陳　娥，周　燦*，廖　莎，石金敏

（1.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院藥學(xué)部，湖北十堰442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院，湖北十堰442000）

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不同炮制去心法對(duì)巴戟天耐斯糖含量的影響

陳娥1，周燦1*，廖莎2，石金敏1

（1.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院藥學(xué)部，湖北十堰442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院，湖北十堰442000）

〔摘要〕目的比較不同炮制去心法對(duì)巴戟天耐斯糖含量的影響。方法采用HPLC-ELSD法，色譜柱為Welch AQ-C(18)（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（3∶97）；柱溫為25℃；流速為0.8 mL/min；進(jìn)樣量為10 μL；漂移管溫度為40℃；低溫霧化。結(jié)果采用不同炮制去心法處理后，巴戟天中耐斯糖的含量高低為：潤(rùn)法＞煮法＞清蒸法＞鹽蒸法＞泡后蒸法＞泡法。結(jié)論采用潤(rùn)法去心，巴戟天中耐斯糖損失最少。

〔關(guān)鍵詞〕巴戟天；炮制；耐斯糖；高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器法

巴戟天為茜草科巴戟屬植物巴戟天Morinda officinalis How.的干燥根[1]，與砂仁、益智、檳榔合稱為“四大南藥”。巴戟天所含糖類化合物包括單糖、寡糖和多糖，其中耐斯糖即為寡糖的一種[2]。藥理實(shí)驗(yàn)證明，耐斯糖具有抗抑郁作用[3]。目前可將巴戟天的炮制去心方法總結(jié)為以下6種：潤(rùn)法、煮法、泡后蒸法、泡法、清蒸法和鹽蒸法。本實(shí)驗(yàn)以巴戟天中抗抑郁成分耐斯糖的含量為考察指標(biāo)，探討各炮制去心方法對(duì)耐斯糖含量的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀（G1311A四元泵；G1329A自動(dòng)進(jìn)樣器；G1316A柱溫箱）；SEDERE SEDEX85 ELSD檢測(cè)器；CP2104奧豪斯電子分析天平（奧豪斯儀器（上海）有限公司）；FZ-102型微型植物粉碎機(jī)（天津市泰斯特儀器有限公司）。耐斯糖對(duì)照品（南通飛宇生物科技有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98％，批號(hào)：FY20220603）；水為純化水，甲醇為色譜純；巴戟天（購(gòu)于湖北蘄州中藥材市場(chǎng)，經(jīng)湖北醫(yī)藥學(xué)院藥用植物學(xué)教研室主任陳吉言教授鑒定為茜草科植物巴戟天Morinda officinalis How.的干燥根。

2方法與結(jié)果[4]

2.1樣品的制備

取原藥材約100 g，除去雜質(zhì)，洗凈，照表1中所示方法分別進(jìn)行處理后，趁熱抽去木心，切段，置烘箱內(nèi)80℃干燥2 h，備用。

表1　巴戟天樣品炮制去心方法

2.2色譜條件

色譜柱為Welch AQ-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（3∶97）；柱溫為25℃；流速為0.8 mL/min；進(jìn)樣量為10 μL；漂移管溫度為40℃；低溫霧化。在此條件下測(cè)定耐斯糖對(duì)照品及巴戟天原藥材提取物的色譜圖。見圖1。

圖1　耐斯糖對(duì)照品（a）與巴戟天原藥材提取物（b）色譜圖

2.3溶液的制備

2.3.1供試品溶液的制備取“2.1”項(xiàng)下各樣品（粉碎過三號(hào)篩）0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入流動(dòng)相50 mL，稱定質(zhì)量，沸水浴中加熱30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，放置，取上清液濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.2對(duì)照品溶液的制備取耐斯糖對(duì)照品適量，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加流動(dòng)相使溶解，配置成濃度為0.214 8 mg/mL的溶液，備用。

2.4線性關(guān)系考察

分別精密吸取“2.3.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液10、30 μL，照“2.2”項(xiàng)下條件進(jìn)樣，測(cè)定色譜峰面積。采用外標(biāo)兩點(diǎn)法，以耐斯糖對(duì)照品進(jìn)樣量的自然對(duì)數(shù)值（X）為橫坐標(biāo)，峰面積的自然對(duì)數(shù)值（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為

結(jié)果顯示，耐斯糖進(jìn)樣量在2.148 μg～ 6.444 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5方法學(xué)考察

2.5.1精密度試驗(yàn)精密吸取“2.3.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液10 μL，照“2.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)測(cè)定峰面積5次，結(jié)果顯示峰面積RSD為1.0％（n=5），表明精密度良好。

2.5.2重復(fù)性試驗(yàn)取潤(rùn)法樣品粉末（過三號(hào)篩）5份，各約0.5 g，精密稱定，照“2.1”項(xiàng)下方法處理，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積。結(jié)果顯示峰面積RSD為0.9％（n=5），表明重復(fù)性良好。

2.5.3穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取同一樣品溶液（潤(rùn)法），室溫放置，分別于0、5、10、15、20、25 h照“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積。結(jié)果顯示峰面積RSD為1.5％（n=5），表明穩(wěn)定性良好。

2.5.4加樣回收率試驗(yàn)取同一批已知含量的樣品粉末（潤(rùn)法；過三號(hào)篩）5份各約0.1 g，精密稱定，分別精密加入等量的耐斯糖對(duì)照品，按“2.3.1”項(xiàng)下方法處理，照“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果顯示平均回收率為100.02％，RSD=0.5％。見表2。

2.6樣品含量測(cè)定

分別取“2.1”項(xiàng)下樣品（粉碎過三號(hào)篩）0.5 g，各3份，精密稱定，照“2.3.1”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積。計(jì)算，結(jié)果見表3。

表2　加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=5）

表3　樣品中耐斯糖含量測(cè)定結(jié)果　（±s,n=3）

表3　樣品中耐斯糖含量測(cè)定結(jié)果?。ā纒,n=3）

炮制去心方法煮法潤(rùn)法泡后蒸法泡法清蒸法鹽蒸法樣品含量(％) 4.788±0.051 5.292±0.053 4.164±0.038 3.164±0.018 4.374±0.017 4.282±0.055 RSD (％) 1.1 1.0 0.9 0.6 0.4 1.3

3討論

3.1各炮制品中耐斯糖含量比較

根據(jù)文獻(xiàn)記載[5]，巴戟天木心與根皮比較，化學(xué)成分存在較大差異，且木心比重約占巴戟天藥材的20％～30％，因此有必要對(duì)巴戟天進(jìn)行去心炮制。研究表明[6-8]，炮制去心方法不同，巴戟天中有效成分含量也不同。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，采用不同炮制去心法處理后，巴戟天中耐斯糖的含量高低為：潤(rùn)法＞煮法＞清蒸法＞鹽蒸法＞泡后蒸法＞泡法。可見，以耐斯糖含量為考察指標(biāo)，潤(rùn)法去心可減少其在炮制過程中的損失。

3.2炮制機(jī)制探討

耐斯糖是巴戟天寡糖的組成成分之一，性狀為白色結(jié)晶，易溶于水，微溶于乙醇。因此，水處理過程對(duì)巴戟天耐斯糖的溶出影響較大，炮制去心時(shí)應(yīng)“少泡多潤(rùn)”。本試驗(yàn)所涉及的六種炮制去心方法中，泡后蒸法與泡法是將藥材直接浸泡于水中且與水接觸時(shí)間長(zhǎng)，炮制過程中已有耐斯糖溶出并流失，因此結(jié)果偏?。磺逭舴ê望}蒸法可使巴戟天糖類成分溶出增加，而煮法對(duì)糖類成分的溶出基本不影響[7]，試驗(yàn)結(jié)果中煮法耐斯糖含量偏高可能是由于甘草的加入使得其與巴戟天中的其他糖類成分發(fā)生復(fù)雜反應(yīng)形成了新的耐斯糖，清蒸法和鹽蒸法耐斯糖含量偏低可能是因?yàn)楦邷卣羝淖饔檬沟媚退固欠纸舛鄬?duì)減少；潤(rùn)法是水處理時(shí)間最長(zhǎng)的炮制去心方法，在水處理過程中，隨著藥材對(duì)水分的不斷吸收，耐斯糖即開始溶解并未流失，可認(rèn)為提取時(shí)耐斯糖是擴(kuò)散至提取溶劑中，另一方面，潤(rùn)法可使細(xì)胞結(jié)構(gòu)疏松，加速了耐斯糖的溶出，因此其耐斯糖含量損失最少。

3.3色譜條件的確定

本試驗(yàn)采用甲醇∶水（3∶97）為流動(dòng)相和提取溶劑，不僅保證了色譜峰與其相鄰峰良好的分離度，也保證了耐斯糖的有效提取。

參考文獻(xiàn)：

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（本文編輯蘇維）

·血瘀證治·

Influence of Different Methods for Removing Woody Core on Nystose Content in Morinda officinalis

CHEN E1，ZHOU Can1*，LIAO Sha2，SHI Jinmin1
（1.Department of Pharmacy，Renmin Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine，Shiyan, Hubei 442000，China；2.Taihe Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine, Shiyan, Hubei 442000，China）

Abstract〔〕Objective To compare the influence of different methods for removing woody core on nystose content in Morinda officinalis. Methods The HPLC-ELSD detection was used with the chromatographic column Welch AQ-C(18)(250 mm× 4.6 mm, 5 μm)，the mobile phase was methanol-water（3∶97），the column temperature was at 25℃，the flow rate was 0.8 mL/min，the injection volume was 10 μL, and the drift tube temperature was at 40℃with low temperature atomization. Results The level of the nystose content in Morinda officinalis with different process was: moistening method＞cooking method＞steaming method＞steaming method with salt＞steaming method after soaking＞soaking method. Conclusion The nystose content in Morinda officinalis is the least loss when use the moistening method to removing woody core.

Keywords〔〕Radix Morindae officinalis；processing；nystose；HPLC-ELSD

〔通訊作者〕*周燦，男，藥師，E-mail：327412800@qq.com。

〔作者簡(jiǎn)介〕陳娥，女，主管藥師，主要從事中藥飲片質(zhì)量控制研究。

〔基金項(xiàng)目〕十堰市科學(xué)技術(shù)研究與開發(fā)項(xiàng)目計(jì)劃（十科發(fā)[2013]20號(hào)）。

〔收稿日期〕2015-09-06

〔中圖分類號(hào)〕R283.3

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕B

〔文章編號(hào)〕

doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2016.04.008