丁明劍，楊文華，白楊，崔國(guó)忠，戴殿祿

(滄州市中心醫(yī)院，河北滄州061000)

三陰型乳腺癌患者癌組織及血清轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1檢測(cè)的臨床意義

丁明劍，楊文華，白楊，崔國(guó)忠，戴殿祿

(滄州市中心醫(yī)院，河北滄州061000)

目的 探討轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)在三陰型乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 選擇三陰型乳腺癌患者80例、非三陰型乳腺癌患者40例，采用ELISA法檢測(cè)血清TGF-β1水平，采用免疫組化法檢測(cè)乳腺癌組織TGF-β1表達(dá)，分析TGF-β1表達(dá)與三陰型乳腺癌患者臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果 三陰型及非三陰型乳腺癌患者血清TGF-β1水平分別為(108.43±10.55)、(84.09±11.52)ng/L，二者比較P<0.05。三陰型乳腺癌患者中TGF-β1高表達(dá)42例、低表達(dá)38例，TGF-β1高表達(dá)者較低表達(dá)者腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高、組織學(xué)分級(jí)程度低(P均<0.01)，二者年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、腫瘤直徑、乳腺癌家族史比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；TGF-β1高表達(dá)者5年無(wú)瘤生存率為54.76%(23/42)、低表達(dá)者為71.05%(27/38)，二者比較P<0.05。結(jié)論 三陰型乳腺癌患者TGF-β1高表達(dá)，TGF-β1的表達(dá)變化與腫瘤組織學(xué)分級(jí)及腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，并影響患者預(yù)后。

三陰型乳腺癌；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1；無(wú)瘤生存率

三陰型乳腺癌是臨床常見(jiàn)的一種惡性腫瘤，患者發(fā)病年齡低、復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)高，由于患者雌、孕激素受體及Her-2基因的表達(dá)均為陰性，臨床上尚無(wú)針對(duì)性的內(nèi)分泌治療或靶向藥物治療方法[1]。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)是一種具有多種生物活性的多肽類細(xì)胞因子，在惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮雙重作用，在惡性腫瘤早期，TGF-β1誘導(dǎo)上皮細(xì)胞凋亡而產(chǎn)生抑癌作用；隨著腫瘤的發(fā)展，腫瘤細(xì)胞逃逸TGF-β1的抑制作用，同時(shí)分泌大量具有活性的TGF-β1，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移[2～5]。研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1高表達(dá)與胃癌[6]、肺癌[7]、結(jié)腸癌[8]、乳腺癌[9,10]等多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。本研究探討TGF-β1在三陰型乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2003年6月～2008年6月滄州市中心醫(yī)院經(jīng)病理證實(shí)的三陰型乳腺癌患者80例，均為女性，年齡26～69歲、平均48.2歲，均無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，有腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移49例，有乳腺癌家族史6例，組織學(xué)分級(jí)Ⅰ～Ⅱ級(jí)42例、Ⅲ級(jí)38例。80例患者均行乳腺癌改良根治術(shù)治療，術(shù)后均給予蒽環(huán)類及紫杉醇藥物為主的化療6～8個(gè)周期，腋下淋巴結(jié)≥3枚者(30例)行局部放射治療。同時(shí)選取40例非三陰型乳腺癌患者，均為女性，年齡32～67歲、平均49.2歲，均無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，治療方法同三陰型乳腺癌患者。兩組年齡、病情及治療方法等均具有可比性。

1.2 血清TGF-β1水平檢測(cè) 手術(shù)治療前分別取三陰型乳腺癌及非三陰型乳腺癌患者晨起空腹靜脈血5 mL，離心提取血清，采用Germany M5000酶聯(lián)免疫分析儀(ELISA法)檢測(cè)血清TGF-β1，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血清TGF-β1水平。

1.3 乳腺癌組織TGF-β1表達(dá)檢測(cè) 兩組術(shù)中均留取乳腺癌組織，10%甲醛固定，4 μm厚切片。按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行免疫組化染色。免疫組化試劑盒購(gòu)自Genzyme公司。組織標(biāo)本經(jīng)牛奶封閉，4 ℃靜置2 h，加入一抗TGF-β1(1∶2 000)于4 ℃靜置24 h，加入羊抗兔二抗(1∶25)室溫靜置1 h。采用不加一抗的切片作為陰性對(duì)照，已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照。TGF-β1陽(yáng)性染色主要定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕色彌漫或顆粒狀。無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為-，陽(yáng)性細(xì)胞>0～<25%為+、25%～75%為++、>75%為+++。-、+為低表達(dá)，++、+++為高表達(dá)。比較三陰型乳腺癌TGF-β1低表達(dá)者與高表達(dá)者臨床病理參數(shù)。

1.4 隨訪 三陰型乳腺癌患者均隨訪至2013年6月，采用電話隨訪與門診復(fù)查相結(jié)合的方式，統(tǒng)計(jì)患者5年無(wú)瘤生存率，比較TGF-β1低表達(dá)者與高表達(dá)者5年無(wú)瘤生存率。

2 結(jié)果

2.1 血清TGF-β1水平 三陰型乳腺癌患者血清TGF-β1水平為(108.43±10.55)ng/L，非三陰型乳腺癌患者為(84.09 ±11.52)ng/L，二者比較P<0.05。

2.2 三陰型乳腺癌組織TGF-β1表達(dá)及其與患者臨床病理參數(shù)間的關(guān)系 三陰型乳腺癌組織TGF-β1高表達(dá)42例、低表達(dá)38例，TGF-β1低表達(dá)者與高表達(dá)者腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)，二者年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、腫瘤直徑、乳腺癌家族史比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 組織三陰型乳腺癌TGF-β1表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

2.3 三陰型乳腺癌TGF-β1高表達(dá)者與低表達(dá)者5年無(wú)瘤生存率 80例三陰型乳腺癌患者均完成為期63～87個(gè)月的隨訪，中位隨訪時(shí)間為68個(gè)月，TGF-β1高表達(dá)者5年無(wú)瘤生存率為54.76%(23/42)、低表達(dá)者為71.05%(27/38)，二者比較P<0.05。

3 討論

三陰型乳腺癌指雌孕激素受體和原癌基因Her-2均為陰性的乳腺癌，占所有乳腺癌病理類型的10.0%～20.8%，具有較高的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，預(yù)后較其他類型乳腺癌差，由于其激素受體均陰性，臨床尚無(wú)有效的分子靶向治療藥物[1]。TGF-β1是由兩個(gè)結(jié)構(gòu)相同或相似的亞單位借二硫鍵連接而形成的雙體結(jié)構(gòu)，屬于調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的TGF-β超家族。TGF-β1信號(hào)通路傳導(dǎo)在組織細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、免疫調(diào)節(jié)、炎癥和損傷修復(fù)等方面發(fā)揮重要作用[11]。TGF-β1信號(hào)通路失衡或發(fā)生改變可導(dǎo)致多種癌基因突變，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分泌大量有活性的TGF-β1，改變腫瘤細(xì)胞外微環(huán)境，使腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)(如糖蛋白、黏蛋白)相互作用，通過(guò)腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞改變上皮細(xì)胞表型，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)釋放，促進(jìn)血管生成，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤發(fā)生、發(fā)展；抑制機(jī)體內(nèi)樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)、細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)、NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞，抑制IL-2受體及其通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移[12]。

本研究中三陰型乳腺癌患者血清TGF-β1水平顯著高于非三陰型乳腺癌患者，提示TGF-β1高表達(dá)可能是三陰型乳腺癌發(fā)生的促進(jìn)因素，與Bhola等[13]研究結(jié)果一致。本研究中組織學(xué)分級(jí)Ⅲ級(jí)、發(fā)生腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的三陰型乳腺癌組織中TGF-β1高表達(dá)例數(shù)分別多于組織學(xué)分級(jí)Ⅰ～Ⅱ級(jí)及無(wú)腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，與Lang等[10]研究結(jié)果一致。Bao等[14]研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織中TGF-β1陽(yáng)性表達(dá)率愈高，其腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的數(shù)目愈多，無(wú)瘤生存時(shí)間愈短。上述結(jié)果提示，TGF-β1表達(dá)增加促進(jìn)腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移。正常組織細(xì)胞中依賴于Smad 的TGF-β1信號(hào)傳導(dǎo)通路與Smad非依賴性的TGF-β1信號(hào)傳導(dǎo)通路處于平衡狀態(tài)，兩者可以相互調(diào)節(jié)，但腫瘤細(xì)胞中這種平衡被破壞[12]。Lang等[10]發(fā)現(xiàn)，TGF-β1通過(guò)對(duì)uPA/PAI-1的活化轉(zhuǎn)移從而參與乳腺癌的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移；也有研究證實(shí)，TGF-β1介導(dǎo)SMAD3/SMAD4信號(hào)傳導(dǎo)通路參與腫瘤的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移[15]。本研究中TGF-β1高表達(dá)的三陰型乳腺癌患者5年無(wú)瘤生存率低于低表達(dá)者，與文獻(xiàn)報(bào)道[16,17]一致；提示三陰型乳腺癌組織中TGF-β1表達(dá)情況可作為判斷患者預(yù)后的指標(biāo)之一。三陰性乳腺癌組織中TGF-β1表達(dá)量越高，其信號(hào)通路改變?cè)矫黠@，腫瘤惡性程度越高，越容易出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，從而影響患者預(yù)后。但是，目前TGF-β1表達(dá)上調(diào)在三陰型乳腺癌浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過(guò)程中的分子作用機(jī)制尚不明確。

總之，三陰型乳腺癌組織TGF-β1高表達(dá)，TGF-β1的表達(dá)變化與腫瘤組織學(xué)分級(jí)及腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，并影響患者預(yù)后，但其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

[1] Kumar P, Aggarwal R. An overview of triple-negative breast cancer[J]. Expert Opin Pharmacother, 2015,16(7):983-998.

[2] Rosman DS, Phukan S, Huang CC, et al. TGFBR1*6A enhances the migration and invasion of MCF-7 breast cancer cells through RhoA activation[J]. Cancer Res, 2008,68(5):1319-1328

[3]Yang YN, Pan XC, Lei WW, et al. Regulation of transforming growth factor-β1-induced apoptosis and epithelial-to-mesenchymal transition by protein kinase a and signatl Transducers and activators of Ttranscription 3[J]. Cancer Res, 2006,66(17):8617-8624

[4] Bierie B, Moses HL. Gain or loss of TGFbeta signaling in mammary carcinoma cells can promote metastasis[J]. Cell Cycle, 2009,8(20):3319-3327.

[5] Nagaraj NS, Datta PK. Targeting the transforming growth factor-beta signaling pathway in human cancer[J]. Expert Opin Investig Drugs, 2010,19(1):77-91.

[6] 沈衛(wèi)東,劉鵬飛,劉兵團(tuán),等.TGF-β1和 Smad2在胃癌中的表達(dá)及意義[J].世界華人消化雜志,2012,20(14):1238-1241.

[7] Minamiya Y, Miura M, Hinai Y, et al. Transforming growth factor-β129T>C genetic polymorphism is associated with lymph node metastasis in patients with adenocarcinoma of the lung[J]. Tumour Biol, 2010,31(5):437-441.

[8] 周瑞,丁明劍,熊斌.轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1型受體多態(tài)性在結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲遷移中的作用[J].中華臨床醫(yī)師雜志(電子版),2012,6(22):7200-7204.

[9] Bhola NE, Balko JM, Dugger TC, et al. TGF-β inhibition enhances chemotherapy action against triple-negative breast cancer[J]. J Clin Invest, 2013,123(3):1348-1358.

[10] Lang DS, Marwitz S, Heilenk?tter U, et al. Transforming growth factor-beta signaling leads to uPA/PAI-1 activation and metastasis: a study on human breast cancer tissues[J]. Pathol Oncol Res, 2014,20(3):727-732.

[11] Roberts AB, Wakefield LM. The two faces of transforming growth factor in carcinogenesis[J]. PNAS, 2003,100(15):8621-8623.

[12] Jakowlew SB. Transforming growth factor-β in cancer and metastasis[J]. Cancer Metastasis Rev, 2006,25(3):435-457.

[13] Bhola NE, Balko JM, Dugger TC, et al. TGF-β inhibition enhances chemotherapy action against triple-negative breast cancer[J]. J Clin Invest, 2013,123(3):1348-1358.

[14] Bao J, Wu ZS, Qi Y, et al. Expression of TGF-beta1 and the mechanism of invasiveness and metastasis induced by TGF-beta1 in breast cancer[J]. Zhonghua Zhong Liu Za Zhi, 2009,31(9):679-828.

[15] Xue J, Lin X, Chiu WT, et al. Sustained activation of SMAD3/SMAD4 by FOXM1 promotes TGF-β-dependent cancer metastasis[J]. J Clin Invest, 2014,124(2):564-579.

[16] Buck MB, Fritz P, Dippon J, et al. Prognostic significance of transforming growth factor receptor Ⅱ in estrogen receptor-negative breast cancer patients[J]. Clin Cancer Res, 2004,10 (2):491-498.

[17] 高炳玉,劉玉,夏立平,等.三陰性乳腺癌和非三陰性乳腺癌臨床特征及預(yù)后的比較分析[J].腫瘤防治研究,2013,40(8):786-788.

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.28.020

R737.9

B

1002-266X(2016)28-0058-03

2015-11-03)