聞穎，鄧寶成，劉沛（中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院傳染科，遼寧沈陽110001）

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CCR5-D32雜合性對HIV-1感染者高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療病毒學(xué)反應(yīng)與免疫學(xué)反應(yīng)影響的meta分析

聞穎，鄧寶成，劉沛
（中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院傳染科，遼寧沈陽110001）

摘要：目的評價趨化因子受體5-D32（CCR5-D32）雜合性對HIV-1感染者高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療病毒學(xué)反應(yīng)與免疫學(xué)反應(yīng)的影響。方法在PubMed，Web of Science和China Biology Medicine數(shù)據(jù)庫檢索，文獻(xiàn)收索至2015年10月1日。結(jié)果按照入選標(biāo)準(zhǔn)，有11篇文獻(xiàn)入選病毒學(xué)反應(yīng)分析，4篇文獻(xiàn)入選免疫學(xué)反應(yīng)分析。CCR5-D32雜合性人群病毒學(xué)反應(yīng)較高免疫學(xué)反應(yīng)也較高病毒學(xué)反應(yīng)亞組分析，在至少1年的觀察期以及具有稍高的HIV RNA檢測門檻的研究中，CCR5-D32雜合性與較高的病毒學(xué)反應(yīng)具有相關(guān)性。由于文獻(xiàn)少，免疫學(xué)反應(yīng)分析中無法進(jìn)行亞組分析。結(jié)論CCR5-D32雜合性人群病毒學(xué)反應(yīng)較高。其與免疫學(xué)反應(yīng)的相關(guān)性由于文獻(xiàn)偏少仍需進(jìn)一步證實。

關(guān)鍵詞：CCR5-D32雜合性；高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療；病毒學(xué)反應(yīng)；免疫學(xué)反應(yīng)；meta分析

從1996年高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療（highly active antiretroviral therapy，HAART）的應(yīng)用，人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染患者的HIV病毒復(fù)制得到控制，帶來了免疫學(xué)重建以及臨床預(yù)后的改善[1]。然而，在部分患者中，HAART治療的有效性受到多種因素的影響，如病毒變異、患者依從性、HAART治療方案、HIV疾病分期等。然而，宿主因素對HAART的療效也發(fā)揮重要作用。趨化因子受體5（C-C chemokine receptor 5，CCR5）是HIV進(jìn)入CD4+T靶細(xì)胞的關(guān)鍵表面受體[2]。全世界普遍流行的HIV-1亞型C（C-HIV），即為CCR5嗜性。趨化因子受體5-D32（CCR5-D32），是CCR5等位基因32個堿基缺失，其可編碼功能缺失的CCR5。CCR5-D32純合子（CCR5 D32/D32）的個體是非常稀少的（白人中大約占1%），該類人群對HIV感染具有天然抵抗力[3-4]。此外，CCR5-D32雜合子（CCR5 wt/D32）的個體，CD4+T靶細(xì)胞的CCR5表達(dá)也是減少的，導(dǎo)致該類人群對CCR5嗜性的HIV感染易感性大大降低[5]。在HIV感染疾病的自然進(jìn)程中，CCR5 wt/D32人群較CCR5野生型（CCR5 wt/wt）人群進(jìn)展緩慢，這可能與CCR5 wt/D32人群HIV病毒載量較低和CD4+T細(xì)胞計數(shù)較高有關(guān)[6-7]。在HAART藥物種類有限的眾多地區(qū)，明確CCR5-D32雜合性對HIV-1感染者HAART病毒學(xué)反應(yīng)與免疫學(xué)反應(yīng)的影響十分重要。然而迄今為止的這方面研究尚無定論，一些研究認(rèn)為兩者有相關(guān)性[8-15]，另一些研究卻否定該種聯(lián)系[16-18]，主要是這些研究采用的入選標(biāo)準(zhǔn)不同。不同的HAART藥物方案、評估時間點、初治或復(fù)治的背景、HIVRNA的檢測門檻都可能對結(jié)果產(chǎn)生影響。因此，應(yīng)用meta分析通過增加樣本量、減少偏倚來對該結(jié)果進(jìn)行分析，以明確CCR5-D32雜合性是否對HIV-1感染者HAART病毒學(xué)反應(yīng)與免疫學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生影響，并對上述的影響因素進(jìn)行分析，以指導(dǎo)臨床更好的評價HIV患者HAART后的療效。

1　資料與方法

1.1檢索策略

計算機(jī)檢索PubMed，Web of Science and China Biology Medicine（CBM）數(shù)據(jù)庫，收索從建庫至2015年10月1日文獻(xiàn)；英文檢索詞：（“CCR5”或“chemokine receptor 5”）和（“HIV”或“Human Immunodeficiency Virus”或“AIDS”）和（“antiretroviral”或“HAART”）；中文檢索詞：趨化因子受體5和人類免疫缺陷病毒或艾滋病和抗病毒治療。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①HIV病人使用HAART治療；②治療方案是HAART，而非單藥治療；③研究CCR5-D32的雜合性；④研究類型為：隊列研究、病例對照研究或橫斷面研究，內(nèi)容涉及CCR5-D32異質(zhì)性對HAART病毒學(xué)反應(yīng)與免疫學(xué)反應(yīng)的影響。排除標(biāo)準(zhǔn)：①與先前文章類似；②數(shù)據(jù)不全；③缺乏對照；④meta分析、綜述或評論文章。

1.3文獻(xiàn)提取

由聞穎，鄧寶成，劉沛3位作者獨立提取文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，并共同檢查匯總。從11篇文獻(xiàn)中提取以下數(shù)據(jù)：第一作者、出版年限、種族、國家、樣本大小、CCR5-D32測序方法、HIVRNA檢測門檻、評估時間點、是否初治、HAART方案。對HAART啟動時的CD4+T計數(shù)與HIVRNA也要進(jìn)行評估。同時采用（Sacks Quality Assessment Checklist，SQAC）量表對納入文獻(xiàn)進(jìn)行質(zhì)量評價（0～50分）。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用STATA 11.0統(tǒng)計學(xué)軟件（StataCorp，College Station，TX）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，應(yīng)用95%可信區(qū)間的優(yōu)勢比（odds ratios，ORs）評估CCR5-D32雜合性對HAART病毒學(xué)反應(yīng)與免疫學(xué)反應(yīng)的影響。針對HIVRNA檢測門檻、評估時間點、是否初治、HAART方案進(jìn)一步進(jìn)行亞組分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。存在異質(zhì)性的資料，應(yīng)用隨機(jī)效應(yīng)模型，否則應(yīng)用固定效應(yīng)模型分析。應(yīng)用Egger’s和Begger’s檢驗明確有否發(fā)表偏倚。同時進(jìn)行敏感性分析。

2　結(jié)果

2.1檢索流程與納入文獻(xiàn)特征

首先，應(yīng)用上述關(guān)鍵詞收索到1 139篇文獻(xiàn)；然后，根據(jù)標(biāo)題與關(guān)鍵詞，1 083篇文獻(xiàn)被剔除；剩余的56篇文獻(xiàn)經(jīng)詳閱摘要與全文后，45篇文獻(xiàn)被剔除；最后，11篇文獻(xiàn)入組CCR5-D32雜合性對HAART病毒學(xué)反應(yīng)影響[8-10，11-17]，文獻(xiàn)篩選流程圖（見圖1），且其中僅4篇文獻(xiàn)入組CCR5-D32雜合性對HAART免疫學(xué)反應(yīng)影響[9-10、12-13]。出版年限從1998年到2010年。所有文獻(xiàn)CCR5基因分型的DNA樣本均來自患者的外周血。CCR5基因分型方法為PCR限制性片段長度多態(tài)性分析、DNA測序、聚丙烯酰胺。

圖1　文獻(xiàn)篩選流程圖

凝膠分析和瓊脂糖凝膠分析。共檢測到CCR5 的3種基因分型：CCR5 wt/wt、CCR5 wt/D32、CCR5 D32/D32。其中2例CCR5 D32/D32的患者未納入meta分析中[10，17]。應(yīng)用哈代-溫伯格平衡定律（The Hardy-Weinberg equilibrium，HWE）檢驗基因型的分布，未發(fā)現(xiàn)偏倚（P >0.05）。樣本大小從107例到1 174例，主要為高加索人群。入選文獻(xiàn)特征，見附表。在CCR5 wt/wt與CCR5 wt/D32兩組患者中，比較HAART啟動時的CD4+T計數(shù)及HIVRNA水平，有9篇文獻(xiàn)的HAART啟動時的CD4+T計數(shù)及HIVRNA水平無差異；而在2篇文獻(xiàn)中[8-9]，CCR5 wt/ D32患者有較低的HIVRNA水平與較高的CD4+T計數(shù)。有10篇文獻(xiàn)HAART啟動時的CD4+T計數(shù)小于350 cells/μl，僅1篇文獻(xiàn)HAART啟動時的CD4+T計數(shù)大于350 cells/μl[15]。

附表　納入研究的基本特征

2.2CCR5-D32雜合性與HAART病毒學(xué)反應(yīng)的相關(guān)性與亞組分析

在納入的11篇文獻(xiàn)中，病毒學(xué)反應(yīng)定義為，低于檢測門檻。由于文獻(xiàn)的異質(zhì)性明顯（P<0.05），應(yīng)用隨機(jī)效應(yīng)模型。結(jié)果表明，CCR5 wt/D32人群對HAART的病毒學(xué)反應(yīng)較高（1.35，P=0.000），見圖2。針對HIVRNA檢測門檻進(jìn)行的亞組分析表明，在HIVRNA檢測門檻為400 copies/ml的8篇文獻(xiàn)中病毒學(xué)反應(yīng)較高（95%CI=1.15～1.38，P=0.000），而采用更低的檢測門檻的3篇文獻(xiàn)中缺乏該聯(lián)系（1.51，P=0.076），見圖3A。針對評估時間點進(jìn)行的亞組分析表明，在至少進(jìn)行1年評估的9篇文獻(xiàn)中病毒學(xué)反應(yīng)較高（0.000），而在僅觀察6個月的2篇文獻(xiàn)中缺乏這種聯(lián)系見圖3B。此外，進(jìn)一步亞組分析表明，病毒學(xué)反應(yīng)與初治或經(jīng)治1.26，95%CI=1.14～1.40，P=0.000）無關(guān)；與HAART方案（PI方案或各種方案）也無關(guān)1.07~1.36，P=0.002；P= 0.000）。

2.3CCR5-D32雜合性與HAART免疫學(xué)反應(yīng)的相關(guān)性

在納入CCR5-D32雜合性對HAART免疫學(xué)反應(yīng)影響的4篇文獻(xiàn)中，所采用的免疫學(xué)反應(yīng)定義是不同，包括：CD4+T計數(shù)增加了50 cells/μl，CD4+T計數(shù)增加100 cells/μl，CD4+T計數(shù)增加到200 cells/μl以上，CD4+T計數(shù)增加到200 cells/μl以上。該文獻(xiàn)評估時間點也不同，見附表。由于文獻(xiàn)的異質(zhì)性不明顯（P>0.05），故應(yīng)用固定效應(yīng)模型。結(jié)果表明，CCR5 wt/D32人群對HAART免疫學(xué)反應(yīng)較高（見圖4。由于文獻(xiàn)少，免疫學(xué)反應(yīng)無法進(jìn)行亞組分析。

2.4發(fā)表偏倚評價與敏感度分析

Begger’s漏斗圖形狀對稱，見圖5；Egger’s線性回歸結(jié)果表明，無論是針對病毒學(xué)反應(yīng)（t =1.7，P= 0.123），還是針對免疫學(xué)反應(yīng)的研究（t=-0.74，P= 0.537），均提示發(fā)表偏倚小。敏感度分析結(jié)果排除了單個文獻(xiàn)對的統(tǒng)計學(xué)影響。

圖2　CCR5-D32雜合性與HAART治療病毒學(xué)反應(yīng)的相關(guān)性

圖3　A：CCR5-D32雜合性與HAART治療病毒學(xué)反應(yīng)相關(guān)性的HIVRNA檢測門檻亞組分析；B：評估時間亞組分析

圖4　CCR5-D32雜合性與HAART治療免疫學(xué)反應(yīng)的相關(guān)性

圖5　A：CCR5-D32雜合性與HAART治療病毒學(xué)反應(yīng)的相關(guān)性發(fā)表偏倚評價；B：CCR5-D32雜合性對HAART治療免疫學(xué)反應(yīng)的相關(guān)性發(fā)表偏倚評價

3　討論

本研究發(fā)現(xiàn)：①CCR5 wt/D32人群對HAART的病毒學(xué)反應(yīng)較高；該聯(lián)系主要體現(xiàn)在至少1年的觀察期以及具有稍高的HIV RNA檢測門檻的研究中，且獨立于HAART啟動時的CD4+T計數(shù)及HIVRNA水平這兩個已知的預(yù)測因素，既往未見此類報道；②CCR5-D32雜合性人群對HAART的免疫學(xué)反應(yīng)較高。由于文獻(xiàn)少，免疫學(xué)反應(yīng)無法進(jìn)行亞組分析；③在高加索人群中，10%～25%的患者為CCR5 wt/D32，這與已發(fā)表文獻(xiàn)一致[19]。

到目前為止，盡管CCR5-D32雜合性對HIV-1感染者HAART病毒學(xué)反應(yīng)與免疫學(xué)反應(yīng)的影響尚無定論，尚缺乏這方面相關(guān)的meta分析文章，但重要的是沒有文獻(xiàn)提出CCR5 wt/D32的劣效性。Kasten等[13]認(rèn)為，在基線HIVRNA、CD4+T計數(shù)沒有統(tǒng)計學(xué)差異的前提下，CCR5 wt/D32雜合性人群病毒學(xué)反應(yīng)與免疫學(xué)反應(yīng)均較高。而Brumme等認(rèn)為，單變量分析表明CCR5 wt/D32雜合性人群病毒學(xué)反應(yīng)較高，但調(diào)整基線因素如依從性等的多元回歸分析差異無統(tǒng)計學(xué)意義[8]。本文研究結(jié)果，即CCR5 wt/ D32人群對HAART病毒學(xué)反應(yīng)較高，可能與NSI/R5轉(zhuǎn)換SI/X4的過程延緩以及細(xì)胞表面CCR5與嗜淋巴細(xì)胞受體4[chemokine（C-X-C motif）receptor 4，CXCR4]表達(dá)同時減少有關(guān)[20]。CCR5 wt/D32人群對HAART的病毒學(xué)反應(yīng)較高，該聯(lián)系一方面體現(xiàn)在至少1年的觀察期，揭示了CCR5 wt/D32這一宿主因素有利于HAART后的持久病毒學(xué)應(yīng)答。另一方面體現(xiàn)在稍高的HIV RNA檢測門檻，揭示CCR5 wt/D32這一宿主因素有利于HAART后HIV儲存庫衰減緩慢患者的病毒學(xué)抑制[21]。新近研究表明，CCR5 wt/D32人群由于HIVRNA轉(zhuǎn)錄受到抑制，HIV儲存庫復(fù)制水平較低[22]。需要指出：①在本研究中，病毒學(xué)反應(yīng)與初治或經(jīng)治無關(guān)，這與先前文獻(xiàn)不一致[23]；該文獻(xiàn)指出經(jīng)治患者SI/X4增強(qiáng)，可能降低CCR5 wt/D32這一宿主因素的有利作用；②在本研究中，病毒學(xué)反應(yīng)與HAART方案（PI方案或各種方案）無關(guān)，與先前文獻(xiàn)不一致[24]，該文獻(xiàn)指出PI方案聯(lián)系著更高的病毒學(xué)應(yīng)答。

雖然樣本量偏小及回顧性的meta分析可能使本研究存在一定限制，但本研究卻首次針對CCR5-D32雜合性對HIV-1感染者HAART病毒學(xué)反應(yīng)與免疫學(xué)反應(yīng)影響進(jìn)行meta分析，且根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)，納入文獻(xiàn)的質(zhì)量得到了保證。數(shù)據(jù)提取、分析的準(zhǔn)確性也得到了保證。敏感性分析與出版偏倚評價保證了統(tǒng)計結(jié)果的可靠性。

綜上所述，CCR5-D32這一宿主因素是HAART后病毒學(xué)應(yīng)答的有利預(yù)測因子。CCR5-D32這一宿主因素與HAART后免疫學(xué)應(yīng)答也有一定聯(lián)系，但需更多文獻(xiàn)加以證實。

參考文獻(xiàn)：

[1] Mocroft A,Devereux H,Kinloch-de-loes S,et al.Immunological,virological and clinical response to highly active antiretroviral therapy treatment regimens in a complete clinic population[J].Royal Free Centre for HIV Medicine AIDS,2000,14(11):1545-1552.

[2] Deng H,Liur,Ellmeier W,et al.Identification of a major co-receptor for primary isolates of HIV-1[J].Nature,1996,381 (6584):661–666.

[3] Huang Y,Paxton WA,Wolinsky SM,et al.The role of a mutant CCR5 allele in HIV-1 transmission and disease progression[J].Nat Med,1996,2(11):1240-1243.

[4] Liu R,Paxton WA,Choe S,et al.Homozygous defect in HIV-1 coreceptor accounts for resistance of some multiply-exposed indi-viduals to HIV-1 infection[J].Cell,1996,86(3):367-377.

[5] Benkirane M,Jin DY,Chun RF,et al.Mechanism of transdominant inhibition of CCR5-mediated HIV-1 infection by ccr5 delta 32[J].J Biol Chem,1997,272(49):30603-30606.

[6] Meyer L,Magierowska M,Huber JB,et al.Early protective effect of CCR-5 delta 32 heterozygosity on HIV-1 disease progression:relationship with viral load.The SEROCO study group[J].AIDS,1997,11(11):73-78.

[7] Stewart GJ,Ashton LJ,Biti RA,et al.Increased frequency of CCR-5 delta 32 heterozygotes among long-term non-progressors with HIV-1 infection[J].The Australian Long-Term Non-Progressor Study Group.AIDS,1997,11(15):1833-1838.

[8] Brumme ZL,Henrick BM,Brumme CJ,et al.Short communication.Association of the CCR5 delta 32 mutation with clinical response and >5-year survival following initiation of first triple antiretroviral regimen[J].Antivir Ther,2005,10(7):849-853.

[9] Laurichesse JJ,Taieb A,Capoulade-Metay C,et al.long-term virological response related to CCR5 Delta32 deletion in HIV-1-infected patients started on highly active antiretroviral therapy[J].HIV Med,2010,11(4):239-244.

[10] Laurichesse JJ,Persoz A,Theodoroui,et al.Improved virological response to highly active antiretroviral therapy in HIV-1-infected patients carrying the CCR5 delta 32 deletion[J].HIV Med,2007,8(4):213-219.

[11] Valdez H,Purvis SF,Lederman MM,et al.Association of the CCR5delta32 mutation with improved response to antiretroviral therapy[J].JAMA,1999,282(8):734.

[12] Guerin S,Meyer L,Theodorou I,et al.CCR5 delta 32 deletion and response to highly active antiretroviral therapy in HIV-1-infected patients[J].AIDS,2000,14(17):2788-2790.

[13] Kasten S,Goldwich A,Schmitt M,et al.Positive influence of the delta 32 CCR5 allele on response to highly active antiretroviral therapy (HAART) in HIV-1 infected patients[J].Eur J Med Res,2000,5(8):323-328.

[14] Bogner JR,Lutz B,Klein HG,et al.Association of highly active antiretroviral therapy failure with chemokine receptor 5 wild type[J].HIV Med,2004,5(4):264-272.

[15] O'brien TR,Mcdermott DH,Ioannidis JP,et al.Effect of chemokine receptor gene polymorphisms on the response to potent antiretroviral therapy[J].AIDS,2000,14(7):821-826.

[16] Bratt G,Karlsson A,Leandersson AC,et al.Treatment history and baseline viral load,but not viral tropism or CCR-5 genotype,influence prolonged antiviral efficacy of highly active antiretroviral treatment[J].AIDS,1998,12(16):2193-2202.

[17] Brumme ZL,Chan KJ,Dong W,et al.CCR5 Delta32 and promoter polymorphisms are not correlated with initial virological or immunological treatment response[J].AIDS,2001,15(17):2259-2266.

[18] Puissant B,Roubinet F,Massip P,et al.Analysis of CCR5,CCR2,CX3CR1,and SDF1 polymorphisms in HIV-positive treated patients:impact on response to HAART and on peripheral T lymphocyte counts[J].AIDS Res Hum Retroviruses,2006,22(2):153-162.

[19] Martinson JJ,Chapman NH,Rees DC,et al.Global distribution of the CCR5 gene 32-basepair deletion[J].Nat Genet,1997,16(1):100-103.

[20] Agrawal L,Lu X,Qingwen J,et al.Role for CCR5 delta 32 protein in resistance to R5,R5X4,and X4 human immunodeficiency virus type 1 in primary CD4+cells[J].J Virol,2004,78(5):2277-2287.

[21] Ramratnam B,Mittler JE,Zhang L,et al.The decay of the latent reservoir of replication-competent HIV-1 is inversely correlated with the extent of residual viral replication during prolonged antiretroviral therapy[J].Nat Med,2000,6(1):82-85.

[22] Wang C,Abdel-mohsen M,Strain MC,et al.Decreased HIV type 1 transcription in CCR5-Δ32 heterozygotes during suppressive antiretroviral therapy[J].J Infect Dis,2014,210(11):1838-1843.

[23] Skrabal K,Trouplin V,Labrosse B,et al.Impact of antiretroviral treatment on the tropism of HIV-1 plasma virus populations[J].AIDS,2003,17(6):809-814.

[24] Wood E,Hogg RS,Yip B,et al.Superior virological response to boosted protease inhibitor-based highly active antiretroviral therapy in an observational treatment programme[J].HIV Med,2007,8(2):80-85.

（張蕾編輯）

Effects of CCR5-D32 heterozygosity on virological and immunological responses to highly-active antiretroviral therapy in HIV-1-infected patients:a meta-analysis

Ying Wen,Bao-cheng Deng,Pei Liu
(Department of Infectious Diseases,the First Affiliated Hospital,China Medical University,Shenyang,Liaoning 110001,China)

Abstract:Objective To evaluate the effect of C-C chemokine receptor 5-D32 (CCR5-D32) heterozygosity of HIV-1-infected patients on the virological and immunological responses to highly-active antiretroviral therapy (HAART).Methods A literature search on the articles published before October 1,2015 was conducted in the PubMed,Web of Science and China Biology Medicine databases.Results Eleven studies on virological response and only four studies on immunological response were eligible for inclusion.Populations with CCR5-D32 heterozygosity had stronger virologicaland immunological1.04-1.31；P = 0.009) responses to HAART.There was a significant association between CCR5-D32 heterozygosity and stronger virological response in studies that involved at least one year of observation and a high threshold of detection for HIV RNA.Due to an insufficient number of eligible studies,further subgroup analyses of immunological responses could not be performed.Conclusions Stronger virological response has been found in the populations with CCR5 -D32 heterozygosity.The association of CCR5 -D32 heterozygosity with immunological response still needs further confirmation.

Keywords:CCR5-D32 heterozygosity; highly-active antiretroviral therapy; virological response; immunological response; meta-analysis

[通信作者]聞穎，E-mail：wenying666466@163.com；Tel：15840210638

收稿日期：2015-11-17

文章編號：1005-8982（2016）06-0069-06

DOI:10.3969/j.issn.1005-8982.2016.06.015

中圖分類號：R512.91

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B