柯 峰，左可可，顧 寧

(南京中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院，南京 210001)

“冠心V號”制劑對急性心肌梗死模型大鼠心室重構及炎癥因子的影響*

柯 峰，左可可，顧 寧△

(南京中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院，南京 210001)

目的:從AMI模型大鼠炎癥因子表達的角度，探討“冠心V號”制劑干預AMI后VR的機制及其不同劑型的作用比較。方法:SD大鼠80只選取7只作為空白對照組，其余均制成AMI模型。造模成功后按隨機數(shù)字表法分為9組每組各7只。藥物干預組給予其組別劑量濃度藥物，非藥物干預組給予生理鹽水，28 d后檢測各組大鼠超聲心動圖指標及血清IL-6、TNF-a的含量。結果:與模型組比較，各藥物干預組大鼠EF、FS顯著增加，LVMI顯著減小，血清IL-6、TNF-a含量顯著下降;與合劑中劑量組比較，顆粒劑大、中劑量組大鼠EF、FS明顯升高，血清IL-6、TNF-a含量明顯下降;與合劑小劑量組比較，顆粒劑大、中劑量組大鼠EF、FS顯著增加，LVMI顯著減小，血清IL-6、TNF-a含量明顯下降。結論:“冠心V號”制劑能改善AMI模型大鼠心臟結構及心功能，并減少血清炎癥因子的釋放，這可能是其干預AMI后VR的機制之一，其顆粒劑比合劑在此方面有更為突出的優(yōu)勢。

冠心V號;急性心肌梗死;心室重構;白介素細胞-6;腫瘤壞死因子-a

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)后心室重構(ventricular remodeling，VR)是心肌梗死后心肌組織結構、心室大小、形態(tài)、功能發(fā)生變化的病理生理過程，是心肌梗死后心功能進行性惡化的主要病理生理機制［1］，其主要涉及炎癥細胞因子過度表達、神經(jīng)內(nèi)分泌調節(jié)及氧化應激的過度激活等?！肮谛腣號”合劑是南京中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院院內(nèi)制劑(批準文號蘇藥制字Z04000781)，已在臨床使用多年。其前期實驗及臨床研究均已證實［2-6］，“冠心V號”合劑能夠明顯改善心肌梗死后心室重構，其作用可能是通過改善血流動力學、影響腎素-血管緊張素-醛固酮(RASS)系統(tǒng)及血管緊張素Ⅱ受體1/2(AT1/AT2)的調節(jié)等方面實現(xiàn)的，但其多途徑的作用機制尚有待于進一步闡明。同時“冠心V號”合劑原工藝為水提取，雖在后來的有關藥劑學研究課題中進行了改進，對丹參、五味子中有些水不溶性或水溶性很小成分(如丹參酮ⅡA、五味子素等)通過乙醇提取，但最終制劑形式還是合劑，對上述成分的溶解未能提高。因此，本研究基于AMI模型大鼠炎癥因子的表達，進一步探討“冠心V號”制劑干預AMI后VR機制及其不同劑型(合劑與顆粒劑)的作用比較，為醫(yī)院自制制劑“冠心V號”合劑的臨床應用及劑型改革(研制顆粒劑)提供一定的客觀依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物

健康雄性SD大鼠80只，體質量180～200 g，購自南京中醫(yī)藥大學實驗動物中心(許可證號SUXK (浙)20080033)。

1.2 主要儀器及試劑

心電圖機 (SHANGHAIKOHDEN Medical Electronical Instrument Corporation)、小動物呼吸機(上海奧爾科特生物科技有限公司，ALC-V8型)、離心機(KUBOTA Corporation，KUBOTA-5420型)、彩超儀(VisualSonics Inc，Vevo 2100型)、酶標儀(BIORAD Corporation，680型)、電冰箱(海爾雪王子，BD-166型)、ELISA試劑盒(北京四正柏生物科技有限公司，ELISA Kit 96T)。

1.3 實驗主要藥物

“冠心V號”合劑由南京中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院藥劑科提供(批號蘇藥制字Z04000796)，“冠心V號”顆粒劑由南京中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院藥劑科依據(jù)相關工藝制成提供，合劑與顆粒劑大、中、小劑量濃度分別為2.0 mg/ml、1.0 mg/ml、0.5 mg/ml，血脂康膠囊300mg粒(北京北大維信生物科技有限公司，批號Z10950029)。

1.4 動物造模

隨機選取7只大鼠作為空白對照組，其余大鼠依據(jù)文獻方法［7］改良后制作 AMI大鼠模型。用10%水合氯醛溶液(4 ml/kg)將大鼠腹腔注射麻醉，氣管插管接呼吸機及心電圖機，手術部位備皮、消毒，經(jīng)左側第4肋間剪開皮膚，于3～4肋間鈍性分離肌肉組織，開胸快速擠出心臟，于前降支下約2～3 mm處結扎左冠狀動脈前降支，觀察左室前壁部分心肌變白，局部收縮減弱，心電圖描記見II導聯(lián)ST段較術前抬高0.2 mV以上為造模成功。假手術組除不結扎外，其余操作同上。術后每日肌肉注射青霉素4萬U單位，連用3 d預防感染。

1.5 分組及給藥

將造模成功的63只SD大鼠按隨機數(shù)字表法分為模型組、假手術組、“冠心V號”合劑大劑量組、“冠心V號”合劑中劑量組、“冠心V號”合劑小劑量組、“冠心V號”顆粒劑大劑量組、“冠心V號”顆粒劑中劑量組、“冠心V號”顆粒劑小劑量組、陽性藥物對照組(血脂康膠囊)、空白對照組10組各7只。各組大鼠于術后第3天開始灌胃，“冠心V號”制劑各組分別給予各組別劑量濃度藥物(1 ml/100 g)，每日1次，連續(xù)28 d，其中模型組、假手術組、空白對照組均給予生理鹽水灌胃(1 ml/100 g)。

1.6 觀察指標

1.6.1 大鼠超聲心動圖檢測 各組大鼠干預28 d時進行超聲心動圖檢查，檢測左心室射血分數(shù)(EF)、左室短軸縮短率(FS)及左室質量指數(shù)(LVMI)。

1.6.2 大鼠血清IL-6與TNF-а測定 超聲心動圖檢測結束后，于大鼠頸動脈處取血3～5 ml，靜置2 h后離心3000 r/min、10 min取上清液，按照ELISA試劑盒說明書操作步驟檢測各組大鼠血清中炎癥因子的含量，如白細胞介素-6(interleukin-6，IL-6)和腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-a，TNF-a)。

1.7 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示，符合正態(tài)分布及方差齊性則組間比較采用單因素方差分析，否則采用非參數(shù)檢驗。

2 結果

實驗過程中大鼠先后死亡共計10只(包括因灌胃死亡4只，其余6只均因AMI后相關并發(fā)癥)，其中模型組、血脂康組、合劑小劑量組各2只，假手術組、合劑大劑量組、合劑中劑量組、顆粒劑大劑量組各1只。

2.1 各組大鼠EF、FS及LVMI的比較

圖1表1顯示，空白對照組與假手術組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);模型組及各藥物干預組與空白對照組比較，大鼠EF、FS明顯下降，LVMI明顯增大，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，提示模型組及各藥物干預組大鼠發(fā)生了一定程度的左室重構;各藥物干預組與模型組之間比較，大鼠EF、FS均有不同程度改善，LVMI均有不同程度減小(P＜0.05);與合劑大劑量組比較，顆粒劑大、中、小劑量組大鼠EF、FS無明顯升高，LVMI無明顯下降，組間比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);與合劑中劑量組比較，顆粒劑大、中劑量組大鼠EF、FS明顯升高(P＜0.05)，但LVMI無明顯下降(P＞0.05);與合劑小劑量組比較，顆粒劑大、中劑量組大鼠EF、FS、LVMI比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

2.2 各組大鼠血清IL-6、TNF-a的比較

表2顯示，空白組與假手術組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);模型組、各藥物干預組與空白組比較，大鼠血清 IL-6、TNF-a含量顯著升高(P＜0.05);各藥物干預組與模型組比較，大鼠血清IL-6、TNF-a含量顯著下降(P＜0.05);合劑大、中劑量組及顆粒劑大、中、小劑量組與血脂康組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);顆粒劑大、中、小劑量組大鼠血清IL-6、TNF-a含量均低于合劑大劑量組，其中顆粒劑大、中劑量組與合劑大劑量組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);顆粒劑大、中、小劑量組大鼠血清IL-6、TNF-a含量均低于合劑中劑量組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);顆粒劑大、中、小劑量組大鼠血清IL-6、TNF-a含量均低于合劑小劑量組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

圖1 各組大鼠超聲心動圖

表1 “冠心V號”制劑對模型大鼠EF、FS、LVMI的影響(±s)

表1 “冠心V號”制劑對模型大鼠EF、FS、LVMI的影響(±s)

注:與空白組比較:aP＜0.05;與模型組比較:bP＜0.05;與合劑中劑量組比較:cP＜0.05;與合劑小劑量組比較:dP＜0.05;與血脂康組比較:eP＜0.05

組別 鼠數(shù) EF(%) FS(%) LVMI(g/m2)空 白 組774.196±0.771 43.630±0.448 0.133±0.004模 型 組 5 52.056±1.840a 27.742±1.063a 0.241±0.012a假 手 術 組 6 71.260±1.325 40.371±1.800 0.173±0.005血 脂 康 組 5 61.083±1.130ab 33.601±1.578ab 0.167±0.006ab合 劑大 劑量組 6 62.635±1.270abe 35.237±0.717abe 0.158±0.007ab合 劑中 劑量組 6 60.713±0.851ab 33.564±1.528ab 0.165±0.009ab合 劑小 劑量組 5 59.029±1.339abe 32.013±1.345abe 0.175±0.005ab顆粒劑大劑量組 6 63.031±1.175abcde 35.432±0.815abcde 0.146±0.012bcde顆粒劑中劑量組 7 62.642±1.523abcde 34.978±0.681abcde 0.155±0.008abde顆粒劑小劑量組 7 60.164±1.375ab 32.313±1.135abe 0.167±0.013ab

表2 各組大鼠血清IL-6、TNF-a的比較(±s)

表2 各組大鼠血清IL-6、TNF-a的比較(±s)

注:與空白組比較:*P＜0.05;與模型組比較:△P＜0.05;與合劑中劑量組比較:★P＜0.05;與合劑小劑量組比較:●P＜0.05;與血脂康組比較:☆P＜0.05

組別 鼠數(shù) IL-6(pg/ml) TNF-a(pg/ml)空 白 組7 4.69±0.75 26.31±2.48模 型 組 5 32.10±6.18* 120.24±13.11*假 手 術 組 6 6.45±0.66 29.88±4.23血 脂 康 組 5 19.80±1.12＊△ 74.52±4.10＊△合 劑 大 劑 量 組 6 17.23±0.65＊△☆ 69.47±2.54＊△☆合 劑 中 劑 量 組 6 17.85±0.97＊△☆ 72.37±2.43＊△☆合 劑 小 劑 量 組 5 18.18±0.69＊△☆ 78.00±3.04＊△顆 粒 劑 大 劑 量 組 6 13.77±0.66＊△★●☆ 59.47± 4.14＊△★●☆顆 粒 劑 中 劑 量 組 7 16.24±0.73＊△★●☆ 65.30±3.68＊△★●☆顆 粒 劑 小 劑 量 組 7 16.71±1.24＊△★●☆ 65.67±2.57＊△★●☆

3 討論

AMI后VR指AMI后機體通過一系列的復雜機制，使心肌結構、功能發(fā)生變化的動態(tài)過程。其主要病理過程是發(fā)生心肌細胞增粗、增長，心肌質量的增加、間質成分的增多、毛細血管相對減少，心壁的增厚、心腔容積的擴大、心腔形狀的改變等一系列的變化，使心功能由代償轉向失代償最終導致慢性心力衰竭［8］。有研究表明［9-10］，AMI后炎癥反應是發(fā)生VR的重要機制與環(huán)節(jié)，其通過級聯(lián)放大效應產(chǎn)生大量炎癥細胞因子，如白細胞介素-1(interleukin-1，IL-1)、IL-6、TNF-a、C反應蛋白(C-reactive protein，CRP)等。這些炎癥細胞因子不僅引起心肌細胞肥大、心肌組織空間結構改變，而且還會導致心肌細胞凋亡等變化，導致VR的發(fā)生［11］。而在諸多炎癥因子中，又以IL-6和TNF-a為多見［12］。因此，通過抑制AMI后IL-6和TNF-a的釋放，成為干預AMI后VR的重要途徑之一。近年來已有眾多研究表明［13-16］，他汀類藥物可通過抑制AMI后炎癥因子的表達，從而具有一定程度干預VR的發(fā)生及改善心功能的作用。被稱為天然他汀的血脂康膠囊(主要成分為紅曲、洛伐他汀等)抑制炎癥反應干預VR的作用，已經(jīng)得到證實和公認。如林靜等［17］研究表明，血脂康膠囊能明顯降低急性冠脈綜合征(ACS)患者炎癥因子的表達，發(fā)揮心血管保護及抑制VR的作用。趙秀峰［18］及陳立生［19］等均從ACS的炎癥機制方面入手，認為血脂康膠囊能顯著抑制患者血清TNF-a、IL-6等炎癥因子的表達，從而干預VR的發(fā)生。

AMI屬于中醫(yī)學“胸痹”、“真心痛”等范疇，其基本病機總屬本虛標實，本虛以氣虛、陰虛為主，標實則以血瘀最為重要。氣陰兩虛、瘀血阻滯為AMI后特定階段的重要病機，故益氣養(yǎng)陰、活血化瘀為其主要治療原則之一?！肮谛腣號”制劑是在中醫(yī)藥理論指導和臨床實踐中，基于對此病機特點的認識篩選出的有效方藥，其處方組成為黨參、麥冬、丹參、赤芍、五味子(制)、地黃。方中黨參益氣生津為君，麥冬養(yǎng)陰潤燥，五味子酸斂生津、補腎寧心，三藥合用一補一潤一斂，共舉益氣養(yǎng)陰之力;丹參活血化瘀、寧心安神止痛;赤芍化瘀止痛、涼血活血;地黃涼血生津，共助活血化瘀之效，諸藥配伍齊奏益氣養(yǎng)陰、活血化瘀之效。本實驗研究顯示，“冠心V號”制劑(合劑與顆粒劑)在降低模型大鼠血清IL-6和TNF-a含量方面，與血脂康膠囊有部分類似的實驗結果。本研究表明，“冠心V號”制劑(合劑與顆粒劑)能顯著改善AMI模型大鼠心臟結構及心功能，而影響大鼠血清炎性細胞因子IL-6和TNF-a水平，抑制炎癥反應，可能是其干預AMI后VR的機制之一，并呈現(xiàn)出“冠心V號”制劑(合劑與顆粒劑)抑制炎癥反應強度具有劑量依賴性的趨勢。本研究結果同時亦表明，“冠心V號”顆粒劑劑型較合劑劑型在改善模型大鼠心臟結構及心功能、降低模型大鼠血清IL-6和TNF-a含量、抑制炎癥反應從而干預VR的作用方面，有更為突出的優(yōu)勢，這為醫(yī)院自制制劑“冠心V號”合劑的劑型改革，即研制顆粒劑提供了一定的客觀依據(jù)。

本研究初步探索了“冠心V號”制劑通過抑制炎癥反應途徑從而干預AMI后VR的部分作用機制，并對2種劑型進行了初步比較。但中藥制劑存在多靶點、多途徑、多環(huán)節(jié)的作用，因此“冠心V號”制劑干預AMI后VR的作用機制及劑型改革，尚需系統(tǒng)、全面、深入的藥學、藥理及隨機、對照、大樣本、多中心的臨床研究提供依據(jù)并加以證實。

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Effects of"GuanXin V"Preparation on Rats Ventricular Remodeling and Inflammatory Factors with Acute Myocardial Infarction

KE Feng，ZUO Ke-ke，GU Ning△
(The Third affiliated Hospital of Nanjing Univeristy of TCM，Nanjing 210001，China)

Objective:To explore the mechanisms of Guan Xin preparation V interfere Ventricular Remodeling(VR) after Acute Myocardral Infarction(AMI)and the different effects of Guan Xin V(mixture and granules)interfere VR after AMI from the perspective of inflammatory factor in rats with AMI．Methods:80 SD rats were slected，among which 7 rats were set as blank control group，and the others were made AMI models．63 successfully made models were randomized into 9 groups，7 rats in each group．Medication groups given relevvant doses drug，the others groups were administered normal saline．28 days later，each group was detected echocardiography，IL-6 and TNF-α．Results:Comparing with the AMI model group，the EF，F(xiàn)S increased significantly，while the LVMI and the content of IL-6 and TNF-a decreased significantly in the Guan Xin preparation V of each doses group and Xue Zhikang group．Comparing with the Guan Xin mixture V moderatedoses group，the EF，F(xiàn)S increased significantly in the Guan Xin granules V large-doses group and moderate-doses group，while the content of IL-6 and TNF-α decreased significantly．Comparing with the Guan Xin mixture V small-doses group，the EF，F(xiàn)S increased significantly in the Guan Xin granules V large-doses group and moderate-doses group，while the LVMI and the content of IL-6 and TNF-a decreased significantly．Conclusion:Guan Xin preparation V could improve cardiac structure and function in rats with AMI，and reduce the release of inflammatory factors in serum，which may be one of the mechanisms to improve VR after AMI．In this regad，the Guan Xin granules V is more prominent advantages than Guan Xin mixture V．

Guan Xin preparation V;acute myocardial infarction(AMI);ventricular remodeling(VR);interleukin-6 (IL-6);tumor necrosis factor-α(TNF-α)

R285．5

B

1006-3250(2016)01-0050-04

2015-04-27

南京市醫(yī)學重點科技發(fā)展項目(201108005);江蘇省研究生創(chuàng)新工程計劃項目(CXZZ13_06)

柯 峰(1988-)，男，醫(yī)師，醫(yī)學碩士，從事心血管疾病的基礎與臨床研究。

△通訊作者:顧 寧(1963-)，男，教授，主任醫(yī)師，醫(yī)學博士，博士研究生導師，從事心血管疾病的基礎與臨床研究，Tel: 025-52276242，E-mail:guning@medmail．com．cn。