江育林，王　娜，張　旻，景宏麗（中國檢驗檢疫科學院動植物檢疫研究所水生動物疫病研究中心，北京　100029）

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流行性造血器官壞死病的傳入風險分析

江育林，王娜，張旻，景宏麗
（中國檢驗檢疫科學院動植物檢疫研究所水生動物疫病研究中心，北京100029）

摘 要：為確定導致流行性造血器官壞死?。‥HN）進入我國的各種可能因素，通過病原學和流行病學分析，逐一評估可能產生的不同程度的風險。分析認為，EHN傳入的主要威脅是來自疫區(qū)的活虹鱒和鱸魚，其次是冰凍和冰鮮的虹鱒和鱸魚。分析指出，只有根據(jù)感染特點，采取不同的檢疫措施，才能有效控制進口魚攜帶病毒傳入我國。

關鍵詞：流行性造血器官壞死??；傳入風險分析；流行分布；檢疫措施

水生動物病害一直影響著我國的水產養(yǎng)殖業(yè)，是我國水產養(yǎng)殖快速、持續(xù)發(fā)展的主要制約因素。據(jù)不完全統(tǒng)計，全國每年有10%~15%的養(yǎng)殖面積受到病害影響，近年來還有上升的趨勢。如白斑病使我國從一個年產20萬噸對蝦，能左右國際市場的養(yǎng)蝦大國變成了對蝦進口國。其它如鰻鱺、海洋魚類、甲魚、貝類的病害也十分嚴重。近年來，隨著水產養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，養(yǎng)殖品種的增多，病也越來越多，危害性也不斷增加，在國際間傳播流行的趨勢更加明顯。

引種是魚體攜帶病原到處傳播，造成疾病蔓延的一個重要原因。改革開放以來，我國從日本、韓國和朝鮮大量引進虹鱒，隨之帶入傳染性胰臟壞死病毒（IPNV）和傳染性造血器官壞死病病毒（IHNV），給我國的冷水魚養(yǎng)殖業(yè)造成了很大損失。隨著國際貿易的發(fā)展，越來越多的病原隨著活水生動物及其產品在國際傳播。

本文旨在通過研究流行性造血器官壞死病病毒（EHNV）在全世界的流行分布情況和以及不同地區(qū)流行情況和病原的差異情況，針對進境水生動物進行病毒跨境傳播的風險分析，從而科學預測疫病的流行趨勢，為政府決策提供技術支撐，以減少口岸監(jiān)測的盲目性。

1　分析的范圍

本項目主要分析EHNV隨水生動物進入我國的可能性及其后果。其宿主在沒有新的資料前僅限定為水生動物，內容限定在疾病方面的影響，不考慮進口品種對生態(tài)環(huán)境的影響。

2　疾病介紹

2.1病原因子

流行性造血器官壞死?。‥HN）是由EHNV引起的有鰭魚類臨床或亞臨床的系統(tǒng)性感染。EHNV屬于虹彩病毒科蛙病毒屬，病毒顆粒較大（150~180 nm），呈二十面體立體對稱。有囊膜時的浮密度為1.28 g/cm3，無囊膜時為1.32 g/cm3。病毒基因組為150~170 kb的雙鏈DNA，有105個蛋白基因。在胞核和胞質中均可進行復制。該屬病毒有共同抗原，有多種檢測方法。

蛙病毒屬的很多成員能感染魚類、兩棲類和爬行類動物。這些病毒都非常相似，其主要衣殼蛋白（MCP）占病毒總蛋白90%以上，且MCP基因具有高度保守的結構域，是鑒定蛙病毒的重要依據(jù)。

2.2病原穩(wěn)定性

EHNV耐干燥能力極強，在水中可存活數(shù)月，在冷凍的魚肉組織內存活可2年以上，在冷凍的魚體中可存活至少一年。由此推測，EHNV在魚場的水和沉渣中，以及在植物和設備上也可以存活數(shù)月至一年。病毒在pH=2~3時，或者在50℃以上時會迅速滅活。EHNV對70%的乙醇、0.2 mg/mL的次氯酸鈉敏感，加熱至60℃作用15分鐘可以滅活EHNV。

2.3易感宿主

EHNV自然感染病例僅發(fā)生在河鱸（Perca fluviatilis）和虹鱒（Oncorhynchus mykiss），導致發(fā)病和死亡的敏感魚種有：法國的鮰（Ictalurus melas）（ECV）、德國的鲇（Silurus glanis）（ESV）、丹麥的大菱鲆（Scophthalmus maximus）及芬蘭的其他魚種。其它大量的有鰭魚類在實驗條件下都對EHNV易感。

2.4宿主的易感階段

虹鱒和河鱸在各個生長階段都對該病毒易感。魚苗和幼魚通常比成年魚的臨床癥狀明顯。

虹鱒報道最多的是在體長小于125 mm的魚體內發(fā)現(xiàn)了EHNV。虹鱒對低濃度浸泡感染（102-3TCID50/ mL）具有抗性。

但河鱸對EHNV非常敏感。僅用濃度為0.08 TCID50/mL的病毒浸泡接種即可引起河鱸死亡，甚至用病毒分離（在BF-2細胞中）都檢測不到的低劑量病毒。

2.5靶器官與感染的組織

該病毒可感染多個器官中的多種細胞，如肝細胞、造血細胞和內皮細胞。肝、腎、脾和其它實質性器官是該病毒感染的靶器官。但能否在生殖器官、卵巢液或精液中檢測到EHNV，以及這些組織是否適用于種魚監(jiān)測尚不清楚。

2.6臨床癥狀

病魚可能會出現(xiàn)皮膚、魚鰭和鰓的損傷以及死亡。瀕死的魚表現(xiàn)為體位失衡，魚腮開張，體色沉暗。少數(shù)魚的肝、腎和脾會腫大。肝壞死部位表現(xiàn)為局灶性白色或黃色損傷。

2.7流行病學

2.7.1虹鱒。在自然狀態(tài)下，EHNV在虹鱒中感染率低，但感染后死亡率高。魚的日死亡率通常小于0.2%，總死亡率約為4%。所以，一方面，活的無癥狀的病毒攜帶者數(shù)量很少（<2%），從有癥狀的或者已經死亡的魚中檢測到EHNV的檢測率比較高。在疾病暴發(fā)期間，可從60%~80%瀕死或已死的魚中分離到EHNV。另一方面，因死亡率通常不高于魚場正常情況下的死亡率，故EHNV可存在于魚場而未被發(fā)現(xiàn)。

2.7.2河鱸。對EHNV非常敏感，在自然暴發(fā)時，各生長階段的河鱸均會發(fā)病死亡，因而容易被發(fā)覺。EHNV對河鱸魚群感染率很高，死亡率也很高，可使魚群數(shù)量急劇減少，甚至可導致野生魚群種類滅絕。但有時候也能從外表健康的成年河鱸中分離到EHNV。不過，由于該病毒在魚體內潛伏時間可長達28天，一些外表看似健康的魚可能正處于臨床發(fā)病前期。

2.8環(huán)境因素

2.8.1水溫。天然狀態(tài)下，虹鱒在11~20℃時可暴發(fā)該病。人工感染時，在19~21℃的水溫下，腹腔內注射接種EHNV，其潛伏期約3~10天，而在8~10℃的情況下則是14~32天。固河鱸發(fā)病大多發(fā)生在夏季。成年鱸魚在低于12℃的情況下不易感染。歐洲河鱸也呈現(xiàn)溫度依賴的易感性。

2.8.2其它因素。虹鱒自然暴發(fā)該病與管理不善有關，特別是與密度過高、水流量不足和喂食器具的污染有關，常常并發(fā)由原蟲和真菌引起的皮膚病和全身性細菌感染。損傷的皮膚可能提供了EHNV的入侵門戶。

2.9傳播媒介

2.9.1水。病毒能隨被感染的死魚組織的降解而進入水中。如虹鱒，EHNV可能隨感染的魚苗或運輸用水在魚場間蔓延。特別是它的低流行率和無癥狀帶毒，使病毒易于隨被交易的魚傳播。野生河鱸引起同一流域內連續(xù)多批虹鱒的再感染可能是養(yǎng)殖場每年暴發(fā)該病的原因。

2.9.2漁網(wǎng)、船及其它設備。

2.9.3釣魚愛好者的餌料。在垂釣時傳播。

2.9.4鳥類。它是EHNV的機械攜帶者，病毒可存在于鳥的內臟、羽毛、爪和喙中。食魚鳥采食了感染EHNV的河鱸后，其胃腸內容物中就可能含有EHNV。因禽類體溫一般在40~44℃，病毒在禽體內可能會失活。不過，EHNV可通過鳥類攝食后幾個小時內的反哺行為，隨食物傳播。

2.10疾病的地理分布

虹鱒EHNV感染僅發(fā)生在澳大利亞新南威爾士州的馬蘭比季河和肖爾黑文河流域的魚場。河鱸的EHN發(fā)病地區(qū)不連續(xù)地分布在澳大利亞東南部，在維多利亞州、新南威爾士州和澳大利亞首都地區(qū)，逐漸往馬蘭比季河流域的上游蔓延。在南澳洲的默里河呈相似的蔓延趨勢。

然而，由于極低的流行率和近似于自然死亡的死亡率，該病很容易被忽視或漏檢，因此實際流行范圍甚至國家都可能遠遠大于上述范圍。

2.11控制和預防

目前尚無預防該種疾病的疫苗，也未見針對該種疾病的化學治療方法。對魚卵和魚苗消毒在該病防控中的作用，目前尚不清楚。常規(guī)管理措施，如通過降低魚群養(yǎng)殖密度、提供合適水質、維持健康體質等來控制魚場養(yǎng)殖虹鱒的疾病，可以減少感染造成的損失。

3　危害因素的確定——風險識別

根據(jù)對病原和流行病學的分析，導致EHNV進入我國的可能因素有：敏感動物和非敏感動物包括活的（親魚、魚苗、食用魚、魚卵）、冰鮮的，冷凍的；其半熟制品，已加工制品；水、包裝物、運載工具、操作工具和人員等。

4　水產養(yǎng)殖業(yè)情況和有關動物檢疫政策

4.1我國現(xiàn)行的法律法規(guī)概述

2008年12月我國在新頒布的《一、二、三類動物疫病病種名錄》中首次將EHN列為二類動物疫病。2013年《中華人民共和國進境動物傳染病、寄生蟲病目錄》也首次將EHN列為二類傳染病。此前，無論是進出口檢疫還是國內水生動物疫病防疫，均沒有把該病列為監(jiān)測和檢疫對象。

農業(yè)部從2003年開始在全國范圍內對水生動物病害進行了大規(guī)模調查，并逐年增加監(jiān)測種類。現(xiàn)在已經把監(jiān)測對象增加到10個以上，但還沒有對EHN進行監(jiān)測。

2001年12月，農業(yè)部公布了《水產苗種管理辦法》，并于2011年3月發(fā)布了《魚類產地檢疫規(guī)程（試行）》等三個水生動物檢疫規(guī)程，要求對所有跨省運輸?shù)乃鷦游锩绶N進行檢疫，包括7種魚病、5種蝦病、5種貝病，但不包括EHN。

因此可以看出，我國目前對該病的控制力度比較輕，管理也不夠嚴格。

4.2國際規(guī)定

世界動物衛(wèi)生組織（OIE）一直將該病列為法定通報疫病?！禣IE水生動物法典》規(guī)定，EHNV的主要需要檢疫對象包括虹鱒，鱸魚和其它敏感魚種。如果從非無疫區(qū)出口活的敏感魚類，必須一直隔離到產下后代并檢測無EHNV。其理由是：檢疫條件必須有利于病原體的繁殖和最終的臨床表現(xiàn)。如果檢疫條件不適合病原的繁殖和發(fā)育（如水溫、潛伏期等），其診斷方法可能沒有足夠的敏感度來檢測EHNV低感染水平。

而對加工食用的敏感魚類，則要求對加工過程中產生的污水、廢物進行處理，確保滅活EHNV，或者以某種方式，防止污水與易感動物接觸。

在檢測技術方面，《OIE水生動物診斷試驗和疫病手冊》指出：由于該病流行性低但致死率高，因此即使在有個體發(fā)病的群體中，外表健康的虹鱒也幾乎檢不出EHNV。在實際情況下，EHNV只在臨床發(fā)病魚或死亡病例中檢測到。檢測時很容易漏檢而會誤認為該魚場未感染EHNV，因此推薦進行“常規(guī)死亡率檢測”。即堅持收集一定數(shù)量“正常死亡”或者瀕死的魚進行檢測，將大大提高檢出率。OIE首先推薦細胞分離培養(yǎng)病毒這一金標準，然后進行鑒定和確認。其次是應用有效的統(tǒng)計學方法取樣，也就是要取一定數(shù)量的樣品才能得到正確的結論。

4.3其他國際組織關于該病原的規(guī)定

亞太水產養(yǎng)殖中心（NACA）也一直將EHN列入亞太地區(qū)需要申報的水生動物疫病名錄。

4.4我國的水產養(yǎng)殖情況

我國是水產大國，其中養(yǎng)殖鱸魚約34萬噸，主要分布在廣東、浙江、安徽、江西、山東、四川等地 ；養(yǎng)殖鱒魚約2.9萬噸，主要分布在山東、北京、河北、甘肅、遼寧、四川等地。進口的活虹鱒主要是發(fā)眼卵和少量親魚，其它是冰凍和冰鮮魚產品。進口鱸魚較少。

國內的虹鱒和鱸魚的養(yǎng)殖戶對魚攜帶病毒的危害認識不足，很少有人主動關注這個威脅，漁戶很少有防止該病原進入的思維和概念。因此，在國家層面上，加強檢疫，避免EHNV進入我國是目前比較有效的預防措施。一旦EHNV進入我國，將迅速向各地擴散，必會造成養(yǎng)殖虹鱒和鱸魚的損失。

5　病原傳入、定殖、傳播和危害的可能性評估

5.1活的虹鱒（包括親魚、魚卵和魚苗）

虹鱒如果帶有病原，由于病毒在體內細胞中繁殖，體表消毒是無法消除的。同時，虹鱒的感染率極低，按照通常的抽樣和監(jiān)測很容易漏檢，因此傳入的風險很高。一旦傳入EHNV，通過水傳播，會造成疾病流行，因此存在很高的發(fā)生風險。由于該病毒對環(huán)境有較高的抵抗力，可以傳播到遠方水域，引起其它地方的虹鱒或者鱸魚發(fā)病。該病傳染性很強，一旦某個地區(qū)被劃為EHN疫區(qū)，不僅會嚴重影響當?shù)厮a養(yǎng)殖業(yè)，水產品出口也會受到限制，在經濟上、生產上都會造成很大的損失，必須加以嚴格控制。

5.2活的鱸魚（包括親魚、魚卵和魚苗）

由于鱸魚在自然狀態(tài)下的EHNV感染率很高，死亡率也很高，可導致魚群數(shù)量急劇減少，甚至可導致野生魚群滅絕，因而容易被發(fā)覺。只要隔離一段時間（28天）沒有發(fā)病，基本上就能排除感染的可能性。從這個角度看，傳入的風險相對較小，屬于中等風險。然而一旦病毒進入會迅速擴散，在廣大地區(qū)造成疾病流行，危害水產養(yǎng)殖業(yè)，而且會對出口帶來不利影響。因此仍屬于高風險因素，必須加以嚴格控制。

5.3其它活的敏感魚類（包括親魚、魚卵和魚苗）

根據(jù)OIE法典和手冊的介紹，能導致生病和死亡的敏感魚種有：鮰（Ictalurus melas）、鲇（Silurus glanis）、 大 菱鲆（Scophthalmus maximus）等。在實驗條件下對EHNV易感，甚至在浸泡感染后出現(xiàn)一定死亡的魚種有：澳洲麥氏鱸（Macquaria australasica）、澳洲銀鱸（Bidyanus bidyanus）、食蚊魚（Gambusia affinis）、山南乳魚（Galaxias olidus）、黑鮰（Ameirus melas）、梭子魚（Esox lucius） 等。

由于上述敏感魚種均不是我國養(yǎng)殖的品種，基本上沒有進口，所以病毒通過這些魚傳入的機會很少。但如果引進攜帶有EHNV的魚，同樣會有帶入病原的風險?？偟目磥韺儆谥卸蕊L險。由于這些敏感魚類通常不用來養(yǎng)殖，而是食用，進入養(yǎng)殖水域的機會很少，所以發(fā)生疫病的可能性較少，屬于中度風險。

5.4冰凍和冰鮮的敏感魚類

由于冰凍和冰鮮魚在死亡之前的狀況未知，有可能混入已經死亡的魚，所以這部分魚帶EHNV的風險更大。而且EHNV對環(huán)境的抵抗力較強，能在死魚體內長期存在。另外水產品的來源很難追溯，有可能是多個地方的魚的混合體，因此也有很高的傳入風險。但是，由于冰凍和冰鮮魚一般都用于食用或加工，和養(yǎng)殖水域接觸機會相對較少，所以對于僅僅用于人類食用的敏感魚類，發(fā)生的風險相對較低。對于用來加工成產品的敏感魚類，其風險主要來自加工后的廢水和廢棄物。如果廢棄物流入和養(yǎng)殖水域相同的水中，則同樣會有傳播疫病的風險。因此需要對其進行管理，屬于中等程度風險。

5.5用做鮮活餌料的魚類（野雜魚）

用于做鮮活餌料的野雜魚通常種類復雜，難以保證里面沒有對EHNV敏感的魚種。當魚被直接用來作為鮮活餌料時，由于其中的敏感魚有可能攜帶病毒，如果沒有經過殺毒處理直接喂魚，就會導致病毒擴散，存在傳播病原的較大風險。但由于在喂野雜魚的養(yǎng)殖魚類中對EHNV敏感的魚種不多，所以其風險不是很高，屬于中等程度的風險。

5.6敏感魚類的魚肉（指除掉頭和內臟的其余部分）

據(jù)報道，EHNV主要感染敏感魚的肝、腎、脾等，這些和其它實質性器官是該病毒感染的靶器官，在魚肉中沒有病毒。OIE在法典中明確指出：不管出口魚片或魚排（冷藏或冷凍）的國家和區(qū)域內EHN的狀況如何，主管部門都不需要了解有關EHN的任何情況。因此，該產品沒有攜帶病毒的可能性，傳入風險很低。這些魚雖然對EHNV敏感，但因為去掉了頭和內臟，僅僅留下不帶有病毒的魚肉，且是直接用于食用，因此傳播疫病的風險處于可接受的低水平。

5.7敏感魚加工后的產品

由于這類產品都經過一定條件的處理，其環(huán)境條件（主要是溫度）已經達到了能滅活EHNV的條件，即便在加工前帶有病毒，在加工后也不存在攜帶EHNV的任何可能性。因此無論是傳入病原、發(fā)生疾病和發(fā)生后果方面都屬于低風險的，沒有發(fā)生疾病的可能性，完全在可以接受的水平。

5.8其它非敏感魚類（包括活的和其它形式的產品）

非敏感魚類體內不會帶有EHNV，主要以機械形式攜帶病毒。除了活魚需要對從疫區(qū)來的水和魚進行常規(guī)消毒外，其它如冰凍、冰鮮魚類，魚肉和加工后的產品都是極低風險的，達到了可接受的水平。

5.9運輸活魚的水、包裝、運輸工具和用具等

來自疫區(qū)的活魚，特別是敏感魚，其隨魚運輸?shù)乃b、運輸工具和用具都可能攜帶病毒。而且EHNV對環(huán)境的耐受力比較強，能存活很長時間，所以有可能作為傳染源進入我國。但是來自非疫區(qū)的則沒有風險，所以其傳入風險不確定。由于總的風險不是很高，只要在對水和包裝等進行消毒后就可把風險降低到可以接受的水平。

6 風險管理方案

針對活的虹鱒等相關產品傳入、定殖、傳播和危害的可能性評估（表1），提出相應的風險管理方案（表2）。

表1　 相關產品的風險評估結論匯總

表2　 相關產品的風險管理方案

7 結論

EHN是一種對我國養(yǎng)殖虹鱒和鱸魚會帶來嚴重危害的一種病毒病，必須盡一切努力阻止該病傳入我國。風險分析結果顯示：傳入EHN的主要威脅是來自疫區(qū)的活的虹鱒和鱸魚。其次是冰凍和冰鮮的虹鱒和鱸魚。因此根據(jù)感染的特點采取不同的檢疫措施，才能有效控制攜帶有病毒的魚進入我國。對進口活的虹鱒，必須要求出口漁場進行二年以上的監(jiān)測，并實行對“自然死亡”的魚收集250尾以上進行檢查，才能得到可信的結論。而對進口活的鱸魚，則在出口漁場進行二年以上的監(jiān)測的基礎上，需要在進口后隔離28天。而對于其它敏感魚類（活的和冰凍、冰鮮的）的進口，由于仍存在一定程度風險，在不從疫區(qū)進口的前提下，還需要在進口后進行抽樣檢疫。

魚肉、加工后的制品以及其它非敏感魚類的進口，是低風險的，可以自由貿易。對運輸活魚的水、包裝等需要進行強制常規(guī)消毒，無需檢測。這些檢疫措施，是按照SPS的原則和科學原則提出來的，不僅能保障進口魚類對我國水產養(yǎng)殖的安全，也能把對國際貿易的消極影響降到了最低。

（責任編輯：朱迪國）

Imported Risk Analysis of Epizootic Haematopoietic Necrosis

Jiang Yulin，Wang Na，Zhang Min，Jing Hongli
（Chinese Academy of inspection and quarantine，Institute of Animal Quarantine，Aquatic Animal Disease Research Center，Beijing 100029）

Abstract：In order to identify the various possible factors of epizootic haematopoietic necrosis（EHN） entering to China，the different degrees of risks that might generated were assessed by etiological and epidemiological analysis. The results showed that major threats of EHN entering to China were from living oncorhynchus mykiss and perca fluviatilis in EHN epidemic area，followed from the frozen and iced oncorhynchus mykiss and perca fluviatilis. Only implementing different quarantine measures according to the infective characteristics，the risk of EHN virus entering to China from imported fish can be controlled effectively .

Key words：epizootic haematopoietic necrosis；imported risk analysis；epidemiological distribution；quarantine measures

中圖分類號：S941.41

文獻標識碼：A

文章編號：1005-944X（2016）07-0012-06

DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2016.07.005

基金項目：科技部支撐計劃 重大外來與新發(fā)水生動物疫病識別與監(jiān)測技術研究及示范（2013BAD12B02）