黃柳靜，許常龍，李春苑，丘映

(廣西南寧市第二人民醫(yī)院生殖醫(yī)療中心，南寧　530031)

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低評(píng)分胚胎的囊胚培養(yǎng)和移植結(jié)局

黃柳靜，許常龍，李春苑，丘映*

(廣西南寧市第二人民醫(yī)院生殖醫(yī)療中心，南寧530031)

【摘要】目的探討IVF/ICSI-ET中第三天(D3)低評(píng)分胚胎的囊胚培養(yǎng)和移植結(jié)局。方法將受精后第3天的低評(píng)分胚胎培養(yǎng)至囊胚期。比較不同卵裂球數(shù)的D3低評(píng)分胚胎囊胚形成情況；分析所獲得的可移植囊胚進(jìn)行玻璃化冷凍-解凍-移植后的臨床結(jié)局。結(jié)果1.低評(píng)分胚胎可移植囊胚形成率30.85%；2.其中6-9細(xì)胞的胚胎囊胚形成率及可移植囊胚形成率均較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；3.2012年2月至2014年4月共解凍所形成的可移植囊胚362枚，存活314枚，囊胚復(fù)蘇率86.74%；共解凍225個(gè)周期，移植206個(gè)周期，囊胚移植后胚胎著床率為27.07%，生化妊娠率41.26%，臨床妊娠率36.41%，流產(chǎn)率為24.0%，活產(chǎn)率26.70%。低評(píng)分胚胎組的胚胎著床率(27.07% vs.44.44%)、生化妊娠率(41.26% vs.66.67%)、臨床妊娠率(36.41% vs.61.90%)、活產(chǎn)率(26.70 vs.47.62%)均低于優(yōu)質(zhì)胚胎組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論卵裂期低評(píng)分胚胎仍有可能獲得妊娠及活產(chǎn)兒。將卵裂期低評(píng)分胚胎用于囊胚培養(yǎng)，可提高胚胎利用率。對(duì)于無(wú)優(yōu)胚移植或者移植優(yōu)胚仍未受孕的患者，可選擇移植來(lái)源于低評(píng)分胚胎的囊胚。

【關(guān)鍵詞】低評(píng)分胚胎；囊胚；體外培養(yǎng)；體外受精-胚胎移植

(JReprodMed2016，25(3)：214-218)

體外受精-胚胎移植(IVF-ET)技術(shù)給許多不孕家庭帶來(lái)了福音，但也帶來(lái)了許多問(wèn)題，如多胎妊娠、卵巢過(guò)度刺激、自然流產(chǎn)、胎兒畸形、異位妊娠等。生殖醫(yī)學(xué)界的多數(shù)醫(yī)務(wù)工作者認(rèn)為囊胚培養(yǎng)與移植技術(shù)發(fā)展至今，已是一種提高胚胎種植率與妊娠率、減少多胎妊娠的先進(jìn)技術(shù)[1-6]。冷凍前行囊胚培養(yǎng)可增加胚胎細(xì)胞數(shù)以及選擇最好的胚胎冷凍[7-8]。部分低評(píng)分的D3胚胎仍有繼續(xù)發(fā)育的潛能，仍可發(fā)育成為優(yōu)質(zhì)囊胚，移植后獲得了臨床妊娠，提高胚胎利用率[9-13]。對(duì)低評(píng)分胚胎進(jìn)行體外延長(zhǎng)培養(yǎng)能有效篩選出具有發(fā)育潛力的胚胎。本文探討第三天(D3)低評(píng)分胚胎繼續(xù)行體外培養(yǎng)囊胚的結(jié)局，并分析來(lái)源于卵裂期低評(píng)分胚胎的囊胚進(jìn)行玻璃化冷凍-解凍-移植的臨床結(jié)局。

資料與方法

一、研究對(duì)象

1. 選擇2011年11月至2012年9月在本生殖醫(yī)療中心行IVF-ET或ICSI-ET助孕的患者的1 679枚低評(píng)分卵裂期胚胎，與135枚優(yōu)質(zhì)胚胎進(jìn)行囊胚培養(yǎng)。

2. 比較2012年2月至2014年4月在本中心進(jìn)行移植的來(lái)源于D3低評(píng)分胚胎的囊胚與來(lái)源于優(yōu)質(zhì)胚胎的囊胚移植后的臨床結(jié)局。

3. 材料胚胎培養(yǎng)液(Vitrolife，瑞士)，玻璃化冷凍液、解凍液、冷凍載體：全封閉式玻璃化冷凍載體(JIEYING，加拿大)。

二、方法

1. 受精后D3對(duì)胚胎進(jìn)行評(píng)分：參照文獻(xiàn) [14]評(píng)判，優(yōu)質(zhì)胚胎為來(lái)源于6-12cell Ⅰ-Ⅱ級(jí)胚胎，低評(píng)分胚胎為來(lái)源于1PN的4-12cellⅠ-Ⅲ級(jí)和來(lái)源于2PN的4-5 cellⅠ-Ⅱ級(jí)，6-12cell Ⅲ級(jí)胚胎。將優(yōu)質(zhì)胚胎用于移植或玻璃化冷凍。

2. 玻璃化冷凍：經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，與不孕夫婦簽署知情同意書(shū)后，將符合入選標(biāo)準(zhǔn)低評(píng)分胚胎培養(yǎng)至囊胚期。參考Gardner等[1]標(biāo)準(zhǔn)，于D5-6對(duì)囊胚進(jìn)行評(píng)分。將D5≥3BC，D6-7≥4BC的可移植囊胚進(jìn)行玻璃化冷凍。

3. 冷凍囊胚移植前內(nèi)膜準(zhǔn)備：(1)自然周期：月經(jīng)規(guī)律，自然周期排卵正常者，監(jiān)測(cè)優(yōu)勢(shì)卵泡平均直徑大于14 mm后每日B超并抽血查L(zhǎng)H、E2、P，LH峰為D0，排卵當(dāng)天為D1，于D5行冷凍囊胚移植。(2)人工周期：月經(jīng)周期不規(guī)律、無(wú)排卵者，于月經(jīng)周期第3天開(kāi)始口服戊酸雌二醇(補(bǔ)佳樂(lè)，廣州先靈公司)2 mg，每天2 次，共5 d，周期第8天開(kāi)始改為3 mg，每天2 次，共5 d。然后開(kāi)始B超監(jiān)測(cè)子宮內(nèi)膜厚度及查血E2，并調(diào)整戊酸雌二醇用量，最大劑量8 mg/d。當(dāng)內(nèi)膜厚度>8 mm，E2>200 pg/ml(732 pmol/L)，認(rèn)為內(nèi)膜準(zhǔn)備好。此時(shí)予黃體酮60 mg肌肉注射，每天1 次，注射黃體酮第6天行冷凍囊胚移植。

4.黃體支持：(1)自然周期：排卵日開(kāi)始予黃體酮軟膠囊(安琪坦，Laboratoires Besins-Tscovesco，法國(guó))200 mg PV Bid+地屈孕酮片(達(dá)芙通，雅培，荷蘭)10 mg Bid，用藥15 d。(2)人工周期：黃體轉(zhuǎn)化開(kāi)始予黃體酮針60 mg im Qd+地屈孕酮片(達(dá)芙通，雅培，荷蘭)10 mg Bid，用藥15 d。

5.生化妊娠：移植后12～14 d抽血β-HCG，陽(yáng)性為生化妊娠。臨床妊娠：移植后30～35 d B超探及孕囊為臨床妊娠。流產(chǎn)：臨床妊娠后于28周以前發(fā)生的自然流產(chǎn)。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料兩樣本均數(shù)采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P<0.05，為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、不同細(xì)胞數(shù)的D3低評(píng)分胚胎的囊胚形成情況

1 679個(gè)D3低評(píng)分胚胎形成囊胚864枚(形成率51.46%)，其中可移植囊胚518枚(30.85%)。6-9cell的囊胚和可移植囊胚形成率較高。三組的囊胚及可移植的囊胚形成率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)(表1)。

二、低評(píng)分胚胎組和優(yōu)質(zhì)胚胎組的可移植囊胚形成情況和囊胚解凍結(jié)局

可移植囊胚形成率低評(píng)分胚胎組為30.85%(518/1 679)，優(yōu)質(zhì)胚胎組為52.59%(71/135)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。低評(píng)分胚胎組共解凍225個(gè)周期，因胚胎復(fù)蘇差取消移植19個(gè)周期，取消率8.44%，共解凍362枚囊胚，復(fù)蘇314枚，復(fù)蘇率86.74%。優(yōu)質(zhì)胚胎組解凍22個(gè)周期，因胚胎復(fù)蘇差取消移植1個(gè)周期，取消率4.55%，解凍39枚囊胚，復(fù)蘇36枚，復(fù)蘇率92.31%。低評(píng)分胚胎組周期取消率高于優(yōu)質(zhì)胚胎組，囊胚復(fù)蘇率低于優(yōu)質(zhì)胚胎組，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。兩組平均移植胚胎數(shù)差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表2)。

三、低評(píng)分胚胎組和優(yōu)質(zhì)胚胎組解凍囊胚移植的臨床結(jié)局

低評(píng)分胚胎組：胚胎著床率27.07%(85/314)，生化妊娠率41.26%(85/206)，臨床妊娠率36.41%(75/206)，活產(chǎn)率26.70%(55/206)；優(yōu)質(zhì)胚胎組：胚胎著床率44.44%(16/36)，生化妊娠率66.67%(14/21)，臨床妊娠率61.90%(13/21)，活產(chǎn)率47.62%(10/21)。低評(píng)分胚胎組的胚胎著床率、生化妊娠率、臨床妊娠率、活產(chǎn)率均低于優(yōu)質(zhì)胚胎組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表3)。低評(píng)分胚胎組流產(chǎn)率高于優(yōu)質(zhì)胚胎組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表3)。低評(píng)分胚胎組除分娩與流產(chǎn)以外，另有一例足月死胎引產(chǎn)，一例因胎兒畸形中期引產(chǎn)。

表1　不同細(xì)胞數(shù)來(lái)源D3低評(píng)分胚胎的囊胚

注：與4-5細(xì)胞數(shù)相比，*P<0.001；與10-12細(xì)胞數(shù)相比，#P<0.005

表2　低評(píng)分胚胎組和優(yōu)質(zhì)胚胎組的可移植囊胚形成率和囊胚解凍情況[(x-±s)，n〔%〕]

注：與優(yōu)質(zhì)胚胎組比較，*P<0.001

表3　低評(píng)分胚胎組和優(yōu)質(zhì)胚胎組解凍囊胚移植后的臨床結(jié)局比較[n〔%〕]

注：與優(yōu)質(zhì)胚胎組比較，*P<0.05

討論

隨著體外序貫培養(yǎng)體系的日趨成熟，囊胚培養(yǎng)作為國(guó)內(nèi)外許多生殖醫(yī)療中心的主要胚胎培養(yǎng)技術(shù)，在輔助生殖技術(shù)的發(fā)展史上有著舉足輕重的意義。各個(gè)生殖醫(yī)療中心對(duì)于卵裂期低評(píng)分胚胎的處理均無(wú)統(tǒng)一意見(jiàn)。本研究將卵裂期低評(píng)分胚胎用于囊胚培養(yǎng)，意在了解低評(píng)分胚胎發(fā)育為囊胚的潛能，以及所形成的囊胚移植后的臨床結(jié)局。

本研究表明，在各種不同卵裂球數(shù)目的D3低評(píng)分胚胎中，6-9cell的可移植囊胚形成率最高，與許多研究[13，15]結(jié)果一致?？梢浦材遗咝纬陕实驮u(píng)分胚胎組為30.85%，優(yōu)質(zhì)胚胎組為52.59%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。囊胚形成率與卵裂期胚胎形態(tài)學(xué)評(píng)分關(guān)系密切，D3胚胎質(zhì)量越好，囊胚形成率越高[16]。盡管卵裂期低評(píng)分胚胎的囊胚形成率偏低，但其中仍有一部分可能發(fā)育成為囊胚甚至優(yōu)質(zhì)囊胚，將低評(píng)分胚胎繼續(xù)培養(yǎng)囊胚，可提高胚胎的利用率[17-19]。

對(duì)于D3低評(píng)分胚胎的研究，國(guó)內(nèi)外多數(shù)為利用廢棄胚胎建立胚胎干細(xì)胞系，囊胚形成率為14.6%～32.6%[20-22]。本研究探討卵裂期低評(píng)分胚胎所形成的囊胚移植后的臨床結(jié)局。研究所用胚胎為1PN的4-12cellⅠ-Ⅲ級(jí)，2PN的4-5 cellⅠ-Ⅱ級(jí)、6-12cell Ⅲ級(jí)胚胎，這部分胚胎發(fā)育而來(lái)的可移植囊胚經(jīng)移植后的臨床妊娠率達(dá)36.41%，與文獻(xiàn)[9-10，23]報(bào)道的相似。低評(píng)分胚胎與優(yōu)質(zhì)胚胎形成的囊胚相比較，低評(píng)分胚胎組的胚胎著床率、生化妊娠率、臨床妊娠率、活產(chǎn)率均低于優(yōu)質(zhì)胚胎組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。到目前為止，低評(píng)分胚胎所發(fā)育而來(lái)的囊胚移植后已分娩55個(gè)健康活嬰，活產(chǎn)率26.70%。流產(chǎn)18例，包括14例早期流產(chǎn)和4例晚期流產(chǎn)，流產(chǎn)率為24.00%，比國(guó)內(nèi)外報(bào)道的輔助生殖技術(shù)流產(chǎn)率(10%～20%)偏高[24]。流產(chǎn)率增高可能與低評(píng)分胚胎的染色體異常有關(guān)?？傊蚜哑诘驮u(píng)分胚胎經(jīng)過(guò)囊胚培養(yǎng)有可能獲得可移植囊胚，這部分囊胚移植后有妊娠并獲得活嬰的機(jī)會(huì)。

在自然生理狀態(tài)下，胚胎于受精后6～7 d，即晚囊胚期植入子宮內(nèi)膜。所以，囊胚移植與子宮內(nèi)膜更具同步性，縮短了胚胎在宮腔內(nèi)進(jìn)一步發(fā)育與著床之間的時(shí)間間隔，更符合生理過(guò)程，因而可獲得更高的胚胎種植率及臨床妊娠率。此外，經(jīng)過(guò)囊胚期的體外培養(yǎng)，沒(méi)有發(fā)育潛能的胚胎遭遇自然淘汰，從而可優(yōu)選出具有較高發(fā)育潛能的胚胎。有能力發(fā)育至囊胚期的胚胎有著更高的著床率和臨床妊娠率[25]。所以，將卵裂期低評(píng)分胚胎經(jīng)過(guò)囊胚培養(yǎng)篩選出可移植囊胚，對(duì)于沒(méi)有優(yōu)質(zhì)胚胎移植或者移植了優(yōu)質(zhì)胚胎仍未受孕的患者，選擇此類囊胚進(jìn)行移植，可增加胚胎利用率和累積妊娠率[26]。

試管嬰兒技術(shù)經(jīng)過(guò)三十多年的發(fā)展，已經(jīng)被廣泛認(rèn)可。但是這種非自然狀態(tài)下受孕出生的嬰兒將來(lái)的健康問(wèn)題越來(lái)越受到關(guān)注。大樣本的研究表明，人類輔助生殖技術(shù)并沒(méi)有增加流產(chǎn)和妊娠并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)[24]。但本研究所使用的胚胎為低評(píng)分胚胎，培養(yǎng)囊胚后用于移植，故此類子代安全問(wèn)題更應(yīng)受到密切關(guān)心。與優(yōu)質(zhì)胚胎相比，低評(píng)分胚胎的妊娠率、著床率、活產(chǎn)率都偏低。本研究中低評(píng)分胚胎組的臨床妊娠中有一例足月死胎引產(chǎn)，胎兒死亡原因不明，產(chǎn)科初步考慮為臍帶繞頸。另有一例因胎兒畸形于孕中期行引產(chǎn)。出生的55個(gè)活嬰中，無(wú)出生缺陷發(fā)生。然而這部分嬰兒的遠(yuǎn)期健康狀況，仍需長(zhǎng)期追蹤調(diào)查。

綜上所述，部分卵裂期低評(píng)分胚胎仍有發(fā)育成為可移植囊胚的潛能，所形成的可移植囊胚有著床并獲得臨床妊娠及活嬰的機(jī)會(huì)。經(jīng)過(guò)體外序貫培養(yǎng)，篩選出有發(fā)育潛能的胚胎，可更充分利用胚胎，減少胚胎的浪費(fèi)，增加累積妊娠率，改善輔助生殖技術(shù)的臨床結(jié)局。

【參考文獻(xiàn)】

[1]Gardner DK，Lane M，Stevens J，et al. Blastocyst score affects implantation and pregnancy outcome：towards a single blastocyst transfer[J]. Fertil Steril，2000，73：1155-1158.

[2]Van Royen E，MangelschotsK，De Neudourg D，et al. Characterization of a top quality embryo，a step towards single-embryo transfer[J]. Hum Reprod，1999，14：2345-2349.

[3]Chin-Kun Baw，Kim Dao Ly，Amr Kader，et al. Single Blastocyst Transfer：Contenporary Experience[J]. Current Women’s Health Reviews，2010，6：219-226.

[4]Langley MT，Marek DM，Gardner DK，et al. Extended embryo culture in human assisted reproduction treatments[J]. Hum Reprod，2001，16：902-908.

[5]Hsieh YY，Tsai HD，Chang FC. Routine Blastocyst Culture and Transfer：201 patients’espenience[J]. J Assist Reprod Genet，2000，17：405-408.

[6]Fanchin R，Ayoubi JM，Righini C. Uterine contractility decreases at the time of blastocyst transfers[J]. Hum Reprod，2001，16：1115-1119.

[7]Freitas S，Le Gal F，Dzik A，et al. Value of cryopreservation of human embryos during the blastocyst stage[J]. Contracept Fertil Sex，1994，22：396-401.

[8]Guerif F，F(xiàn)rapsauce C，Charez C，et al. Treating women under 36 years old without top-quality embryos on day 2_ a prospective study comparing double embryo transfer with single blastocyst transfer[J]. Hum Reprod，2011，26：775-781

[9]莫美蘭，宋成，張宏展，等. 低等級(jí)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)的價(jià)值與其臨床結(jié)局[J]. 生殖醫(yī)學(xué)雜志，2012，21：205-208.

[10]Balaban B，Urman B，Alatas C，et al. Blastocyst-stage transfer of poor-quality cleavage-stage embryos results in higher implantation rates[J]. Fertil Steril，2001，75：514-518.

[11]Alpha Scientists in Reproductive Medicine and ESHRE Special Interest Group of Embryology. The Istanbul consensus workshop on embryo assessment：proceedings of an expert meeting[J]. Hum Reprod，2011，26：1270-1283.

[12]尹太郎，丁錦麗，李潔，等. 影響D3非優(yōu)質(zhì)胚胎的囊胚培養(yǎng)結(jié)局的相關(guān)因素分析[J]. 生殖醫(yī)學(xué)雜志，2015，24：893-899.

[13]Guerif F，Le Gouge A，Giraudeau B，et al. Limited value of morphological assessment at days 1 and 2 to predict blastocyst development potential：A prospective study based on 4042 embryos[J]. Hum Reprod，2007，22：1973-1981.

[14]Ebner T，Moser M，Sommergruber M，et al. Selection based on morphological assessment of oocytes and embryos at different stages of preimplantation development：a review[J]. Hum Reprod，2003，9：251-262.

[15]Rijnders PM Jansen CAM. The predictive value of day 3 embryo morphology regarding blastocyst formation，pregnancy and implantation rate after day 5 tranfer following in-vitro fertilization or intracytoplasmic sperm injiection[J]. Hum Reprod，1998，13：2869-2873.

[16]陳國(guó)勇，黃吳鍵，洪新如. 人體外受精-胚胎移植中第3天胚胎發(fā)育潛能的評(píng)估[J]. 生物醫(yī)學(xué)工程與臨床，2015，19：220-224.

[17]溫烯，李蓉，郝桂琴，等. 低質(zhì)量人類胚胎體外發(fā)育至囊胚能力的研究[J]. 現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2010，19：286-288.

[18]梁菊艷，王芳，孫瑩璞，等. 廢棄胚胎繼續(xù)囊胚培養(yǎng)研究[J]. 生殖與避孕，2008，10：598-601.

[19]Guerif F，Le Gouge A，Giraudeau B，et al. Limited value of morphological assessment at days 1 and 2 to predict blastocyst development potential：A prospective study based on 4042 embryos[J]. Hum Reprod，2007，22：1973-1981.

[20]O’Leary T，Duggal G，Lierman S，et al. The influence of patient and cohort parameters on the incidence and developmental potential of embryos with poor quality traits for use in human embryonic stem cell derivation[J]. Hum Reprod，2012，27：1581-1589.

[21]Wang Y，Xu C，Wang H，et al. Efficient derivation of human embryonic stem cell lines from discarded embryos through increases in the concentration of basic fibroblast growth factor[J]. Hum Cell，2012，25：16-23.

[22]Li B，Xu L，Lu WY，et al. A whole-mechanical method to establish human embryonic stem cell line HN4 from discarded embryos[J]. Cytotechnology，2010，62：509-518.

[23]Ren X，Liu Q，Chen W，et al. Selection and vitrification of embryos with a poor morphological score：A proposal to avoid embryo wastage[J]. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci，2012，32：405-409.

[24]殷莉. 輔助生殖技術(shù)子代安全性評(píng)估[D]. 武漢：武漢同濟(jì)醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心，2013.

[25]周黎明. 囊胚培養(yǎng)及移植在體外受精過(guò)程中的臨床應(yīng)用[J]. 現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)，2008，7：553-554.

[26]王雅琴，楊菁，徐望明，等. 低等級(jí)胚胎囊胚培養(yǎng)及凍融周期移植后臨床結(jié)局分析[J]. 生殖醫(yī)學(xué)雜志，2015，24：220-224.

[編輯：谷炤]

Outcome of blastocyst culture and transfer of low grade embryos

HUANGLiu-jing，XUChang-long，LIChun-yuan，QIUYing*

Reproductivemedicalcenter，theSecondPeople’sHospitalofNanning，Nanning530031

【Abstract】

Objective： To explore the outcome of blastocyst culture and transfer low-grade embryos on day 3 in IVF/ICSI-ET treatment.

Methods： The low-grade embryos on day 3 were cultured to day 5 or day 6. The blastocyst formation status was compared among the different number of blatomere of low-grade embryos on day 3. The transplantable blastocysts were process vitrification-thaw-transplantation. The clinical outcomes of blastocyst were analyzed.

Results： The transplantable blastocyst formation rate was 30.85%. The embryos with 6-9 cells had higher blastocyst or transplantable blastocyst formation rate(P<0.05). From 2012 February to 2014 April，362 blastocyst were frozen-thawed，and 314 blastocyst were revived and replaced. The blastocyst recovery rate was 86.74%. There were 225 frozen-thawed cycles and 206 transfer cycles. The blastocyst implantation rate(27.07% vs. 44.44%)，biochemical pregnancy rate(41.26% vs. 66.67%)，clinical pregnancy rate (36.41% vs. 61.90%) and live-birth rate (26.70 vs. 47.62%) in the low-grade embryos group were all significantly lower than those in high quality embryos group (allP<0.05).

Conclusions： Cleavage stage low quality embryos have the potential to achieve pregnancy and live births. It can improve the embryos utilization rate that low-grade embryos in cleavage stage are cultured to blastocyst. The patients without optimal embryo or without pregnant after high quality embryo transfer could transfer the blastocysts derived from low grade embryos.

Key words：Low grade embryo；Blastocyst；In vitro culture；IVF-ET

【作者簡(jiǎn)介】黃柳靜，女，廣西南寧人，碩士，主治醫(yī)師，生殖醫(yī)學(xué)專業(yè).(*通訊作者)

【基金項(xiàng)目】廣西科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目 (桂科攻0993003A-32)

【收稿日期】2015-08-30；【修回日期】2015-11-08

DOI：10.3969/j.issn.1004-3845.2016.3.004