李天芝，于新友（山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

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豬病防控中實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的應(yīng)用與注意事項(xiàng)

李天芝，于新友
（山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

摘 要：近年來(lái)，豬發(fā)生的疾病種類不斷增多，病情復(fù)雜，死亡率增加，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，僅靠流行病學(xué)和病理變化等有時(shí)很難對(duì)病因做出正確的判斷，因此，必須借助實(shí)驗(yàn)室方法對(duì)豬病進(jìn)行診斷，以便做出相應(yīng)的防控措施，使養(yǎng)殖場(chǎng)的損失降到最低，文內(nèi)就實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展的檢測(cè)工作、檢測(cè)對(duì)豬病防控的意義、送檢樣品的要求和檢測(cè)結(jié)果的評(píng)價(jià)等進(jìn)行論述，旨在為今后廣大獸醫(yī)工作者在豬病防控中能更好的開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作提供參考。

關(guān)鍵詞：豬病；防控；實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

近年來(lái)，我國(guó)豬病的種類越來(lái)越多，老病新發(fā)或新的疾病不斷暴發(fā)流行［1］，癥狀日益復(fù)雜，隱性感染、非典型癥狀和混合感染無(wú)處不在［2］，僅靠流行病學(xué)、臨床癥狀和病理變化難以確診，不能及時(shí)準(zhǔn)確制定防控措施，往往貽誤疾病治療的最佳時(shí)機(jī)，導(dǎo)致豬群大量死亡。因此，采集病豬或死豬相關(guān)組織作為病料，進(jìn)行病原檢測(cè)是輔助豬病診斷的重要手段，只有查明病原才能更好地、有針對(duì)性地采取相應(yīng)的防治措施，減少臨床工作的盲目性，以達(dá)到預(yù)防、控制和撲滅傳染病的目的，從而使養(yǎng)殖場(chǎng)/戶的損失降到最低。另一方面，目前市場(chǎng)上疫苗廠家眾多，疫苗質(zhì)量參差不齊，疫苗的免疫效果會(huì)受到儲(chǔ)存、運(yùn)輸和免疫等多個(gè)環(huán)節(jié)影響，實(shí)驗(yàn)室可檢測(cè)保護(hù)性抗體出現(xiàn)時(shí)間、維持時(shí)間、離散度和最高滴度等指標(biāo)，評(píng)估疫苗免疫效果，為疫苗選擇及制定科學(xué)合理免疫程序提供參考。再次，社會(huì)上還有人受經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使，對(duì)疫苗市場(chǎng)進(jìn)行炒作，引起廣大百姓的認(rèn)識(shí)誤區(qū)［3］。因此，只有開(kāi)展好實(shí)驗(yàn)室診斷工作，才能更好的為廣大獸醫(yī)工作者和養(yǎng)殖場(chǎng)/戶的服務(wù)，才能更好的做好規(guī)模化豬場(chǎng)疾病綜合防控與凈化工作。而病料采集、保存、送檢的方法是否正確，直接影響到檢驗(yàn)的結(jié)果和防治工作的開(kāi)展。鑒于部分養(yǎng)殖戶和相關(guān)專業(yè)技術(shù)人員對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及應(yīng)注意的事項(xiàng)不太清楚或認(rèn)識(shí)上存在誤區(qū)，筆者就多年從事實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的心得體會(huì)及注意事項(xiàng)進(jìn)行論述，以期為廣大基層獸醫(yī)工作者提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作內(nèi)容

1.1 抗體檢測(cè)

抗體檢測(cè)指在體外進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)，其基本原理就是利用抗原可與相應(yīng)的抗體特異性結(jié)合的特性，利用已知的抗原來(lái)檢查血清或其他樣品中是否含有相應(yīng)的抗體［4］，目前普遍采用的是ELISA方法，檢測(cè)血清中某種病原的抗體含量。該法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、時(shí)間短、可同時(shí)檢測(cè)大量樣本，對(duì)人員操作水平要求不高。但也存在一些問(wèn)題，大部分試劑盒不能區(qū)分野毒和疫苗毒，有的病原抗體檢測(cè)水平與保護(hù)力并沒(méi)有太大相關(guān)性。僅能作為疫苗免疫后產(chǎn)生免疫力的依據(jù)或感染發(fā)生的依據(jù)。實(shí)驗(yàn)室目前主要使用的是已經(jīng)商品化的試劑盒。目前也有不少企業(yè)研發(fā)出了豬病抗體膠體金快速檢測(cè)卡，也可用于抗體的快速檢測(cè)，主要應(yīng)用于豬場(chǎng)疾病的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。

1.2 病原檢測(cè)

病原檢測(cè)分兩種，一種是采用某種方法，如細(xì)菌培養(yǎng)、動(dòng)物接種等直接檢測(cè)某種病原微生物是否存在，另一種是采用PCR等方法，檢測(cè)樣品中某種病原微生物的核酸是否存在，從而間接反應(yīng)某種病原微生物是否存在。第1種方法做起來(lái)費(fèi)時(shí)費(fèi)力，第2種方法便利快捷，在較短時(shí)間就能得到結(jié)果，所以目前病原檢測(cè)主要采用的是第2種方法。PCR檢測(cè)針對(duì)的是病原，針對(duì)性強(qiáng)、可確診，可區(qū)分野毒與疫苗毒，熒光定量PCR檢測(cè)方法可確定病毒載量，確定發(fā)病的主要原因，但PCR檢測(cè)對(duì)人員和儀器有一定的要求，需專業(yè)人員操作，專業(yè)人員需要有一定的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。

2 檢測(cè)對(duì)豬病防控的意義

病原檢測(cè)的意義是了解豬群是否感染某種病原，假如感染，陽(yáng)性率是多少，調(diào)查某種疾病的流行情況，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，對(duì)豬場(chǎng)開(kāi)展疾病凈化相關(guān)工作，采取相應(yīng)的措施，隔離或撲殺陽(yáng)性感染豬，建立陰性種豬群，實(shí)行全進(jìn)全出等措施，從而徹底根除某種疾病在豬場(chǎng)的流行。在疾病初期進(jìn)行診斷，實(shí)現(xiàn)早發(fā)現(xiàn)，早治療，用疫苗緊急接種，防控疾病大規(guī)模的暴發(fā)和流行。

通過(guò)抗體檢測(cè)可以了解豬群的整體免疫狀況，從而把握整個(gè)豬群的健康狀況，弄清楚豬群注射疫苗后是否產(chǎn)生抗體及抗體量的多少，以此判斷疫苗的免疫效果，及早發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，及早采取措施，為下一步的疫苗選擇和免疫程序的制定提供依據(jù)，

3 送檢樣品的要求

送檢的樣品具有代表性是實(shí)驗(yàn)室能否做出正確檢測(cè)結(jié)果的前提和基礎(chǔ)，送檢的樣品不合格，可能做出錯(cuò)誤的檢測(cè)結(jié)果，造成誤診，耽誤疾病的治療。現(xiàn)簡(jiǎn)單介紹一下樣品的采集、保存和運(yùn)輸途中應(yīng)注意的一些事項(xiàng)。樣品主要包括血清和病料兩個(gè)主要部分，現(xiàn)分別進(jìn)行闡述。

3.1 抗體檢測(cè)樣品

送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)血清樣品一般有兩個(gè)目的，一是做血清抗體的普查，即檢驗(yàn)豬只的免疫情況及效價(jià)的高低，另一種目的是用于未注射疫苗豬群的疾病監(jiān)測(cè)，如果是以抗體的普查為目的，一定要注意采樣，一定要有統(tǒng)計(jì)意義，按照豬場(chǎng)的規(guī)模采取一定分布和數(shù)量的樣品［5］。對(duì)于以疾病監(jiān)測(cè)為目的，一定注意當(dāng)發(fā)現(xiàn)突然死亡或死因不明的病畜尸體，必須先采集耳靜脈等末梢血液，涂片鏡檢，在認(rèn)定不是炭疽時(shí)，才允許解剖和全面采集病料。對(duì)血清樣品一般從前腔靜脈或耳緣靜脈采血2～5 mL，盡可能的防止血樣在采集過(guò)中被污染，一旦污染細(xì)菌可能會(huì)影響監(jiān)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，如果有條件的話最好能將血清分離后，送檢血清，方法為待血液凝固后，將析出的血清轉(zhuǎn)移至離心管，3 000 r/ min離心10 min，取上清液置于1.5 mL滅菌離心管內(nèi)，做好標(biāo)記送檢，也可以直接送采集好的血樣，注意運(yùn)輸途中要冷藏保存，以防血樣腐敗變質(zhì)，最好4 ℃，不能凍結(jié)，否會(huì)造成溶血，影響檢測(cè)結(jié)果，盡快將血樣送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，一般不超過(guò)24 h。

3.2 病原檢測(cè)樣品

采集病料進(jìn)行病原分離和檢測(cè)時(shí)，最要保證病料的新鮮，一定要取適宜的病料和病變的典型部位，對(duì)檢測(cè)細(xì)菌樣品的病料最好是沒(méi)有經(jīng)抗生素治療的動(dòng)物［6］，如果病料取得部位不正確也能造成假陰性的結(jié)果，比如豬瘟，以前有送檢人員取的是肝臟，這是錯(cuò)誤的，采集的病料應(yīng)盡可能的齊全，混合一起進(jìn)行檢測(cè)，避免漏檢，提高結(jié)果的準(zhǔn)確性。關(guān)于豬的常見(jiàn)病病料應(yīng)該采集的部位在下面將做詳細(xì)論述，采集病料時(shí)盡量無(wú)菌操作，動(dòng)作要盡可能快，所用器械、容器都必須消毒滅菌，減少樣品被污染的可能性，要在病豬死亡后6 h內(nèi)采集病料。要將病料盡快送達(dá)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，不能送腐敗變質(zhì)的病料，病料運(yùn)輸途中一定要保持低溫，防止途中變質(zhì)，但也要避免病料的反復(fù)凍融，最好能在24 h內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

3.2.1 豬病毒性病料應(yīng)該采集的部位

表1 不同病毒性疾病病料采集部位

3.2.2 豬細(xì)菌疾病病料的采集部位

表2 不同細(xì)菌性疾病病料采集部位

3.2.3豬寄生蟲(chóng)性病料應(yīng)該采集的部位

弓形體病主要采集抗凝血和肺臟，球蟲(chóng)病主要采集糞便。

4 檢測(cè)結(jié)果的評(píng)價(jià)

實(shí)驗(yàn)室不僅要及時(shí)、準(zhǔn)確的對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，有時(shí)也需要對(duì)得到的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行整理、分析和匯總，否則養(yǎng)殖戶不能準(zhǔn)確理解數(shù)據(jù)的意義，向養(yǎng)殖戶提供準(zhǔn)確的建議和報(bào)告，如陽(yáng)性率、陰性率、差異度等，從而更好的指導(dǎo)臨床用藥，對(duì)當(dāng)前的免疫程序、用藥情況、疫苗質(zhì)量等提出意見(jiàn)和建議。真正的為豬場(chǎng)服務(wù)，做到“檢有所值，檢有所用”。并進(jìn)行可持續(xù)的跟蹤服務(wù)，將實(shí)驗(yàn)室的作用發(fā)揮到最大。

5 小結(jié)

獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室在豬病防控中起著非常重要的作用，不論是病原檢測(cè)還是抗體檢測(cè)都應(yīng)該都應(yīng)追求高標(biāo)準(zhǔn)、高質(zhì)量，將檢測(cè)結(jié)果與臨床診斷結(jié)合起來(lái)，將檢測(cè)與分析統(tǒng)一結(jié)合起來(lái)，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)雖不能解決豬場(chǎng)所有的問(wèn)題，但可解決部分緊急的問(wèn)題。降低豬場(chǎng)養(yǎng)殖成本，避免大規(guī)模傳染病的發(fā)生，尤其是規(guī)模較大的豬場(chǎng)，更應(yīng)該重視實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的作用，否則可能造成不可估量的損失，有條件的話最好能建立自己的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室或依托可靠的合作單位，如果采取臨時(shí)抱佛腳式的檢測(cè)，會(huì)產(chǎn)生很多時(shí)間和信任成本。對(duì)豬場(chǎng)疾病的防控應(yīng)重預(yù)防和檢測(cè)，檢測(cè)可以貫穿于整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程中的疾病防控，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)應(yīng)秉承“專業(yè)、高效、及時(shí)、準(zhǔn)確”的服務(wù)宗旨，“客觀、獨(dú)立、公正、嚴(yán)謹(jǐn)”的原則。提升自身創(chuàng)新力、市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力、打造社會(huì)公信力。為規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)提供及時(shí)、準(zhǔn)確、權(quán)威的檢測(cè)報(bào)告。同時(shí)，檢測(cè)中心將“養(yǎng)大于防、防大于治”的養(yǎng)殖理念與養(yǎng)殖體檢結(jié)合，實(shí)現(xiàn)全方位的養(yǎng)殖防控?cái)?shù)據(jù)服務(wù)體系，從而真正實(shí)現(xiàn)養(yǎng)殖效益的最大化。隨著豬病的不斷增多和病情的復(fù)雜化，各地“草根實(shí)驗(yàn)室”和各集團(tuán)公司的中心實(shí)驗(yàn)室紛紛建立，并在豬病防控中發(fā)揮了巨大作用。將各種實(shí)驗(yàn)室的作用結(jié)合起來(lái)，取長(zhǎng)補(bǔ)短，才能更好地服務(wù)于生產(chǎn)一線［7］。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果受到樣品、人員、儀器設(shè)備、檢測(cè)方法、檢測(cè)試劑、檢測(cè)環(huán)境等多種因素的影響，為保障實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)效果的準(zhǔn)確性，應(yīng)從以下幾個(gè)方面進(jìn)行控制：1）加強(qiáng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室的管理，制定一系列的規(guī)章制度，并嚴(yán)格執(zhí)行；2）采集合適的樣品，并及時(shí)正確的送檢；3）加強(qiáng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員的管理，定期開(kāi)展技能考核，盡量減少由于人的因素造成的試驗(yàn)結(jié)果誤差；4）定期開(kāi)展培訓(xùn)，使實(shí)驗(yàn)室人員不斷學(xué)習(xí)，及時(shí)掌握最新、有效的檢測(cè)方法，對(duì)檢測(cè)結(jié)果分析要科學(xué)、合理和全面，根據(jù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)做出合理的判斷，制定科學(xué)的豬病防控措施，相信在不久的將來(lái)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)會(huì)在豬病的防控工作中發(fā)揮更加重要的作用。

參考文獻(xiàn)

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［2］ 李龍，章葉恩.用于實(shí)驗(yàn)室診斷的豬病料的采集、保存和運(yùn)輸方法介紹（1）——疑似病毒性疾病病料的采集、保存和運(yùn)輸［J］.養(yǎng)豬，2007（3）：75-77.

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［7］ 勞錦華.豬病復(fù)雜催生“草根實(shí)驗(yàn)室”上馬［N］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào) ，2009-11-29（004）.

基金項(xiàng)目：山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系生豬產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（SDAIT-06-022-15）；山東省自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目（ZR2014CQ010）；濱州市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（2013GG0304）

作者簡(jiǎn)介：李天芝（1985-），女，山東菏澤人，助理研究員，碩士，主要從事動(dòng)物傳染病診斷與防控研究

收稿日期：（2016-02-19）