藍(lán)必忠，黃紅燕，黃景灘，湯慶坤，賈雪峰，黃勝，李安華，陳枝，黃旭華

（廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣總站，南寧市 530007）

桑尺蠖微粒子病對(duì)家蠶的交叉?zhèn)魅拘哉{(diào)查

藍(lán)必忠，黃紅燕，黃景灘，湯慶坤，賈雪峰，黃勝，李安華，陳枝，黃旭華

（廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣總站，南寧市 530007）

桑尺蠖是桑園常見(jiàn)的害蟲(chóng)，也是傳播病原的主要昆蟲(chóng)之一。在廣西蠶區(qū)調(diào)查了桑尺蠖微粒子病對(duì)家蠶的交叉?zhèn)魅拘?。調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)桑尺蠖幼蟲(chóng)微粒子病自然感染率為0.54%；從桑尺蠖體內(nèi)分離獲得4株微孢子蟲(chóng)，編號(hào)分別為PaBM3、PaBM4、PaBM5和PaBM6，光學(xué)顯微鏡下觀察PaBM3、PaBM5和PaBM6均為長(zhǎng)卵圓形，與家蠶微孢子蟲(chóng)（Nb）存在明顯差異；PaBM4為卵圓形，與Nb相似。通過(guò)生物試驗(yàn)測(cè)定，發(fā)現(xiàn)PaBM4微孢子蟲(chóng)對(duì)蟻蠶的半數(shù)感染濃度（IC50）為2.49×105個(gè)/mL，是Nb的4.64倍，說(shuō)明其對(duì)家蠶也具有較強(qiáng)的食下感染力，而其對(duì)家蠶沒(méi)有胚種傳染性；PaBM3、PaBM5和PaBM6三種微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶均無(wú)感染力。因此，桑尺蠖微粒子病發(fā)生情況復(fù)雜，潛在對(duì)家蠶有交叉?zhèn)魅镜娘L(fēng)險(xiǎn)，蠶種生產(chǎn)需要采取措施防控桑尺蠖的危害。

桑尺蠖；家蠶；微粒子病；交叉?zhèn)魅拘?/p>

微孢子蟲(chóng)是一種嗜昆蟲(chóng)的病原微生物，據(jù)記載幾乎所有昆蟲(chóng)物種都有被微孢子蟲(chóng)感染的情況，部分昆蟲(chóng)還受到1種以上微孢子蟲(chóng)感染[1]。根據(jù)眾多研究調(diào)查發(fā)現(xiàn)微孢子蟲(chóng)在昆蟲(chóng)間還具有交叉?zhèn)魅粳F(xiàn)象，而野外昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶交叉?zhèn)魅揪褪且l(fā)家蠶微粒子病的重要方式[2]，很多研究者為預(yù)防這種交叉?zhèn)魅拘缘陌l(fā)生，對(duì)很多科昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)進(jìn)行了深入調(diào)查。桑尺蠖是一種常見(jiàn)的桑園害蟲(chóng)，其攜帶的微孢子蟲(chóng)也可能存在對(duì)家蠶交叉?zhèn)魅拘裕妨崃岬萚3]在浙江蠶區(qū)的桑尺蠖體內(nèi)收集得到1株微孢子蟲(chóng)，發(fā)現(xiàn)該微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶無(wú)致病性，以孢子濃度為6×108個(gè)/mL給家蠶添食，蠶體發(fā)育依然正常，未檢測(cè)出微孢子蟲(chóng)。沈中元等[4]也從桑尺蠖體內(nèi)分離得到一株微孢子蟲(chóng)，調(diào)查發(fā)現(xiàn)該微孢子蟲(chóng)不但能感染寄生家蠶，導(dǎo)致蠶兒發(fā)病，且能引起家蠶胚種傳染，而且在蠶體內(nèi)繼代后，對(duì)家蠶胚種傳染率有增加的趨勢(shì)，對(duì)蠶種生產(chǎn)造成嚴(yán)重影響；黃旭華等[5-7]在廣西蠶區(qū)初步調(diào)查了桑尺蠖對(duì)家蠶的交叉?zhèn)魅拘裕l(fā)現(xiàn)桑尺蠖微粒子病自然感染率為3.74%，還從桑尺蠖體內(nèi)分離得到2株微孢子蟲(chóng)（PaBMⅠ和PaBMⅡ），調(diào)查發(fā)現(xiàn)PaBMⅠ和PaBMⅡ微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶均具有一定的食下傳染力，但均沒(méi)有胚種傳染性。

為了更加充分了解廣西蠶區(qū)桑尺蠖微粒子病對(duì)家蠶的交叉?zhèn)魅拘?，本文選擇在家蠶母種、原種生產(chǎn)應(yīng)用的桑園內(nèi)調(diào)查桑尺蠖微粒子病自然感染率，以及桑尺蠖微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶的致病性，以期為控制野外昆蟲(chóng)微粒子病對(duì)家蠶交叉?zhèn)魅咎峁┮罁?jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 供試微孢子蟲(chóng)的來(lái)源和純化 從廣西蠶業(yè)技術(shù)推廣總站武鳴基地桑園、石埠桑園和站內(nèi)桑園捕捉的桑尺蠖幼蟲(chóng)體內(nèi)分離得到的4株微孢子蟲(chóng)，暫命名為PaBM3、PaBM4、PaBM5和PaBM6；家蠶微孢子蟲(chóng)（Nosema bombycis，簡(jiǎn)稱(chēng)Nb）由廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣總站蠶病研究室提供。參照文獻(xiàn)[3]的方法，對(duì)PaBM3、PaBM4、PaBM5、PaBM6和Nb孢子進(jìn)行提取、純化。

1.1.2 供試家蠶品種 932×芙蓉。

1.2 方法

1.2.2 桑尺蠖微粒子病發(fā)生率調(diào)查 2015年5月至7月到廣西蠶業(yè)技術(shù)推廣總站武鳴基地桑園、石埠桑園和站內(nèi)桑園捕捉的桑尺蠖幼蟲(chóng)，并采取逐只研磨鏡檢方式進(jìn)行檢驗(yàn)，調(diào)查桑尺蠖微粒子病自然感染率。

1.2.2 4種微孢子蟲(chóng)孢子大小及形態(tài)觀測(cè) 將純化的PaBM3、PaBM4、PaBM5、PaBM6和Nb孢子液制成臨時(shí)標(biāo)本，置600倍相差顯微鏡（OLYMPUS BX51）下觀察，分別用明美顯微數(shù)碼測(cè)量分析系統(tǒng)（V1.0）的測(cè)微尺測(cè)量各種孢子的長(zhǎng)軸與短軸，每種孢子樣品均測(cè)量30粒孢子。

1.2.3 4種微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶致病性

1.2.3.1 對(duì)家蠶的食下感染力測(cè)定 將 PaBM3、PaBM4、PaBM5、PaBM6和Nb微孢子蟲(chóng)孢子液梯度稀釋成108～103個(gè)/mL系列稀釋液，分別取各稀釋濃度的孢子液0.1 mL，涂抹于面積為8 cm2的桑葉片，飼喂1區(qū)蟻蠶（30頭），每種處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。待蟻蠶吃?xún)魩Ф旧Ｈ~后，改用經(jīng)過(guò)含有效氯濃度為0.5%的漂白粉精溶液浸泡消毒10 min的無(wú)毒桑葉飼養(yǎng)至5齡起蠶，對(duì)試驗(yàn)區(qū)的每一頭蠶逐一研磨鏡檢，調(diào)查感染率，以Nb感染組作為對(duì)照。用Reed-Muench法計(jì)算出半數(shù)感染濃度（IC50）[8]。

1.2.3.2 對(duì)家蠶的胚種傳染調(diào)查 分別給2齡起蠶經(jīng)口接種PaBM3、PaBM4、PaBM5、PaBM6微孢子蟲(chóng)孢子液（PaBM3、PaBM5和PaBM6濃度為1×108個(gè)/mL，PaBM4為1×107個(gè)/mL），常規(guī)條件下利用潔凈桑葉飼育至上蔟，并保護(hù)至化蛹、化蛾，單蛾制種，單蛾手磨鏡檢，將感染孢子的母蛾所產(chǎn)的卵圈，進(jìn)行卵面消毒、即時(shí)浸酸處理、催青，孵化蟻蠶，飼養(yǎng)至3齡起蠶，逐頭鏡檢（包括死卵），計(jì)算孢子胚種傳染率，每種微孢子蟲(chóng)調(diào)查5個(gè)卵圈。同時(shí)在5齡起蠶添食家蠶微孢子蟲(chóng)（Nb）孢子液（濃度為1×106個(gè)/mL）作為對(duì)照[9]。

2 結(jié)果與分析

2.1 桑尺蠖微粒子病發(fā)病率情況

調(diào)查廣西桑園內(nèi)桑尺蠖微粒子病發(fā)生情況。結(jié)果如表1，在不同地點(diǎn)的桑園內(nèi)調(diào)查都發(fā)現(xiàn)桑尺蠖攜帶微孢子蟲(chóng)，且存在一定的野外自然感染率。

表1 桑園內(nèi)桑尺蠖微粒子病自然發(fā)生率

2.2 4種微孢子蟲(chóng)的基本形狀與大小

由表2和圖1可知，PaBM3、PaBM5和PaBM6微孢子蟲(chóng)孢子呈長(zhǎng)卵圓形，與Nb孢子的形狀、大小有明顯差異，3株微孢子蟲(chóng)間的大小也存在一定差異；PaBM4呈卵圓形，與Nb孢子的形狀相似。各種微孢子蟲(chóng)孢子折光性強(qiáng)，在普通顯微鏡下觀察呈淡綠色。

表2 各種微孢子蟲(chóng)的形態(tài)和大小

圖1 PaBM3、PaBM4、PaBM5、PaBM6和Nb孢子的形態(tài)（×600）

2.3 4種桑尺蠖微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶的致病性

2.3.1 對(duì)家蠶的半數(shù)感染濃度（IC50） PaBM3、PaBM4、PaBM5、PaBM6和Nb對(duì)家蠶的食下感染力如表3，在4種桑尺蠖微孢子蟲(chóng)中，只有PaBM4對(duì)家蠶具有食下感染力，其IC50為2.49×105個(gè)/mL，而PaBM3、PaBM5、 PaBM6對(duì)家蠶沒(méi)有感染力，即使添食高濃度（108個(gè)/mL）孢子液，3種孢子也未能感染家蠶；同一時(shí)間測(cè)定的Nb的IC50是5.36×104個(gè)/mL，PaBM4的IC50是Nb的4.64倍，說(shuō)明PaBM4對(duì)家蠶也具有較強(qiáng)的食下感染力，只是稍微比Nb弱一些。

表3 各種微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶的食下傳染力調(diào)查

2.3.2 對(duì)家蠶的胚種傳染力 調(diào)查發(fā)現(xiàn)4種桑尺蠖微孢子蟲(chóng)感染家蠶后，在后代的蠶兒均未檢出孢子，說(shuō)明各種桑尺蠖微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶沒(méi)有胚種傳染力。而家蠶微孢子蟲(chóng)在卵殼、死卵、蟻蠶和3齡蠶均發(fā)現(xiàn)有孢子，檢出率達(dá)到53.50%，對(duì)家蠶具有很強(qiáng)的胚種傳染力。

3 討論

桑尺蠖與家蠶一樣是鱗翅目昆蟲(chóng)[4]，屬于中等體型昆蟲(chóng)，繁殖能力極強(qiáng)，嚴(yán)重影響桑園桑葉產(chǎn)量及質(zhì)量，特別是在蠶期，當(dāng)桑園無(wú)法噴藥，會(huì)造成短期暴發(fā)，如廣西蠶業(yè)技術(shù)推廣總站科技人員2008年5月底到武鳴原蠶基地調(diào)查時(shí)，發(fā)現(xiàn)桑尺蠖蟲(chóng)口密度尚小，但到7月中旬再次進(jìn)行調(diào)查時(shí)就發(fā)現(xiàn)桑園中桑尺蠖為害大暴發(fā)[5]。如桑園內(nèi)桑尺蠖發(fā)生微粒子病，通過(guò)蟲(chóng)體繁殖將快速擴(kuò)散微孢子病原，對(duì)家蠶有交叉?zhèn)魅镜娘L(fēng)險(xiǎn)。

本文試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在廣西各地桑園內(nèi)的桑尺蠖均具有一定的微粒子病自然感染率，在3個(gè)地方收集得到4株感染桑尺蠖的微孢子蟲(chóng)，從形態(tài)上比較，有3株微孢子蟲(chóng)（PaBM3、PaBM5和PaBM6）相似，均屬于長(zhǎng)卵圓形，但也稍微有一些差異，而且該3株微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶沒(méi)有致病性；另外1株微孢子蟲(chóng)（PaBM4）形態(tài)與家蠶微孢子蟲(chóng)（Nb）相似，屬于卵圓形，而且對(duì)家蠶具有較強(qiáng)的食下感染力，但沒(méi)有胚胎傳染性。根據(jù)初步分析認(rèn)為PaBM3、PaBM5和PaBM6等3株微孢子蟲(chóng)，可能是桑尺蠖微孢子蟲(chóng)的原始種；而PaBM4微孢子蟲(chóng)很可能原來(lái)就是由家蠶微孢子蟲(chóng)感染給桑尺蠖的。PaBM3、PaBM5和PaBM6是否是同一株微孢子蟲(chóng)？PaBM4是否是一株家蠶微粒子孢子，有待對(duì)各類(lèi)微孢子蟲(chóng)進(jìn)行分子遺傳學(xué)研究才能夠得到確切結(jié)論。

綜上所述，廣西桑園桑尺蠖攜帶的微孢子蟲(chóng)分布復(fù)雜，存在對(duì)家蠶交叉?zhèn)魅镜娘L(fēng)險(xiǎn)，在蠶種生產(chǎn)中應(yīng)引起足夠重視，并加強(qiáng)防范。

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2016年全區(qū)蠶種生產(chǎn)形勢(shì)分析暨產(chǎn)銷(xiāo)交流會(huì)在南寧召開(kāi)

2016年2月29日下午，廣西蠶種業(yè)協(xié)會(huì)在南寧召開(kāi)2016年全區(qū)蠶種生產(chǎn)形勢(shì)分析暨產(chǎn)銷(xiāo)交流會(huì)。自治區(qū)農(nóng)業(yè)廳經(jīng)作處吳孝文副處長(zhǎng)、廣西蠶業(yè)技術(shù)推廣總站有關(guān)領(lǐng)導(dǎo)及全區(qū)24家蠶種生產(chǎn)會(huì)員單位代表共39人參加了會(huì)議。

廣西蠶種業(yè)協(xié)會(huì)潘志新理事長(zhǎng)在會(huì)上作2015年協(xié)會(huì)工作總結(jié)。會(huì)議肯定了協(xié)會(huì)及全區(qū)各蠶種生產(chǎn)單位相關(guān)蠶業(yè)工作者去年一年來(lái)的工作成績(jī)，并結(jié)合2015年的生產(chǎn)發(fā)放情況和當(dāng)前整個(gè)行業(yè)的生產(chǎn)形勢(shì)，對(duì)2016年我區(qū)蠶種生產(chǎn)總體形勢(shì)作出預(yù)測(cè)分析。潘志新理事長(zhǎng)在會(huì)上指出，去年受全球經(jīng)濟(jì)下滑影響，蠶繭價(jià)格持續(xù)走低，蠶農(nóng)積極性受到打擊，繭絲綢行業(yè)面臨著嚴(yán)峻考驗(yàn)，今年隨著各級(jí)黨委政府重視和國(guó)家一路一帶經(jīng)濟(jì)政策的推行，再加上外圍經(jīng)濟(jì)逐步復(fù)蘇和我國(guó)經(jīng)濟(jì)繼續(xù)保持持續(xù)、健康、穩(wěn)定的增長(zhǎng)，預(yù)計(jì)2016年干繭、生絲價(jià)格從歷史高位回調(diào)震蕩加固后會(huì)再次走高。蠶種生產(chǎn)單位應(yīng)該樹(shù)立信心，共同維護(hù)市場(chǎng)穩(wěn)定，加強(qiáng)生產(chǎn)管理，保障全區(qū)蠶種生產(chǎn)安全和足量供應(yīng)。

會(huì)議還就今年上半年全區(qū)蠶種生產(chǎn)計(jì)劃、指導(dǎo)價(jià)格、質(zhì)量保障，蠶種場(chǎng)設(shè)施設(shè)備更新和蠶種市場(chǎng)管理等事項(xiàng)進(jìn)行了商討，達(dá)成共識(shí)。

最后，會(huì)議對(duì)2016年全區(qū)蠶種質(zhì)量評(píng)比獲獎(jiǎng)單位進(jìn)行了頒獎(jiǎng)。其中，有3家蠶種場(chǎng)獲得一等獎(jiǎng)，7家蠶種場(chǎng)獲得二等獎(jiǎng)，13家蠶種場(chǎng)獲得三等獎(jiǎng)。

（廣西蠶業(yè)技術(shù)推廣總站 蘇林）

S884.21；

A；

1006-1657（2016）01-0012-4

2016-01-05；

2016-2-20

廣西科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（No.桂科重14121002-4-2）；國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（No.31560048）；廣西農(nóng)業(yè)重點(diǎn)科技計(jì)劃項(xiàng)目（No.201508）。

信息］藍(lán)必忠（1985—），男，本科，農(nóng)藝師，從事栽桑養(yǎng)蠶與桑蠶良種繁育推廣工作。E-mail:longbishan1@163.com

信息］黃旭華（1978—），男，碩士研究生，高級(jí)農(nóng)藝師。E-mail:40304713@qq.com