侯 萍 李劍平

1例O型糾B型疑難血型鑒定分析

侯 萍 李劍平

目的 探討初篩和復(fù)檢不符的疑難血型1例并對其進行分析。方法 采用血清學方法和分子生物學方法聯(lián)合對1例復(fù)檢的血型進行疑難血型鑒定。結(jié)果 血清學檢測結(jié)果證實為有B抗原，但不能證實是否是B抗原減弱還是B亞型，分子生物檢測結(jié)果證實為B型，兩種方法均證實為B型，非O型。結(jié)論 ABO血型的正確定型與臨床輸血安全有著緊密的聯(lián)系，錯誤的血型定型會使該獻血者在輸血時發(fā)生輸血反應(yīng)，嚴重者甚至可危及受血者生命。因此對初篩有所懷疑的血型必須進行復(fù)檢，正確定型。

疑難血型；鑒定；分析

ABO血型的正確定型與臨床輸血安全有著緊密的聯(lián)系，錯誤的血型定型會使該獻血者在輸血時發(fā)生輸血反應(yīng)，嚴重者甚至可危及受血者生命。本研究在復(fù)檢1名初篩為O型的獻血者ABO血型時，發(fā)現(xiàn)正定型抗B血清與獻血者紅細胞發(fā)生弱凝集，懷疑其可能是B抗原減弱或者是ABO亞型，為進一步確認該獻血者的ABO血型，進行了一系列的血型血清學和分子生物學試驗，現(xiàn)報道如下。

1 病例簡介

獻血者，女，35歲，遼寧省鳳城市人，已婚，2014年4月在本站采血車進行無償獻血300 mL。各項檢測指標合格。紙板法在室溫下紅細胞與抗A和抗B血清均不凝集，定為O型，然后檢驗科復(fù)檢發(fā)現(xiàn)紅細胞與抗B血清發(fā)生弱凝集，遂送本科室進行疑難血型鑒定。

2 方法

2.1 血清學檢測

2.1.1 試劑與儀器 抗A、抗B試劑、抗AB、抗H、人ABO血型反定型用紅細胞試劑盒（上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司，批號：20130406，43700，20130408，20145310），抗A、抗B試劑、人ABO血型反定型用紅細胞試劑盒（北京金豪制藥股份有限公司，批號：2013063014，2014043010）。KUBOTA細胞洗滌離心機（日本久保田公司）。

2.1.2 ABO血型鑒定、血型物質(zhì)測定、吸收放散試驗ABO血型正反定型、血型物質(zhì)測定、吸收放散試驗方法均參考相關(guān)操作進行[7]，具體方法如下。

（1）ABO血型正反定型 正定型每管加1滴抗A、抗B、抗AB、和抗H試劑，同時分別加1滴患者3%～5%的紅細胞；反定型每管分別加2滴患者血清和1滴反定型Ac、Bc、Oc及患者自身細胞，離心，判讀結(jié)果。

（2）血型物質(zhì)測定 制備倍量稀釋的抗體。用抗A檢查A型分泌型，抗B檢查B型分泌型；混合2滴稀釋后的抗體與1滴3%～5%的含有相應(yīng)抗原的紅細胞鹽水，室溫中和15 min，離心判讀結(jié)果，檢查是否為A、B分泌型。

（3）吸收放散試驗 吸收試驗：抗A、抗B標準血清倍比稀釋測效價；取患者洗3次后的亞基紅細胞與等量的抗血清混合，4℃放置1 h，離心，吸取上清液，即為吸收液，吸收液做效價與相應(yīng)的抗A、抗B標準血清對比。

放散試驗：取上述離心后壓積細胞加入1/2容積的生理鹽水，56℃水浴放散7～10 min，離心，上清液即為放散液，用A和B型紅細胞鑒定抗體，確定受檢者血型。

2.2 分子生物學檢測

2.2.1 樣本DNA提取 用血液DNA提取試劑盒(北京天根公司)從獻血者血液樣本中提取DNA，并用核酸蛋白測定儀測定DNA濃度和純度，試驗嚴格按照DNA提取試劑盒使用說明書進行操作。

2.2.2 ABO血型的聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物基因分型（PCR-SSP） 采用天津秀鵬公司人紅細胞ABO血型基因檢測試劑盒，按照試劑盒操作說明書嚴格進行操作，首先配制dNTP-Buffer工作液，然后配制Buffer-酶-樣本混合液，混勻并離心Buffer-酶-樣本混合液，分別向每個引物孔（1～8孔）各加10 μL的混合液，每孔再分別加15～20 μL石蠟油，用密封膜封好PCR反應(yīng)板；反應(yīng)板頂部置PCR密封壓力墊，關(guān)上PCR儀，啟動PCR程序。結(jié)束后將PCR產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到2.5%瓊脂糖凝胺電泳，電泳150 V，15 min，紫外光拍照記錄。

3 結(jié)果

3.1 血清學檢測結(jié)果 獻血者紅細胞在室溫下與上海和北京的抗B凝集均較弱為2+，同時與抗AB的凝集更弱為鏡下mf，與抗H凝集則高達4+，正定型出現(xiàn)定型困難；反定型獻血者血漿與Ac凝集為4+，與Bc、Oc及自身均不凝集，反定型為B型。血型物質(zhì)測定為分泌型，有B物質(zhì)。經(jīng)吸收放散試驗證明其紅細胞上有B抗原，沒有A抗原。見表1～表5。

表1 ABO血型正反定型結(jié)果

表2 血型物質(zhì)測定結(jié)果

表3 受檢者與抗A血清吸收試驗結(jié)果

表4 受檢者與抗B血清吸收試驗結(jié)果

表5 放散試驗結(jié)果

3.2 分子生物學檢測結(jié)果 根據(jù)PCR-SSP檢測試劑盒提供的參考等位基因和圖1電泳結(jié)果判定該獻血員基因型B/O 2。該結(jié)果符合其血清型。見圖1。

圖1 PCR-SSP電泳圖注：1：O 1；2：非O 1；3：O 2；4：非O 2；5：B；6：非B；7：A 2；8：非A 2

4 討論

本例B型獻血者由于紅細胞表面B抗原極弱，在采血車采用紙板法定型極易誤定為O型。該獻血者在進行血型血清學鑒定時，發(fā)現(xiàn)正定型抗B凝集減弱，抗AB凝集極弱，造成血型定型困難，為進一步鑒定該獻血者血型，我們又進行了血型物質(zhì)和吸收放散試驗，結(jié)果證明，有B抗原存在，暫定B型，但不排除B亞型的可能性，

由于血清學技術(shù)存在一定的局限性，有時導致一些疑難血型標本難以準確判定。因此，通過采用分子生物學技術(shù)可以準確地對正、反定型不一致的標本進行定型[1-2]。所以，本研究對本例血清學存在B抗原，但不能確定是B抗原減弱還是B亞型的標本進行了分子生物學的基因檢測，經(jīng)進一步分子生物學試驗證實基因型為B/O 2，該結(jié)果顯示為B型，與血清學結(jié)果基本一致，同時排除了B亞型的可能性，證實為B抗原減弱的B型獻血者。

血型的正確鑒定對于獻血者和用血者都具有重要的臨床意義，是保證安全輸血的關(guān)鍵。本例為1名已婚的女性獻血者，因此，如果該獻血者為O型血，與非O型血的男士生子，可能會有發(fā)生新生兒溶血病的風險，因此該獻血者血型的正確定型尤為重要。另外，作為用血者，血型不合的血液輸注也會引起急性溶血性輸血反應(yīng)的可能性[3]。

據(jù)文獻報道[4-5]，血型鑒定發(fā)生錯誤的原因，有47%由于人為錯誤造成，因此在日常工作中，發(fā)現(xiàn)正反定型不一致時，一定要引起高度重視。就醫(yī)療系統(tǒng)而言，有15%是檢測人員沒執(zhí)行嚴格查對制度和醫(yī)療技術(shù)操作規(guī)程造成[6]。就血站而言，隨著無償獻血人員的逐漸增多，血型錯定或者一些疑難血型的風險就逐漸加大，因此，除了要求采血車工作人員增加責任感和嚴格按照操作規(guī)程進行檢測外，對有疑問的血型一定要復(fù)檢，復(fù)檢采用血清學方法，如果不能證實是否是抗原減弱或者亞型，還需進一步的分子生物學試驗進行確證，保證血型的準確無誤，進而保證輸血安全。

[1] 李彤彤，黃嫻，王維.國內(nèi)異常ABO血型的鑒定研究進展[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2013，10（14）：1889-1890.

[2] 萬小春，李雪群，嚴鳳好.從檢出8例弱B型探討ABO血型正反定型的重要性[J].中外健康文摘，2011，8（16）：208-209.

[3] 蘭炯采，負中橋，陳靜嫻．輸血免疫血液學實驗技術(shù)[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2011:49-140．

[4] 劉萍，李榮國，王志梅,等.街頭獻血車ABO血型初檢錯誤的原因分析及預(yù)防[J].中外健康文摘，2009,6（32）：115.

[5] 李瑞麗，秦強國，張穎,等.2010年無償獻血者ABO血型檢測結(jié)果分析[J].中國醫(yī)藥指南，2011，9（14）：70.

[6] 陳巖.血型鑒定錯誤的原因分析[J].中外健康文摘，2013，10（25）：12.

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.13.007

;沈陽市科學技術(shù)計劃項目 （F-10-149-9-35,F 10-206-1-00）

遼寧 110044 遼寧省血液中心（侯萍） 沈陽市干細胞臨床應(yīng)用研究中心 （李劍平）

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