許智鴻， 王冰焱， 王雅華， 王亞琦， 吳秋妹， 章　濤

福建醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系，福州　350108

?

慢性砷暴露對(duì)大鼠組織與免疫細(xì)胞功能的影響

許智鴻， 王冰焱， 王雅華， 王亞琦， 吳秋妹， 章濤

福建醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系，福州350108

摘要:目的觀察慢性砷暴露對(duì)大鼠肝、脾、腦及巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞的影響。方法20只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和低、中、高濃度染砷組。灌胃給藥喂養(yǎng)大鼠12周，觀察大鼠的一般情況和體質(zhì)量變化；取肝、脾等組織行H-E染色制備切片，觀察組織形態(tài)學(xué)變化；中性紅法測(cè)定光密度值(OD)檢測(cè)腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能；流式細(xì)胞儀檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群。結(jié)果慢性高濃度砷暴露大鼠個(gè)別出現(xiàn)姿勢(shì)和行為異常；染砷組和對(duì)照組大鼠體質(zhì)量比較，有不同程度的下降(P<0.05)；染砷組各組織切片可見(jiàn)不同程度的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；高濃度染砷組大鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅實(shí)驗(yàn)OD值明顯低于對(duì)照組(P<0.05)；中、高濃度染砷組外周血CD3+T細(xì)胞比例均低于對(duì)照組(P<0.05)，低濃度染砷組大鼠外周血CD4+/CD8+T細(xì)胞比值高于對(duì)照組(P<0.05)，高濃度染砷組CD4+/CD8+比值低于對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)論慢性砷暴露對(duì)大鼠組織具有損害作用，并可能是通過(guò)影響巨噬細(xì)胞功能和T淋巴細(xì)胞亞群比例影響大鼠免疫功能。

關(guān)鍵詞:慢性病； 砷； 亞砷酸鹽類(lèi)； 病理學(xué)； 巨噬細(xì)胞； T淋巴細(xì)胞

砷作為食物、土壤和水中自然存在的元素，其復(fù)合物或化合物是毒物和致癌物。人們主要通過(guò)環(huán)境污染或職業(yè)暴露接觸該致癌物，當(dāng)攝入超過(guò)排泄時(shí)，攝入體內(nèi)的砷可經(jīng)血液迅速分布至全身，引起慢性砷中毒[1]。砷暴露的機(jī)制尚未完全明確，同時(shí)有很多研究是立足于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自由飲用的給藥方式，對(duì)砷中毒患者免疫球蛋白水平的報(bào)道也并不一致[2]。本研究采用對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物灌胃的給藥方式，觀察砷暴露對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的影響和表現(xiàn)，并通過(guò)分析免疫細(xì)胞中巨噬細(xì)胞吞噬功能的改變和外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化，初步探討慢性砷暴露對(duì)大鼠組織和免疫功能的影響。

1材料與方法

1.1儀器與試劑紫外分光光度計(jì)(Thermo Drop2000，美國(guó)Thermo Fisher公司)；CO2培養(yǎng)箱(Thermo Forma 3111型，美國(guó)Thermo Fisher公司)；流式細(xì)胞儀(FACSVerse，美國(guó)BD公司)；亞砷酸鈉(成都艾科達(dá)化學(xué)試劑有限公司)；大鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液(美國(guó)Biolegend公司)；大鼠抗體(FITC/CD3及APC/CD4，美國(guó)Biolegend公司)。

1.2分組與染砷方式選用20只健康雄性昆明種大鼠，體質(zhì)量115～140 g[吳氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物貿(mào)易有限公司，許可證：SCXK(滬)2002-0003，合格證：2007000551273]；大鼠經(jīng)口半數(shù)致死量(median lethal dose,LD50)的結(jié)果為46.4 mg/kg(霍恩式法)，經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按每組3只隨機(jī)分成對(duì)照組和低、中、高濃度染砷組(低、中、高濃度組)[3]，各染砷組濃度分別為L(zhǎng)D50的1/40(0.125 mg/mL)，1/20(0.25 mg/mL)和1/10(0.5 mg/mL)[4]，均采用灌胃給藥，其中對(duì)照組給予雙蒸水灌胃，按照毒理學(xué)試驗(yàn)基礎(chǔ)設(shè)計(jì)[5]，灌胃前隔夜禁食，每天固定時(shí)間喂養(yǎng)12周。

1.3觀察與檢測(cè)指標(biāo)

1.3.1體質(zhì)量及一般情況每天觀察記錄動(dòng)物攝食、飲水、活動(dòng)、精神狀態(tài)等一般情況；每周固定時(shí)間點(diǎn)記錄大鼠空腹體質(zhì)量，并根據(jù)大鼠每周的平均體質(zhì)量調(diào)整各組砷含量。

1.3.2組織病理學(xué)檢測(cè)取所需肝臟、脾臟、大腦、小腸、胸腺組織塊，經(jīng)甲醛固定后進(jìn)行脫水與包埋，包埋完的組織塊放入-4 ℃冰箱保存，后行切片、染色、封片，于顯微鏡下觀察[6-8]。

1.3.3檢測(cè)巨噬細(xì)胞吞噬功能實(shí)驗(yàn)前1天注射6%淀粉生理鹽水，24 h后抽取腹腔滲出液，離心8 min，重懸，計(jì)數(shù)后調(diào)整細(xì)胞數(shù)，于細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)5 h，去除培養(yǎng)液，每孔加中性紅溶液培養(yǎng)30 min，期間觀察細(xì)胞的形態(tài)；棄去中性紅，加細(xì)胞裂解液，室溫放置5 h，顯微鏡觀察見(jiàn)細(xì)胞溶解后于540 nm處測(cè)定OD值。

1.3.4檢測(cè)T淋巴細(xì)胞分群大鼠麻醉后斷尾，取新鮮外周血；稀釋后加到淋巴細(xì)胞分離液中，形成明顯的界面；離心15 min后吸取中層呈白絮狀的淋巴細(xì)胞，洗滌離心2次，細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞量為1×107mL-1，取適量細(xì)胞至相應(yīng)管中加抗體染色，室溫避光，離心，去上清；用固定液(1%多聚甲醛)固定。流式細(xì)胞儀測(cè)定T淋巴細(xì)胞亞群。

2結(jié)果

2.1大鼠體質(zhì)量變化及一般情況改變灌胃開(kāi)始前，各組大鼠進(jìn)食和飲水情況正常，毛發(fā)具有正常光澤度，精神狀態(tài)良好；灌胃3周后，中、高濃度組大鼠出現(xiàn)煩躁，互相抓咬，其中高濃度組1只大鼠體形異常，身體與頭部之間發(fā)生明顯扭曲，鼻孔有出血跡象，有進(jìn)食糞便情況；灌胃4周后，高濃度組1只大鼠腹部毛發(fā)發(fā)黃，并開(kāi)始脫落，表皮角化過(guò)度，發(fā)黃處皮膚逐漸發(fā)紅發(fā)黑并潰爛。實(shí)驗(yàn)期間各組大鼠體質(zhì)量均有增長(zhǎng)，自第6周開(kāi)始增長(zhǎng)均減慢，與對(duì)照組比較，低、中、高濃度組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)幅度有所下降，其中高濃度組尤為明顯，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表1，圖1)。

表1　各組大鼠體質(zhì)量

與對(duì)照組比較，☆：P<0.05.

2.2組織切片病理學(xué)改變

2.2.1肝臟對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞索以中央靜脈為中心向四周呈放射狀排列，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，核膜清晰可見(jiàn)，胞質(zhì)染色均勻；低濃度組未見(jiàn)明顯的形態(tài)學(xué)改變，肝細(xì)胞無(wú)明顯異常，有輕微水腫，偶見(jiàn)雙核，肝細(xì)胞核周可見(jiàn)未知黑色小顆粒；中濃度組中央靜脈輕微擴(kuò)張，細(xì)胞水腫明顯，匯管區(qū)可見(jiàn)小灶狀炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；高濃度組肝竇擴(kuò)張，細(xì)胞腫脹，胞質(zhì)疏松，呈彌漫性，雙核，肝細(xì)胞脂肪變，嗜酸性變性(圖2)。

2.2.2脾臟對(duì)照組脾臟呈粉紅色，被膜下為實(shí)質(zhì)，生發(fā)中心、邊緣區(qū)、紅白髓交界未見(jiàn)異常。染砷組脾臟體積增大，呈暗紅色，淋巴小結(jié)結(jié)構(gòu)不清，體積變大，生發(fā)中心不清楚，脾索增厚，血竇增生擴(kuò)張，且部分區(qū)域可見(jiàn)含鐵血黃素細(xì)胞(圖3)。

2.2.3大腦對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)完整，細(xì)胞間質(zhì)均勻致密。染砷組神經(jīng)元出現(xiàn)核固縮均質(zhì)化，胞質(zhì)空泡形成，間質(zhì)疏松，低、中濃度組可見(jiàn)一定數(shù)量的基本正常的腦細(xì)胞；高濃度組神經(jīng)元幾乎全部變性壞死溶解，間質(zhì)更加疏松，膠質(zhì)細(xì)胞增生明顯，可見(jiàn)缺血壞死灶(圖4)。

2.2.4空腸對(duì)照組空腸絨毛完整，排列緊密；吸收細(xì)胞呈柱狀，排列齊整。染砷組空腸部分絨毛不整齊；吸收細(xì)胞變矮、不規(guī)則、核固縮、染色深；杯狀細(xì)胞增多；黏膜固有層內(nèi)炎性細(xì)胞增多，毛細(xì)血管擴(kuò)張，充血；小腸腺部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡(圖5)。

2.2.5胸腺對(duì)照組胸腺組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，髓質(zhì)與皮質(zhì)未見(jiàn)特殊變化。染砷組胸腺小體部分?jǐn)U大，細(xì)胞間隙增大，且充血嚴(yán)重，炎癥細(xì)胞增多(圖6)。

2.3巨噬細(xì)胞吞噬功能改變對(duì)照組及低、中、高濃度組的OD值分別為(0.060±0.005)，(0.071±0.006)，(0.055±0.006)和(0.038±0.005)。低、中濃度組與對(duì)照組比較，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；高濃度組與對(duì)照組比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖7)。

2.4流式細(xì)胞儀檢測(cè)T淋巴細(xì)胞分群中、低濃度組大鼠外周血CD3+細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的比例低于對(duì)照組，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；中、高濃度組大鼠外周血CD3+細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的比例低于對(duì)照組，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；染砷組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；低濃度組大鼠外周血CD4+/CD8+比值高于對(duì)照組(P<0.05)，中濃度組大鼠外周血CD4+/CD8+比值低于對(duì)照組，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，高濃度組大鼠外周血CD4+/CD8+比值低于對(duì)照組(P<0.05)；染砷組間比較，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖8，9，表2)。

3討論

本實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的一般情況、體質(zhì)量變化，與李艷紅等報(bào)道的砷中毒患者皮膚改變的癥狀相類(lèi)似[7]，提示砷對(duì)大鼠機(jī)體的影響最初可表現(xiàn)在固有免疫系統(tǒng)的皮膚黏膜屏障；其次是對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響，特別是小腦平衡功能上，由于樣本量較少，其作用機(jī)

n=3.與對(duì)照組比較，☆：P<0.05；☆☆：P<0.05.

制還有待進(jìn)一步的探索；從大鼠的體質(zhì)量增長(zhǎng)來(lái)看，亞砷酸鈉可以抑制大鼠體質(zhì)量的正常增加，并呈濃度依賴(lài)反應(yīng)，可能與砷對(duì)機(jī)體內(nèi)分泌、消化及免疫系統(tǒng)的影響等密切相關(guān)[8-9]。

砷是一種胞質(zhì)毒物，可在體內(nèi)臟器組織中蓄積，使細(xì)胞代謝發(fā)生障礙，并對(duì)多種酶有抑制作用，引起免疫、消化、神經(jīng)系統(tǒng)等多個(gè)重要器官發(fā)生病變[10]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，砷暴露可導(dǎo)致大鼠某些臟器發(fā)生病理學(xué)改變[11]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)各濃度大鼠主要的免疫器官組織及小腦、小腸進(jìn)行病理學(xué)切片分析證實(shí)此觀點(diǎn)。

劉佳等的小鼠碳粒廓清實(shí)驗(yàn)表明，隨砷濃度的增大，小鼠對(duì)碳粒的清除功能呈下降趨勢(shì)(P<0.05)，提示砷對(duì)巨噬細(xì)胞本身有損傷作用[12]。成靜等的碳粒廓清實(shí)驗(yàn)表明，砷中毒可降低小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能[13]。本實(shí)驗(yàn)可見(jiàn)，低濃度組大鼠與對(duì)照組比較，OD值雖有所升高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，也有可能是濃度過(guò)低時(shí)巨噬細(xì)胞反而被激活，增強(qiáng)其吞噬功能；而高濃度組OD值明顯低于對(duì)照組，意味著染砷組的吞噬功能明顯降低，大鼠的固有免疫受到了明顯的抑制，但其具體機(jī)制還有待進(jìn)一步探究。

本實(shí)驗(yàn)采用的流式細(xì)胞技術(shù)分析為定量分析，相較于免疫組織化學(xué)等方法，能夠更精確、更全面反映目標(biāo)細(xì)胞的情況。但其缺點(diǎn)是必須采用新鮮標(biāo)本制取的單細(xì)胞懸液，組織標(biāo)本不能保存[14]。本實(shí)驗(yàn)中，低濃度組與對(duì)照組比較，CD3+細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的比例上無(wú)顯著變化，中、高濃度組大鼠低于對(duì)照組；低濃度組CD8+T淋巴細(xì)胞比例降低、CD4+T淋巴細(xì)胞比例升高及其CD4+/CD8+比值升高，中、高濃度組則與低濃度組相反。染砷組CD4+T淋巴細(xì)胞與CD8+T淋巴細(xì)胞的正常比例發(fā)生變化，提示細(xì)胞免疫受到了不同程度的免疫抑制[15]。

針對(duì)低劑量砷導(dǎo)致CD4+T淋巴細(xì)胞與CD8+T淋巴細(xì)胞的比值升高，Genevan等的文章表明，低濃度砷對(duì)淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)起到促進(jìn)作用，這可能是低濃度長(zhǎng)期接觸砷而導(dǎo)致皮膚癌前病變時(shí)核過(guò)度分裂的基礎(chǔ)，DNA復(fù)制因增殖過(guò)快發(fā)生錯(cuò)誤[16]。對(duì)于中、高濃度組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，有文獻(xiàn)報(bào)道，亞砷酸鈉染砷可導(dǎo)致被激活的T細(xì)胞細(xì)胞骨架發(fā)生變化，T細(xì)胞蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)功能受到影響[17]。Galicia等的動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示，亞砷酸鈉可能會(huì)抑制T細(xì)胞 IL-2功能表達(dá)，進(jìn)而降低CD4+T淋巴細(xì)胞與CD8+T淋巴細(xì)胞的比值[18]。這些因素的綜合作用，導(dǎo)致染砷組大鼠的免疫調(diào)節(jié)失衡，免疫系統(tǒng)免疫監(jiān)控作用減弱。已有研究表明，長(zhǎng)期的免疫調(diào)節(jié)失衡和監(jiān)控作用減弱終將會(huì)導(dǎo)致癌癥的發(fā)生[19]。

綜上所述，從最初的固有免疫包括皮膚黏膜屏障觀察，3周時(shí)間即可出現(xiàn)較為特殊的病理性砷中毒表現(xiàn)；繼而從巨噬細(xì)胞吞噬功能、T淋巴細(xì)胞亞群比例分析，尤其是CD4+細(xì)胞的減少，不僅可導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞免疫能力下降，還可能使體液免疫功能受到影響。CD4+細(xì)胞可分為T(mén)h1細(xì)胞和Th2細(xì)胞，其中Th1是細(xì)胞免疫應(yīng)答的有效誘導(dǎo)者，能夠增強(qiáng)單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的殺菌毒性和溶解細(xì)胞內(nèi)微生物的效率；Th2細(xì)胞在輔助B淋巴細(xì)胞發(fā)展為抗體分泌細(xì)胞方面非常有效[20]。因此，砷中毒不僅可導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞免疫能力下降，還可能使體液免疫功能受到影響，所以T淋巴細(xì)胞亞群可能是砷暴露非常敏感的健康效應(yīng)指標(biāo)之一。組織學(xué)的觀察直觀證實(shí)了砷中毒對(duì)動(dòng)物及人體的危害。

(致謝：感謝吳林青、韓艷非、郭瑋老師，陳杏婷、李曉童、耿海麗等學(xué)姐們的幫助。)

參考文獻(xiàn)：

[1]吳君．砷酸鈉和亞砷酸鈉經(jīng)口染砷大鼠體內(nèi)代謝機(jī)制研究[D]．烏魯木齊：新疆醫(yī)科大學(xué)，2010.

[2]李玉林.病理學(xué)[M].8版. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2014：119-120.

[3]金泰廙.毒理學(xué)原理和方法[M]. 上海：復(fù)旦大學(xué)出版社，2012：13-16.

[4]楊瑾,李金有,孫天佑,等. 亞慢性砷中毒大鼠血脂譜變化特征及機(jī)理研究[J]. 中國(guó)地方病學(xué)雜志,2003,22(2)：107-110.

[5]姜岳明. 毒理學(xué)基礎(chǔ)[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社,2012：67-68.

[6]高寶紅.介紹大鼠各組織器官石蠟切片制作法[J]. 實(shí)用醫(yī)技雜志,2009,16(12)：1023-1024.

[7]李艷紅. 飲水型砷中毒對(duì)健康的危害及其地球化學(xué)來(lái)源[J]. 國(guó)外醫(yī)學(xué)·醫(yī)學(xué)地理分冊(cè),2002,23(4)：150-152．

[8]馬栓柱,許秀舉,羅綏蘭,等. 飲水型砷中毒大鼠中毒模型及劑量-反應(yīng)關(guān)系[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2008,35(2)：243-249.

[9]葛龍,劉媛,郎曼,等. 飲水型砷暴露對(duì)家兔皮膚抗氧化水平影響研究[J].環(huán)境與健康醫(yī)學(xué)雜志,2014,31(8)：662-664.

[10]吳君. 砷對(duì)肝臟毒性的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)藥物與臨床,2005,5(9)：645-647.

[11]湯平濤,王翔樸. 血清乳酸脫氫酶同工酶在幾種實(shí)驗(yàn)性肝損害時(shí)的變化規(guī)律及其診斷價(jià)值[J]. 中國(guó)公共衛(wèi)生學(xué)報(bào),1992,11(2)：100-104.

[12]劉佳,吳克楓,俞紅,等. 三氧化二砷對(duì)小鼠免疫功能的影響[J]. 中國(guó)地方病學(xué)雜志,1998,17(5)：281-283.

[13]成靜,祝壽芬. 三氧化二砷對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)的影響[J]. 中國(guó)地方病學(xué)雜志,2000,19(1)：16-18.

[14]林真珍,邵蓓,金坤林,等. 流式細(xì)胞技術(shù)分析大鼠缺血性腦卒中后腦組織內(nèi)T細(xì)胞的變化[J].ChinJClinNeurosci,2013,21(2)：1461-1650.

[15]Syriala H,Surcel H M．Low CD4/CD8 lymphocyte ratio in acute myocardial infarction[J].ClinExpImmunol,1991,83(2)：326-328.

[16]IPCS.Environhealthcriteria[R].Genevan:WHO,1981:103-105.

[17]王重慶.分子免疫學(xué)[M]. 北京：北京大學(xué)出版社,1997：162-169.

[18]Galicia G,Leyva R,Tenorio E P,etal. Sodium arsenite retards proliferation of PHA-activated T cells by delaying the production and secretion of IL-2[J].IntImmunopharmacol,2003,3(5)：671-682.

[19]朱筑霞,費(fèi)櫻,張愛(ài)華,等. 燃煤型慢性砷中毒患者免疫功能改變的觀察[J].中國(guó)地方病學(xué)雜志,2004,23(1)：13-15.

[20]程義斌,康家琦,顧珩,等.飲水砷暴露對(duì)兒童免疫功能的影響[J]. 環(huán)境與健康雜志,2009,26(8)：701-704.

(編輯:張慧茹)

The Effects of Chronic Arsenic Exposure on the Tissue and Immune Cells of Rats

XU Zhihong, WANG Bingyan, WANG Yahua, WANG Yaqi, WU Qiumei, ZHANG Tao

Department of Immunology, School of Basic Medical Sciences, Fujian Medical University, Fuzhou 350108,China

ABSTRACT:ObjectiveTo observe the effects of chronic arsenic exposure on tissues (liver, spleen and other tissues) and immune cells (macrophage and T cells) of rats.Methods20 rats were randomly divided into control group and low, middle and high concentration of arsenic.The general conditions and changes in body weight of rats were observed during 12 weeks during which time the rats were fed with arsenic.The histological damage in liver, spleen and other tissues were examined with H-E staining.The phagocytosis of peritoneal macrophages was measured by neutral red method.The percentage of T lymphocytes were identified by flow cytometry.ResultsRats exposured to high concentrations of arsenic showed abnormal gestures and behaviors and weight loss compared with the control group (P<0.05).Histopathological data showed tissue inflammation with arsenic exposure.The phagocytosis of peritoneal macrophages was significantly decreased in rats with high concentrations of arsenic exposure (P<0.05) compared with the control group.The percentage of CD3+ T cells and the ratio of CD4+/CD8+ T cells were lower (P<0.05).ConclusionThe tissues are damaged with chronic arsenic exposure in rats while the immune function is impaired possibly by effects on the function of macrophages and T lymphocyte subsets in rats.

KEY WORDS:chronic disease； arsenic； arsenites； pathology； macrophages； T-lymphocytes

收稿日期:2015-09-24

基金項(xiàng)目:國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201410392025)；福建省自然科學(xué)基金(2014J01334)

作者簡(jiǎn)介:許智鴻(1994-)，男，福建醫(yī)科大學(xué)2012級(jí)五年制麻醉學(xué)專(zhuān)業(yè)通訊作者: 章濤. Email：zjdrzht@mail.fjmu.edu.cn

中圖分類(lèi)號(hào):R332； R361； R977； R995

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1672-4194(2016)01-0006-05