阮偉萬(wàn) 陳前進(jìn)

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破壁前后的松花粉質(zhì)量鑒別研究

阮偉萬(wàn) 陳前進(jìn)

【摘要】目的 對(duì)破壁前后的松花粉進(jìn)行質(zhì)量鑒別研究。方法 采用物理方法觀察對(duì)比破壁前后的松花粉顏色、氣味、味道、狀態(tài)以及用電鏡掃描顯微狀況，采用化學(xué)方法檢測(cè)破壁前后松花粉的總黃酮、總多糖。結(jié)果 用物理法水試及顯微鑒別對(duì)比兩者明顯特征，可以區(qū)別破壁前后的產(chǎn)品，化學(xué)方法檢測(cè)結(jié)果也能明顯區(qū)別破壁前后的產(chǎn)品質(zhì)量。結(jié)論 普通消費(fèi)者可用簡(jiǎn)單的水試法快速鑒別破壁前后的松花粉，而對(duì)于專(zhuān)業(yè)的研究人士則可以通過(guò)顯微及化學(xué)成分測(cè)定法進(jìn)行鑒別，更具科學(xué)性。

【關(guān)鍵詞】松花粉；質(zhì)量鑒別；破壁；黃酮；多糖；顯微鑒別

廣東省臺(tái)山市中醫(yī)院，廣東江門(mén) 529200

松花粉為松科植物馬尾松、油松或同屬數(shù)種植物的干燥花粉。春季花剛開(kāi)時(shí)，采摘花穗，曬干，收集花粉，除去雜質(zhì)所得。松花粉營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)非常豐富，含有人類(lèi)所需的各種氨基酸、維生素物質(zhì)以及豐富的多糖類(lèi)、黃酮化合物、甾醇等，同時(shí)，也是目前市場(chǎng)上唯一可以食用的非蜂源性天然花粉。與其他種類(lèi)來(lái)源的植物花粉相比，松花粉口感好，氣味也有淡淡的松子香味，且易于接受。松花粉從幾千年開(kāi)始，就是人類(lèi)最喜愛(ài)的、老少皆宜的益智長(zhǎng)壽型特殊營(yíng)養(yǎng)食品之一。中國(guó)衛(wèi)生管理部門(mén)在早期也確認(rèn)了松花粉為新資源食品。據(jù)相關(guān)研究報(bào)道[1]，松花粉在增強(qiáng)人體抵抗力、改善心腦血管疾病、保護(hù)肝臟、促進(jìn)人體皮膚新陳代謝、抗衰老、抗氧化等方面具有顯著的效果。因此，松花粉的市場(chǎng)需求逐年增大。但是由于松花粉特有的結(jié)構(gòu)，功效營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被包含在堅(jiān)實(shí)的細(xì)胞壁內(nèi)，要充分利用松花粉的所有營(yíng)養(yǎng)成分，必須將其外壁破壞。由于破壁需要特殊的設(shè)備以及破壁帶來(lái)成本的增加，某些不法廠商因此常常以未破壁產(chǎn)品冒充已破壁產(chǎn)品，欺騙消費(fèi)者。對(duì)于普通消費(fèi)者來(lái)說(shuō)，在僅有的非專(zhuān)業(yè)知識(shí)情況下，如何準(zhǔn)確判別兩者，非常重要。筆者從宏觀、微觀方法及特征成分含量檢測(cè)對(duì)破壁前后的松花粉進(jìn)行鑒別研究，主要目的為普通消費(fèi)者和中藥專(zhuān)業(yè)鑒定工作者提供一種更全面的鑒別方法。

1 儀器與試劑

1.1 試劑 松花粉，購(gòu)自廣州中藥飲片廠。蘆?。褐袊?guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100080-201409；D-無(wú)水葡萄糖：中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110833-201205；水合氯醛，苯酚、硫酸、亞硝酸鈉、硝酸鋁等均為分析純。

1.2 儀器 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)：島津UV-1240；天平（精確度為0.1 mg）；生物顯微鏡，帶掃描功能：奧林巴斯CX41RF；BRAND移液槍。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 物理鑒別[2]外形：取樣品，平攤于白色底板上目測(cè)觀察；顏色：取樣品，平攤于白色底板上目測(cè)觀察；性狀：將花粉團(tuán)在手里輕輕搓；氣味：取樣品，鼻聞口嘗；水試：取樣品，輕輕放入一杯純水中，觀察記錄現(xiàn)象。

2.2 顯微鑒別 樣品加水，配制成1:100的溶液，于漩渦混合器上振蕩均勻。取干凈載玻片，用移液槍吸取少量液體，加1滴10%的水合氯醛于酒精燈上加熱透化，然后加甘油適量蓋上蓋玻片，置光學(xué)顯微鏡下觀察。

2.3 化學(xué)鑒別

2.3.1 多糖測(cè)定[3]標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：分別精密量取0.1 mg/ml的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品溶液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9 ml，置10 ml具塞試管中，用純水補(bǔ)足至余量2.0 ml。然后分別加水補(bǔ)至2.0 ml，精密加入5%苯酚溶液l ml（現(xiàn)配），搖勻，迅速精密加入98%濃硫酸5 ml，搖勻，顯色放置10 min，于40 ℃水浴中保溫15 min，取出后置冰水中冷卻至室溫，以相應(yīng)的試劑為空白對(duì)照，按照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在490 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.3.2 樣品的測(cè)定 取待測(cè)樣品1.0 g，精密稱(chēng)定，加乙醚100 ml，加熱回流1 h，靜置，放冷，小心棄去乙醚液，殘?jiān)盟∩蠐]盡乙醚。加入100 ml 80%乙醇，100 ℃加熱回流1 h，離心過(guò)濾，離心沉淀與濾渣及過(guò)濾器用熱80%乙醇30 ml分次洗滌，最終藥渣連同濾紙置250 ml圓燒瓶中，加入純水150 ml，100 ℃回流提取2 h。提取完后濾過(guò)，用少量熱水洗滌過(guò)濾器，合并濾液與洗液，放冷，用純水定容至250 ml，搖勻后適量稀釋?zhuān)芰咳∠♂屢簂 ml，置具塞試管中，加水1.0 ml，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含無(wú)水葡萄糖的重量（mg)，計(jì)算，即得。

2.3.3 黃酮的測(cè)定[4]標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取0.2 mg/ml的蘆丁對(duì)照品溶液0、1、2、3、4、5、6 ml，分別置于25 ml容量瓶中，各加水至6.0 ml，加5%亞硝酸鈉溶液1 ml，混勻，放置6 min后再各加10%硝酸鋁溶液1 ml，搖勻，放置6 min加1%氫氧化鈉試液10 ml，最后加水至刻度，搖勻，放置15 min。于510 nm處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度（mg/ml）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求出標(biāo)準(zhǔn)線性方程。

樣品黃酮含量的測(cè)定：精密量取1.0 ml樣品溶液（若試樣中的黃酮濃度高則應(yīng)適當(dāng)稀釋再取1.0 ml用于顯色測(cè)定），置25 ml容量瓶中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下方法，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含蘆丁的重量（μg），計(jì)算，即得。

3 結(jié)果

3.1 物理鑒別 外觀性狀對(duì)比結(jié)果見(jiàn)表1。破壁前顏色淺黃色，破壁后淺較深，偏褐色。半年期存放的與剛破壁后的樣品，顏色無(wú)區(qū)別。破壁前樣品為淺黃色細(xì)粉末，手搓有滑膩感，較為松散，在白板上流動(dòng)性比較好；而破壁后的松花粉稍有黏附性，易吸潮，不能飛散。在氣味方面，破壁前樣品有松花粉特有的香味，和松子的味道比較相似。但是，自然條件下存放半年以上產(chǎn)品稍有酸敗味；破壁后產(chǎn)品氣味較濃，破壁后半年以上產(chǎn)品酸敗味較濃烈。水試對(duì)比結(jié)果見(jiàn)表1。破壁產(chǎn)品懸浮水中，攪拌后現(xiàn)象更明顯，部分沉于水底。破壁前產(chǎn)品則飄浮水上面、攪拌懸浮很少、停止攪拌后立即浮于水面。

表1 物理鑒別結(jié)果

3.2 顯微鑒別結(jié)果 結(jié)果顯示，破壁前后在放大500倍情況下，有非常明顯的區(qū)別。未破壁的自然松花粉是類(lèi)圓形，細(xì)胞體兩端各上附著1個(gè)膨大氣囊。經(jīng)破壁后的樣品，只可見(jiàn)細(xì)胞碎片（圖1～3）。

圖1 破壁前（500倍）

圖2 破壁前（1000倍）

圖3 破壁后（500倍）

3.3 化學(xué)鑒別 從表2可以看出，破壁前后多糖及黃酮含量差別明顯。同樣的產(chǎn)品，在不同存放時(shí)期內(nèi)，含量會(huì)稍有變化，主要是由于產(chǎn)品暴露在空氣中時(shí)，有效成分發(fā)生氧化分解反應(yīng)，含量隨之而降低。

表2 黃酮、多糖檢測(cè)結(jié)果

4 討論

因?yàn)槠票谥皇怯梦锢砘蚧瘜W(xué)破壞細(xì)胞壁的過(guò)程，對(duì)其他成分則無(wú)影響，所以破壁前后的的松花粉在營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)種類(lèi)是一致的，但是在人體生物利用度上有所區(qū)別。有關(guān)松花粉的研究揭示，天然松花粉進(jìn)行破壁處理后，能使其中的營(yíng)養(yǎng)成分得以充分、快速釋放。所以，破壁后的松花粉營(yíng)養(yǎng)吸收更加快捷，吸收率更高。破壁松花粉由于細(xì)胞壁被完全破碎，細(xì)胞內(nèi)部的有效成分多糖黃酮等暴露，其顏色較細(xì)胞壁表面深，所以破壁粉的顏色偏淡黃褐色。

由于顏色、氣味、外觀主觀能動(dòng)性大，專(zhuān)業(yè)人士在沒(méi)有對(duì)比的情況下，很難做出明確的判斷。但是，用水試法鑒別：破壁后的松花粉放入水中攪拌后基本懸浮在水中；而沒(méi)有破壁的松花粉放入水中攪拌后靜置1～5 min后會(huì)漂浮在水面上，在水的中間及底部基本沒(méi)有花粉。根據(jù)這一特點(diǎn)，普通消費(fèi)者可輕易的鑒別出破壁與否。造成這種現(xiàn)象發(fā)生的主要原因是破壁同時(shí)將松花粉細(xì)胞兩端的氣囊破碎緣故。而專(zhuān)業(yè)的研究人士則可以通過(guò)檢測(cè)有效成分或顯微鑒別，來(lái)區(qū)分鑒別兩者。

松花粉中活性多糖是近年來(lái)的研究重點(diǎn)，其主要具有抗腫瘤、抗氧化等功能。松花粉中黃酮類(lèi)化合物同樣含量豐富，主要為黃酮、黃酮醇類(lèi)、二氫黃酮醇類(lèi)和少量黃院醇類(lèi)，此類(lèi)化合物具有抗炎、抗氧化等作用。所以，通過(guò)檢測(cè)這兩者成分，可以更確切了解破壁前后的產(chǎn)品質(zhì)量。

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作者簡(jiǎn)介：阮偉萬(wàn)（1980.10-），主管中藥師。E-mail：rww8010@163.com

【中圖分類(lèi)號(hào)】R927.11

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.03.004