林玉玲，金文波，黃文平，李杰玉(南陽市中心醫(yī)院，河南南陽473000)

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A2BP1基因內(nèi)含子1單核苷酸多態(tài)性與肥胖的相關(guān)性分析

林玉玲，金文波，黃文平，李杰玉(南陽市中心醫(yī)院，河南南陽473000)

摘要：目的探討共濟(jì)失調(diào)蛋白2結(jié)合蛋白1(A2BP1)基因內(nèi)含子1單核苷酸多態(tài)性(SNPs)與肥胖的關(guān)系。方法選擇體檢者765例，其中BMI≥24 kg/m2 169例(觀察組)、BMI 18.5～24 kg/m2 596例(對照組)。經(jīng)肘靜脈采集外周血2 mL，提取外周血白細(xì)胞基因組DNA，采用TaqMan探針技術(shù)檢測A2BP1基因內(nèi)含子1中rs10500331、rs12924838、rs11640735及rs1548842的基因型，比較兩組等位基因與等位基因頻率差異。結(jié)果觀察組rs11640735位點A等位基因、AA基因型頻率均高于對照組(P均<0.05)，A等位基因相對于G等位基因的優(yōu)勢比(OR)為1.37(95%CI為1.05～1.80)。觀察組rs1548842位點C等位基因、CC基因型頻率均低于對照組(P均<0.05)，C等位基因相對于A等位基因的OR為0.76(95%CI為0.60～0.98)。兩組rs10500331、rs12924838位點的基因型和等位基因型頻率分布差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論A2BP1基因內(nèi)含子1中SNPs位點rs11640735、rs1548842是肥胖的易感基因。

關(guān)鍵詞：肥胖；共濟(jì)失調(diào)蛋白2結(jié)合蛋白1；單核苷酸多態(tài)性；易感基因

肥胖與2型糖尿病、心血管疾病、代謝性疾病及腫瘤等高度相關(guān)[1]。我國居民超重、肥胖的發(fā)生率為23.2%[2]，已成為導(dǎo)致多種疾病發(fā)病率和病死率升高的危險因素。研究表明，肥胖主要受遺傳因素影響，遺傳率為65%～80%[3]。肥胖易感基因是目前發(fā)現(xiàn)的與肥胖關(guān)系最為密切的基因，其功能喪失后會導(dǎo)致發(fā)育遲緩、消瘦、代謝率增高和貪食等。相關(guān)研究證實，易感基因單核甘酸多態(tài)性與肥胖、心血管相關(guān)疾病(如冠心病、高血壓、代謝綜合征等)及多系統(tǒng)腫瘤的發(fā)病存在相關(guān)性[4]。對印度人群的全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)表明，共濟(jì)失調(diào)蛋白2結(jié)合蛋白1(A2BP1)基因內(nèi)含子1中，其單核苷酸多態(tài)性(SNPs)位點與肥胖有關(guān)，A2BP1基因與食欲及能量平衡調(diào)節(jié)基因間存在相關(guān)性[5]。但中國漢族人群肥胖與A2BP1基因多態(tài)性的關(guān)系尚未見報道。2014年1月～2015年1月，我們采用TaqMan探針技術(shù)檢測了169例超重、肥胖者A2BP1基因內(nèi)含子1內(nèi)SNPs位點的多態(tài)性，分析其與超重、肥胖的相關(guān)性。

1資料與方法

1.1臨床資料選擇在我院體檢的受檢者765例，其中男380例、女385例，年齡23～62歲。根據(jù)衛(wèi)生部《中國成人超重和肥胖癥預(yù)防控制指南》的推薦標(biāo)準(zhǔn)[6]，根據(jù)BMI分為觀察組169例(BMI≥24 kg/m2)、對照組596例(BMI 18.5～24 kg/m2)。受試者均為中國漢族人，排除合并近期感染、嚴(yán)重肝腎疾病、腫瘤及內(nèi)分泌功能障礙者。本研究符合人體試驗委員會制定的倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，并取得受試者的知情同意。

1.2基因組DNA提取經(jīng)肘靜脈采集受試者外周血2 mL，肝素鈉抗凝，使用全血DNA提取試劑盒(天根生化科技有限公司)提取外周血白細(xì)胞基因組DNA。在紫外分光光度計下定量，DNA純度A260/A280為1.8～2.0，然后將樣本DNA稀釋到50 ng/μL進(jìn)行基因分型。

1.3A2BP1基因SNPs檢測采用TaqMan探針技術(shù)檢測。從美國國立生物技術(shù)信息中心(NCBI)的SNPs數(shù)據(jù)庫中找出位于A2BP1基因內(nèi)含子1中的標(biāo)簽SNPs位點，包括rs10500331、rs12924838、rs11640735及rs1548842，并確定基因的分型。TaqMan探針由美國ABI公司合成，使用ABI V7熒光定量PCR儀進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，根據(jù)熒光類型確定樣本在4個SNPs位點的基因型。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件，等位基因與等位基因頻率差異比較采用χ2檢驗，用Haploview4.2軟件對4個SNPs位點進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1A2BP1基因內(nèi)含子1基因型及等位基因分布對對照組A2BP1基因內(nèi)含子1中rs10500331、rs12924838、rs11640735、rs1548842位點行Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗，各基因型的期望值與觀察值之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P值分別為0.17、0.47、0.47和0.98)，因此各基因型和等位基因的分布具有可靠性和群體代表性。

2.2兩組A2BP1基因內(nèi)含子1中各位點SNPs比較

2.2.1rs11640735位點SNPs比較觀察組rs11640735位點A等位基因、AA基因型頻率均高于對照組(P<0.05)。A等位基因相對于G等位基因的優(yōu)勢比(OR)為1.37(95%CI為1.05～1.80)。見表1。

表1　　　　兩組rs11640735位點各基因型與等位

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.2.2rs1548842位點SNPs比較觀察組rs1548842位點C等位基因、CC基因型頻率均低于對照組(P均<0.05)。C等位基因相對于A等位基因的OR為0.76(95%CI為0.60～0.98)。見表2。

表2　　　　兩組rs1548842位點各基因型與等位

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.2.3rs10500331、rs12924838位點SNPs比較兩組rs10500331、rs12924838位點的基因型和等位基因型頻率分布差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。見表3、4。

表3　　　　兩組rs10500331位點各基因型與等位

表4　　　　兩組rs12924838位點各基因型與等位

3討論

肥胖是導(dǎo)致多種疾病的危險因素，在糖尿病、血脂代謝異常及心血管疾病的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用。肥胖可造成胰島素過度分泌，使進(jìn)食后胰島素的分泌無法再隨血糖升高而提高，容易形成餐后血糖升高的現(xiàn)象。肥胖的發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚，目前認(rèn)為除環(huán)境與飲食習(xí)慣外，遺傳因素是一個重要因素。有研究發(fā)現(xiàn)，黑素皮質(zhì)素受體4基因(MC4R)、胰島素誘導(dǎo)基因等與超重或肥胖有關(guān)[7,8]。

A2BP1是由Shibata等發(fā)現(xiàn)的一個核糖核蛋白，主要在肝臟、脂肪和骨骼肌中表達(dá)，可參與多種脂代謝相關(guān)酶的調(diào)節(jié)，如脂蛋白脂肪酶(LPL)等[9]。A2BP1在RNA結(jié)合蛋白家族中結(jié)構(gòu)高度保守，通過與GCAUG五個堿基結(jié)合，調(diào)節(jié)組織特異性的選擇性剪接，從而控制轉(zhuǎn)錄后調(diào)控[10]。在下丘腦中，胰島素受體(INSR)的胰島素信號系統(tǒng)通過POMC-MC4R及NPY-Y1R信號通路控制食物的攝入及能量的平衡，如果中樞神經(jīng)系統(tǒng)對這兩條信號通路的敏感性降低，將會導(dǎo)致肥胖的發(fā)生[11]。A2BP1含有與INSR相同的GCAUG序列，A2BP1下調(diào)時可以影響INSR基因的選擇性剪接作用，從而導(dǎo)致中樞性肥胖的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)，對小鼠胚胎下丘腦細(xì)胞系A(chǔ)2BP1基因進(jìn)行干擾后，INSR、MC4R表達(dá)量也顯著降低，影響攝入及能量的平衡，導(dǎo)致肥胖發(fā)生。此外，A2BP1能與Ataxin-2的羧基末端結(jié)合，而敲除小鼠Ataxin-2基因后，小鼠發(fā)生成年型肥胖癥，提示A2BP1與肥胖癥有關(guān)[12]。另外，A2BP1也是影響血清游離脂肪酸的候選基因，與肥胖的發(fā)生有密切關(guān)系[13]。由此可知，A2BP1導(dǎo)致肥胖的發(fā)生可能是通過對MC4R相關(guān)蛋白及INSR轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控作用，影響POMC-MC4R信號通路。

對印度人群的GWAS研究發(fā)現(xiàn)，A2BP1基因SNPs位點rs10500331、rs12924838與BMI顯著相關(guān)[14]，但在法國、德國人群中未得到驗證。我國在此方面尚未有相關(guān)的研究報道。 本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組A2BP1基因內(nèi)含子1內(nèi)rs11640735位點A等位基因、AA基因型頻率均高于對照組，rs1548842位點C等位基因、CC基因型頻率均低于對照組，提示這兩個位點是中國漢族人群肥胖癥發(fā)生的易感位點。本研究發(fā)現(xiàn)，兩組A2BP1基因內(nèi)含子1內(nèi)rs10500331、rs12924838位點的基因型和等位基因型頻率分布差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，這與對印度人群研究結(jié)果不同，但是與歐洲人群一致[14]。以上結(jié)果機(jī)制未明，尚需深入研究。

綜上所述，A2BP1基因內(nèi)含子1中SNPs位點rs11640735、rs1548842是中國漢族人群肥胖的易感基因，與中國漢族人群的超重、肥胖相關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

[1] Haslam DW, James WP. Obesity[J]. Lancet, 2005,366(9492):1197-1209.

[2] 武陽豐,馬冠生,胡永華,等. 中國居民的超重和肥胖流行現(xiàn)狀[J]. 中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志, 2005,39(5):316-320.

[3] Malis C, Rasmussen EL, Poulsen P, et al. Total and regional fat distribution is strongly influenced by genetic factors in young and elderly twins[J]. Obes Res, 2005,13(12):2139-2145.

[4] 徐瀟靜,曾慧,肖笛,等.肥胖全基因組關(guān)聯(lián)研究[J].中南大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版,2013,38(1):95-100.

[5] Ma L, Hanson RL, Traurig MT, et al. Evaluation of A2BP1 as an obesity gene[J]. Diabetes,2010,59(11):2837-2845.

[6] 中國肥胖問題工作組.中國成人超重和肥胖癥預(yù)防與控制指南(節(jié)錄) [J].營養(yǎng)學(xué)報,2004,26(1):1-4.

[7] Loos RJ, Lindgren CM, Li S, et al. Common variants near MC4R are associated with fat mass, weight and risk of obesity[J]. Nat Genet, 2008,40(6):768-775.

[8] Connaughton RM, McMorrow AM, McGillicuddy FC, et al. Impact of anti-inflammatory nutrients on obesity-associated metabolic-inflammation from childhood through to adulthood[J]. Proc Nutr Soc, 2016,3(1):1-10.

[9] Dong L,Yan H, Huang X, et al. A2BP1 gene polymorphisms association with olanzapine- induced weight gain[J]. Pharmacol Res, 2015,99:155-161.

[10] Jin Y, Suzuki H, Maegawa S, et al. A vertebrate RNA-binding protein Fox-1 regulates tissue-specific splicing via the pentanucleotide GCAUG[J]. EMBO J,2003, 22(4): 905-912.

[11] Ma L, Hanson RL, Traurig MT, et al. Evaluation of A2BP1 as an obesity gene[J]. Horm Res, 2010,59(11):2837-2845.

[12] Kiehl TR, Nechiporuk A, Figueroa KP, et al. Generation and characterization of Sca2 (ataxin-2) knockout mice[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2006,339(1):17-24.

[13] Su Z, Tsaih SW, Szatkiewicz J, et al. Candidate genes for plasma triglyceride, FFA, and glucose revealed from an intercross between inbred mouse strains NZB/B1NJ and NZW/LacJ[J]. J Lipid Res, 2008,49(7):1500-1510.

[14] Muller YL, Hanson RL, Wiessner G, et al. Assessing FOXO1A as a potential susceptibility locus for type 2 diabetes and obesity in American Indians[J]. Obesity (Silver Spring), 2015,23(10):1960-1965.

(收稿日期：2015-11-08)

中圖分類號：R723.14；Q346.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號：1002-266X(2016)14-0072-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.14.027

通信作者：金文波(E-mail: dr_jinwenbo@163.com)