安志英

(廊坊市中醫(yī)醫(yī)院中藥房，河北 廊坊　065000)

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驗(yàn)方煎劑中有效成分影響因素探討Δ

安志英*

(廊坊市中醫(yī)醫(yī)院中藥房，河北 廊坊065000)

摘要目的：探討驗(yàn)方煎劑中有效成分的影響因素。方法：利用高效液相色譜技術(shù)，以選定的驗(yàn)方藥材中芍藥苷和黨參炔苷含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，分析提取溫度、提取溶劑、提取方法、藥材配伍等因素對(duì)其的影響。結(jié)果：50%乙醇、60 ℃水浴加熱結(jié)合微波輔助法對(duì)有效成分的保留效果最好，芍藥苷、黨參炔苷在驗(yàn)方中的含量分別為42.15、0.67 mg/g，在單一藥材赤芍和黨參中的含量分別為39.99、0.68 mg/g。60 ℃以上水浴溫度不利于芍藥苷成分保留。藥材配伍對(duì)黨參炔苷含量的影響較小，但對(duì)芍藥苷含量的影響顯著。結(jié)論：在驗(yàn)方煎制過(guò)程中，采用有機(jī)溶劑提取、適當(dāng)水浴加熱及微波輔助法，有利于保留其有效成分。不同的提取對(duì)象所受到的影響因素及效果各不相同，煎制時(shí)應(yīng)綜合考慮藥材配伍、提取對(duì)象理化性質(zhì)、酸堿度等多種因素。

關(guān)鍵詞芍藥苷； 黨參炔苷； 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)； 高效液相色譜

現(xiàn)代中藥質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)的手段包括生物活性檢測(cè)、效價(jià)檢測(cè)等，雖然借鑒化學(xué)藥品質(zhì)量控制的模式存在一定的局限性，但對(duì)于許多臨床療效已得到充分驗(yàn)證的中醫(yī)驗(yàn)方和經(jīng)方而言，在煎制過(guò)程中最大限度地保留或提取其有效成分仍是質(zhì)量控制的有效手段之一[1-3]。本研究以治療慢性乙型病毒性肝炎的驗(yàn)方為研究對(duì)象，該方以黃芪、黨參、柴胡、赤芍、當(dāng)歸、白花蛇色草、五味子、甘草等為主藥，視患者病癥予以加減，經(jīng)臨床驗(yàn)證其有較好療效。本研究選定芍藥苷和黨參炔苷的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，以高效液相色譜法為檢測(cè)手段，考察了提取溶劑、提取溫度、提取方法、藥材配伍對(duì)驗(yàn)方有效成分的影響，為中藥驗(yàn)方煎制中多種有效成分的最大化保留提供一定的參考依據(jù)。

1材料

1.1儀器

Agilent 1200型高效液相色譜分析儀(美國(guó)Agilent公司)；Hypersil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；KQ-50B超聲波清洗器(江蘇昆山超聲儀器有限公司)；MP17C-KE微波爐(美的公司)；Laborato 4000 effiencient 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國(guó)海道夫儀器有限公司)。

1.2藥品與試劑

中藥材黃芪、黨參、柴胡、赤芍、當(dāng)歸、白花蛇色草、五味子、甘草(購(gòu)于河北安國(guó)東方藥城)；芍藥苷與黨參炔苷標(biāo)準(zhǔn)品(購(gòu)于上海同田生物技術(shù)有限公司)；乙腈、冰醋酸、乙醇均為色譜純(購(gòu)于Sigma公司)；水為超純水(由Millipore公司的Milli-QA超純水機(jī)制得)。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱為Hypersil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為1%冰醋酸水溶液；采用梯度洗脫程序，0～8.0 min，20%乙腈；8.0～12.0 min，30%乙腈；12.0～22.0 min，40%乙腈；22.0～32.0 min，12%乙腈；流速為1.0 ml/min；柱溫為25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm。

2.2試驗(yàn)樣品預(yù)處理

選取驗(yàn)方主藥材用于本研究，將藥材粉碎成細(xì)粉，過(guò)50目篩。按驗(yàn)方各藥材用量準(zhǔn)確稱定質(zhì)量(黨參15 g、黃芪30 g、甘草10 g、當(dāng)歸15 g、五味子10 g、赤芍20 g、白花蛇舌草10 g、柴胡10 g)，混合均勻備用。準(zhǔn)確稱取5.000 g驗(yàn)方預(yù)處理后藥材，加50 ml雙蒸水，于60 ℃水浴中浸泡30 min，微波爐小火(100 W)操作5 min。過(guò)濾后濾液減壓回流至干，用流動(dòng)相乙腈-1%冰醋酸水溶液(V∶V=1 ∶4)溶解并定容至10 ml，搖勻，待用。單一赤芍與黨參藥材樣品按同一方法處理待用。

2.3芍藥苷與黨參炔苷混合標(biāo)準(zhǔn)溶液

分別準(zhǔn)確稱取干燥至恒質(zhì)量的芍藥苷、黨參炔苷標(biāo)準(zhǔn)品各10 mg，用流動(dòng)相乙腈-1%冰醋酸水溶液(V∶V=20 ∶80)溶解定容，配制成質(zhì)量濃度為1 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液待用。

2.4提取溫度的影響

設(shè)計(jì)了常溫(21 ℃)和40、60、70、80 ℃水浴共5種不同的處理狀況，以水為提取劑，將驗(yàn)方樣品按“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理后測(cè)定芍藥苷和黨參炔苷的含量。結(jié)果顯示，60 ℃時(shí)芍藥苷與黨參炔苷提取效果最好，其測(cè)定含量分別為42.15、0.67 mg/g；60 ℃以上提取溫度對(duì)黨參炔苷含量的影響不大，但對(duì)芍藥苷含量的影響則呈明顯下降趨勢(shì)，見圖1。

圖1　不同提取溫度對(duì)驗(yàn)方中芍藥苷和黨參炔苷含量的影響Fig 1　Effects of different extraction temperature on contents of paeoniflorin and lobetyolin in the selected prescription medicine

2.5提取溶劑的影響

選定雙蒸水和50%、70%乙醇為提取溶劑，將驗(yàn)方樣品按“ 2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理后測(cè)定芍藥苷和黨參炔苷的含量。結(jié)果顯示，選用乙醇為提取劑時(shí)，芍藥苷和黨參炔苷的提取效率明顯高于雙蒸水，見圖2。

圖2　不同提取溶劑對(duì)驗(yàn)方中芍藥苷和黨參炔苷含量的影響Fig 2　Effects of different extraction solvent on contents of paeoniflorin and lobetyolin in the selected prescription medicine

2.6提取方法的影響

分別以雙蒸水和50%乙醇為提取劑，設(shè)計(jì)了浸泡、超聲、微波及索氏回流4種提取方法，均以60 ℃水浴加熱輔助提取，對(duì)驗(yàn)方樣品進(jìn)行處理，采用高效液相色譜法測(cè)定芍藥苷和黨參炔苷的含量。結(jié)果顯示，微波輔助提取方法對(duì)有效成分的提取效率最高，見圖3。

A.雙蒸水；B.50%乙醇A. double distilled water；B.50% ethanol圖3　不同處理方法對(duì)驗(yàn)方中芍藥苷和黨參炔苷含量的影響Fig 3　Effects of different dealing method on contents of pae-oniflorin and lobetyolin in the selected prescription medicine

2.7藥材配伍的影響

設(shè)計(jì)了常溫浸泡、加熱浸泡、超聲、微波及索氏回流等5種提取方法，以50%乙醇為提取劑，對(duì)赤芍、黨參及驗(yàn)方藥材進(jìn)行處理，采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定芍藥苷和黨參炔苷的含量。結(jié)果顯示，驗(yàn)方藥材中芍藥苷的含量比單一藥材赤芍高，而驗(yàn)方藥材與單一藥材黨參中黨參炔苷含量的差異并不明顯，見圖4。

A.芍藥苷；B.黨參炔苷A. paeoniflorin；B.lobetyolin圖4　單一藥材與驗(yàn)方中芍藥苷和黨參炔苷含量比較Fig 4　Comparison of contents of paeoniflorin and lobetyolin between the selected prescription medicine and single medicine

驗(yàn)方或經(jīng)方常需結(jié)合病癥在藥材類型或用量方面予以加減，起主要作用的有效成分具有極大的差異，煎制過(guò)程應(yīng)同時(shí)兼顧保留多種有效成分。本研究盡可能貼近傳統(tǒng)中醫(yī)對(duì)中藥材的煎制方法，不考慮中藥制劑過(guò)程中一些特殊的處理手段和方法，同時(shí)著重考慮了煎制過(guò)程中的影響因素，而藥材產(chǎn)地、取樣部位、采集時(shí)間等因素未列入觀察范圍。

3.1提取溫度的影響

溫度等外因?qū)μ崛÷释鹬容^重要的作用。本研究結(jié)果顯示，提取溫度對(duì)芍藥苷的含量存在顯著的影響。水浴溫度在達(dá)到60 ℃以前，提取效率隨溫度升高逐漸增大，到60 ℃時(shí)達(dá)峰值，隨后在70～80 ℃時(shí)提取效率明顯下降。表明高溫時(shí)有效成分芍藥苷因受熱而分解，導(dǎo)致其含量偏低。但對(duì)于黨參炔苷而言，水浴溫度在達(dá)到60 ℃以前，提取效率隨溫度升高逐漸提高，而在60～80 ℃時(shí)溫度的升高對(duì)其提取率未見明顯影響。于定榮等[4]、馬冰等[5]在研究中均指出，芍藥苷易于水解，提取過(guò)程中應(yīng)避免長(zhǎng)期高溫受熱。由此可見，提取溫度對(duì)不同研究對(duì)象的影響存在差異。

3.2提取方法和提取溶劑的影響

以微波提取法為例，以雙蒸水、50%乙醇和70%乙醇為提取劑時(shí)，驗(yàn)方藥材中芍藥苷的含量分別為23.60、42.15、40.06 mg/g；黨參炔苷含量分別為0.48、0.67、0.65 mg/g，表明50%乙醇有利于提高提取效率。在提取方法的比較中，分別以雙蒸水、50%乙醇為提取劑處理樣品，檢測(cè)結(jié)果顯示，微波法輔助提取的效率均為最高，芍藥苷的含量分別為23.60、42.15 mg/g，黨參炔苷的含量分別為0.48、0.67 mg/g。表明對(duì)于芍藥苷和黨參炔苷的提取，加熱比常溫更加有利，有機(jī)溶劑比水更加有利，而且在提取溶劑相同的前提下，微波輔助提取法的效果明顯高于其他方法。李越等[6]、司愛永等[7]分別研究了五味子、復(fù)方四參顆粒的提取工藝，結(jié)果顯示，同一藥材不同提取方法得到的提取物活性的差異很大。驗(yàn)方制劑在制備過(guò)程中應(yīng)盡可能保留各味藥材的有效成分。有文獻(xiàn)報(bào)道，單一藥材有效成分的提取方法對(duì)驗(yàn)方藥材有效成分的提取與保留有著重要參考價(jià)值，但中藥驗(yàn)方由多種藥材組成，成分復(fù)雜，因此，研究驗(yàn)方藥材中有效成分的提取方法具有重要意義[8-12]。本研究結(jié)果證實(shí)，不同的提取方法和提取溶劑作用于同一藥材，也會(huì)導(dǎo)致提取效率的差異。

3.3藥材配伍的影響

本研究采用5種提取方法進(jìn)行處理的結(jié)果顯示，驗(yàn)方藥材中芍藥苷的含量均高于單一藥材赤芍，表明藥材配伍對(duì)芍藥苷的提取有促進(jìn)作用，可提高芍藥苷的提取率；而驗(yàn)方藥材與單一藥材黨參中黨參炔苷的含量無(wú)明顯差異；微波輔助提取法的效率均為最好。有研究指出，中藥組方與單一藥材藥動(dòng)學(xué)的差異可能與復(fù)方間的相互配伍以及復(fù)方組成有關(guān)[13-15]。因此，對(duì)于驗(yàn)方藥材有效成分的提取，不僅要考慮提取工藝，而且要考慮藥材配伍的影響。目前尚未發(fā)現(xiàn)一種提取方法對(duì)于驗(yàn)方藥材多種有效成分的保留均具有最佳效果。

綜上所述，50%乙醇比雙蒸水的提取效果好，加熱狀態(tài)比常溫狀態(tài)的效果好，微波輔助提取法亦優(yōu)于其他提取方法。此外，多味藥材的驗(yàn)方中，藥材配伍對(duì)有效成分的提取可能存在相互作用和影響。實(shí)際工作中，對(duì)于復(fù)雜藥材配伍的驗(yàn)方有效成分的提取，仍需考慮提取方法、提取溫度、提取溶劑及酸堿度等多種因素，進(jìn)行多次正交試驗(yàn)來(lái)確定驗(yàn)方煎劑的制取方法，以確保多種有效成分的最佳保留效果。

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Discussion on Effect Factors of Active Ingredient Extraction in Empirical PrescriptionΔ

AN Zhiying

(Dept.of Traditional Chinese Medicine Pharmacy, Langfang Traditional Chinese Medicine Hospital, Hebei Langfang 065000, China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To probe into the effect factors of active ingredient extraction in empirical prescription. METHODS: High-performance liquid chromatography(HPLC) were adopted, to set the content of paeoniflorin and lobetyolin in the selected prescription medicine as evaluation indicators, effects of extraction method, temperature, solvent and compatibility on active ingredient extraction were studied. RESULTS: 50% ethanol solution and 60 ℃ water path combined with microwave method could extract the highest rate of active ingredient. Contents of paeoniflorin and lobetyolin in the selected prescription medicine were respectively 42.15 mg/g and 0.67 mg/g; which were 39.99 mg/g and 0.68 mg/g in radix paeoniae rubra and codonopsis respectively. Temperature over 60 ℃ was not conducive to the extraction of active ingredient. Compatibility had greater influence on paeoniflorin extraction than that on lobetyolin. CONCLUSIONS: During the process, organic solvent extraction, appropriate water bath heating and microwave method are helpful for the increase of extraction efficiency of active ingredient. Different extraction objections can be influenced by different factors and the effects are different, therefore, it is necessary to comprehensively take the compatibility, physic-chemical property of objects and pH into consideration.

KEYWORDSPaeoniflorin; Lobetyolin; Quality standard; HPLC

3討論

Δ基金項(xiàng)目：河北省廊坊市科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.2012013070)

中圖分類號(hào)R932

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號(hào)1672-2124(2016)06-0734-03

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.06.004

(收稿日期：2016-04-15)

*主管中藥師。研究方向：中藥標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量控制。E-mail：605600919@qq.com