對(duì)照組大鼠肝細(xì)胞索排列整齊,肝細(xì)胞無(wú)濁腫、脂肪變性、壞死及明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn),肝組織無(wú)任何病變。模型組大鼠肝細(xì)胞明顯腫脹,胞漿內(nèi)出現(xiàn)大小不等、數(shù)量不一的脂滴空泡,將細(xì)胞核擠向一邊,脂變細(xì)胞體積增大,肝竇受壓變窄,細(xì)胞索排列紊亂。辛伐他汀組、參七合劑低、中、高劑量組所有大鼠的肝細(xì)胞都存在不同程度的脂肪樣變性。按照非酒精性脂肪肝診斷標(biāo)準(zhǔn)(草案)[5]:“0級(jí):肝細(xì)胞無(wú)脂變、無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn);Ⅰ級(jí):肝細(xì)胞脂變數(shù)<1/3;Ⅱ級(jí):肝細(xì)胞脂變數(shù)1/3~1/2;Ⅲ級(jí):肝細(xì)胞脂變數(shù)1/2~2/3;Ⅳ級(jí):肝細(xì)胞脂變數(shù)>2/3,模型組SD大鼠肝臟脂肪樣變性以Ⅲ、Ⅳ級(jí)為主,辛伐他汀組以Ⅱ、Ⅲ級(jí)為主,參七合劑低、中劑量組以Ⅰ、Ⅱ級(jí)為主,高劑量組以Ⅱ、Ⅲ級(jí)為主。
血脂異常對(duì)健康的損害主要在心血管系統(tǒng),TG、LDL-C升高是主要致病危險(xiǎn)因素。apoAⅠ和apoB分別是高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的載脂蛋白,反映血液中HDL和LDL的水平,并與之呈正相關(guān)[6]。apoAⅠ在膽固醇的逆轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中發(fā)揮重要作用,HDL可將膽固醇送到肝臟分解,抑制細(xì)胞攝入LDL,HDL水平增高有利于外周組織清除膽固醇[7]。apoAⅠ和HDL-C下降是導(dǎo)致高脂血癥的危險(xiǎn)因子[8]。apoB能介導(dǎo)LDL-C與相應(yīng)受體結(jié)合,促進(jìn)肝臟和外周組織攝取膽固醇,其升高是導(dǎo)致冠心病最重要的危險(xiǎn)因素。血漿黏度的高低主要與所含的各種蛋白質(zhì)、糖類(lèi)、脂類(lèi)等高分子物質(zhì)含量有關(guān),其中蛋白質(zhì)對(duì)血漿黏度影響最大[9],高脂血癥可引起全血黏度與血漿黏度值的升高[10]。
參七合劑源于湖南省名老中醫(yī)劉新祥教授的經(jīng)驗(yàn)方,具有益氣養(yǎng)血、活血化瘀的功效。西洋參所含西洋參莖葉皂苷、人參皂苷能糾正高脂血癥脂蛋白-膽固醇代謝紊亂,對(duì)胰脂肪酶活性均有很強(qiáng)的抑制作用[11];何首烏能增加低密度脂蛋白受體(LDLR)的表達(dá),提高機(jī)體運(yùn)轉(zhuǎn)和清除膽固醇的能力,降低血脂水平[11];三七在消化道內(nèi)同脂類(lèi)結(jié)合形成不易吸收的物質(zhì),防止脂質(zhì)在血管內(nèi)沉積,能降低血小板表面活性,抑制血小板黏附和聚集,降低全血黏度和血漿黏度[11]806-861;何首烏、三七提取物能夠降低膽固醇和甘油三酯[12]。前期研究[2]表明,自制高脂飼料能建立穩(wěn)定的高脂血癥大鼠模型,參七合劑對(duì)高脂血癥大鼠有較好的降脂作用。
表5 參七合劑對(duì)高脂血癥大鼠肝細(xì)胞脂肪樣變性的影響
圖1 參七合劑對(duì)高脂血癥大鼠肝組織病理形態(tài)學(xué)的影響(HE染色 ×200)
本研究結(jié)果表明,參七合劑和辛伐他汀均能降低apoB、TC、TG、LDL-C,升高apoAⅠ、HDL-C,減輕大鼠肝細(xì)胞脂肪變性,同時(shí)能改變?nèi)咔叙ざ群偷颓叙ざ?、血漿黏度,降低血液黏度。與辛伐他汀比較,參七合劑低、中劑量降低apoB、LDL-C和TC,升高apoAⅠ和HDL-C,減輕肝細(xì)胞脂肪變性有顯著差異,而高劑量?jī)H在降低全血黏度及血漿黏度上有顯著差異;對(duì)apoAⅠ、apoB、TC、LDL-C、HDL-C及肝細(xì)胞脂肪變性的影響,參七合劑低、中劑量與高劑量有顯著差異。上述結(jié)果表明,參七合劑對(duì)血脂水平、apoAⅠ及apoB含量、血液流變學(xué)指標(biāo)和肝細(xì)胞脂肪變性的影響,與其劑量存在著一定的量效關(guān)系。至于參七合劑高劑量組的降脂效果反而不如低、中劑量組以及參七合劑對(duì)血脂水平、apoAⅠ、apoB等的影響是否同樣存在量效關(guān)系,有待下一步探討。與前期研究[2]比較,動(dòng)物給藥時(shí)間改變后,藥物的降脂效應(yīng)出現(xiàn)了明顯的差異,說(shuō)明降脂藥的使用效果與服藥時(shí)間有密切關(guān)系。HDL-C的增加能消除體內(nèi)過(guò)多的LDL含量,其表面的apoAⅠ能激活卵磷脂-膽固醇酰轉(zhuǎn)移酶(LCAT),促使催化膽固醇轉(zhuǎn)變?yōu)槟懝檀贾^而轉(zhuǎn)化為膽汁酸,或直接從膽汁中排出體外[13]。apoB是LDL的主要apo,而LDL的主要功能是將肝臟的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)到全身,apoB的增高使LDL在血液中的滯留時(shí)間延長(zhǎng)。apoB、LDL-C的含量下降,可有效降低全血黏度。因此,apoAⅠ、HDL的升高和apoB、LDL的降低能有效降低血液TC、TG的含量及全血黏度,阻止肝細(xì)胞脂肪變性。
綜上所述,參七合劑能降低apoB、LDL-C,升高apoAⅠ、HDL-C,從而降低高脂血癥模型大鼠的血脂水平及血液黏度,減輕肝細(xì)胞脂肪變性,其主要機(jī)制可能是使含apoAⅠ的脂蛋白合成增加,使含apoB的脂蛋白合成減少、清除增加。
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Effect of Shen Qi Mixture on Apolipoprotein A I,B and Hemorheology in Hyperlipidemia Rats
JIANG Rui1,JIANG Hai-bin1△,LIU Bo-yan2,YANG Li-Jie1,JIN Juan1
(1.Deparment of Medical Staff Room,Changde Vocational Technical College,Hunan Changde,415000,China; 2.The First Chinese Medicine Clinical College,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,410208,China)
Objective:To observe the effect of Shenqi Mixture on apolipoprotein(apo)AⅠ,B and hemorheology indexes in hyperlipidemia rats,investigate lipid-lowering mechanism of Shenqi Mixture.Methods:120 SD rats were randomly divided into control group(20)and model group(100).Establed stale hyperlipidemia SD rats models by feeding on high-fat diet.Model rats were stretified on lipid level and randomly divided into model group,Shenqi Mixture high,medium and low group,Simvastatin group.Every group had 20 rats.Tested apo AⅠ,apo B,total cholesterol(TC),triglyceride (TG),low-density lipoproteins(LDL-C),high-density lipoproteins(HDL-C),hemorheology indexes and observed pathological change of liver tissue on the 31thday.Results:The results of apo AⅠ,apo B,HDL-C,LDL-C,TC and the hepatocyte steatosis of Shenqi Mixture medium and low group have significant differences compared with Simvastatin group.Conclusion:Promoting increased synthesis of apo AⅠand decreased synthesis increased elimination of apo B may be one of the mechanisms of decreasing blood lipid level by Shenqi Mixture.
Shenqi mixture;Hyperlipidemia;Apo AⅠ,apo B;Hemorheology;Hepatocyte steatosis
R285.5
B
1006-3250(2016)06-0781-04
2015-11-02
湖南省教育廳科技計(jì)劃項(xiàng)目(12C0969);常德市科技局科技計(jì)劃項(xiàng)目(2010BS02)
蔣 銳,女,副教授,醫(yī)學(xué)碩士,從事高脂血癥及婦科雜病的防治研究。