聞　明，田德明，楊小苗，懷建國

(蕪湖市第一人民醫(yī)院　1.婦產(chǎn)科；2.病理科，安徽　蕪湖　241001)

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·臨床醫(yī)學(xué)·

宮頸細(xì)胞DNA 定量分析在宮頸癌篩查中的應(yīng)用價(jià)值

聞明1，田德明1，楊小苗2，懷建國2

(蕪湖市第一人民醫(yī)院1.婦產(chǎn)科；2.病理科，安徽蕪湖241001)

【摘要】目的：探討宮頸細(xì)胞DNA定量分析在已婚婦女宮頸癌早期篩查中的作用和意義。方法：同時(shí)運(yùn)用細(xì)胞DNA定量分析技術(shù)與液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測(TCT)技術(shù)對(duì)已婚婦女進(jìn)行宮頸癌篩查，檢查結(jié)果陽性的患者給予陰道鏡下宮頸活檢進(jìn)行病理確診。結(jié)果：1000例婦女行宮頸細(xì)胞DNA定量分析共查出DNA倍體異常者188例(18.8%)，其中DNA異倍體1～2個(gè)101例，DNA異倍體≥3個(gè)87例，經(jīng)宮頸活檢病理診斷，DNA異倍體者確診宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅰ～Ⅲ級(jí)共121例，宮頸癌12例，細(xì)胞DNA定量分析檢測宮頸病變(CIN-Ⅲ及以上)的靈敏度為89.3%，特異度為18.5%，陽性預(yù)測值為13.3%，陰性預(yù)測值為92.5%；1000例婦女同時(shí)行液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測，查出異常者共65例(6.5%)，經(jīng)活檢病理診斷，液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查異常者確診宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅰ～Ⅲ級(jí)27例，宮頸癌4例，液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測宮頸病變(CIN-Ⅲ及以上)的靈敏度為32.1%，特異度為72%，陽性預(yù)測值為13.8%，陰性預(yù)測值為88.3%。結(jié)論：宮頸細(xì)胞DNA定量分析靈敏度高于TCT，有助于宮頸癌及癌前病變的早期發(fā)現(xiàn)。

【關(guān)鍵詞】子宮頸癌；細(xì)胞DNA定量；液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測；組織學(xué)活檢

【DOI】10.3969/j.issn.1002-0217.2016.04.020

子宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，全世界每年約有新發(fā)病例50萬，我國約14萬，占總數(shù)的1/3，且年輕化傾向十分明顯[1]。由于宮頸癌有一個(gè)可逆的、較長的癌前病變期，故而是目前唯一可以早期發(fā)現(xiàn)并可能治愈的婦科惡性腫瘤[2]。因此，宮頸癌的防治關(guān)鍵在于及時(shí)篩查盡早發(fā)現(xiàn)癌前病變。我院2014年開展宮頸細(xì)胞DNA定量分析聯(lián)合液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測進(jìn)行宮頸癌篩查共1000例，研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞DNA定量分析靈敏度高于TCT，有一定臨床應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)總結(jié)如下。

1資料與方法

1.1研究對(duì)象選取2014年1～12月在我院就診婦女1000名，年齡20～79歲，受檢者均無宮頸疾病史，檢查前3 d否認(rèn)性生活、用藥及陰道沖洗史，均自愿進(jìn)行檢查[宮頸細(xì)胞DNA定量分析及液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測(thinprep cytology test，TCT)]。

1.2研究方法

1.2.1標(biāo)本采集與制備由經(jīng)治醫(yī)師使用宮頸刷在受檢者宮頸鱗柱狀上皮交界處行單向旋轉(zhuǎn)3圈以上收集脫落細(xì)胞，將收集細(xì)胞連同采樣刷頭置入盛有保存液的標(biāo)本瓶中，由病理科技術(shù)人員使用液基薄層細(xì)胞制片儀將標(biāo)本制備成直徑2 cm的薄層細(xì)胞涂片2張，經(jīng)95%乙醇固定約15～30 min，1張予以巴氏染色，TCT檢測；1張予以Feulgen染色，經(jīng)細(xì)胞DNA定量分析，常規(guī)保存標(biāo)本瓶1年。TCT的細(xì)胞保存液為泰普醫(yī)藥有限公司產(chǎn)品，巴氏染色需3 d完成；細(xì)胞DNA定量分析細(xì)胞保存液為麥克奧迪(廈門)醫(yī)療診斷系統(tǒng)有限公司產(chǎn)品，全自動(dòng)細(xì)胞定量分析儀為同一公司產(chǎn)品，做Feulgen染色，需5 d完成。

1.2.2病理檢查凡宮頸TCT檢測在無明顯診斷意義的不典型鱗狀細(xì)胞(atypical squamous cell of undetermined significance,ASCUS)及以上級(jí)別者或DNA定量分析結(jié)果提示倍體異常的婦女，均予陰道鏡檢查，同時(shí)于宮頸可疑部位進(jìn)行4點(diǎn)以上的組織活檢，活檢病例共228例。病理診斷順次為正常、炎癥、CIN-Ⅰ、CIN-Ⅱ、CIN-Ⅲ(原位癌)及浸潤癌，以病理結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法統(tǒng)計(jì)學(xué)分析運(yùn)用SPSS 18.0軟件，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1細(xì)胞DNA定量分析受檢細(xì)胞與正常細(xì)胞的DNA含量進(jìn)行比較的值為細(xì)胞DNA指數(shù)(DI)，宮頸正常細(xì)胞的DNA指數(shù)大多為1，增殖周期為DNA整倍體，沒有異倍體峰出現(xiàn)，而腫瘤細(xì)胞的DI?！?.5，增殖周期為非整倍體，如果宮頸有少數(shù)DNA異倍體時(shí)，DI仍可為1，即形成異倍體單峰，但有大量異倍體出現(xiàn)時(shí)，則DI≥2.5，即形成異倍體雙峰。因此，進(jìn)行細(xì)胞核DNA含量測定，可用于判斷宮頸癌前病變及宮頸癌的客觀指標(biāo)。

本研究中1000例患者共查出DNA倍體異常者188例(18.8%)，DNA 1～2個(gè)異倍體101例，DNA≥3個(gè)異倍體87例，見圖1。

A：正常DNA；b：1個(gè)異倍體；c：2個(gè)異倍體；d：3個(gè)異倍體；e：4個(gè)異倍體。

圖1宮頸細(xì)胞核圖像及DI值

2.2TCT使用TBS分類法，1000例患者行TCT，異常者共65例(6.5%)，其中ASCUS 44例，高度鱗狀上皮內(nèi)病變(high squamous intraepithelial lesion,HSIL)11例，低度鱗狀上皮內(nèi)病變(low squamous intraepithelial lesion,LSIL)10例。

2.3病理診斷DNA倍體異常者或TCT異常者均予陰道鏡檢查及宮頸活檢，結(jié)果見表1、2。將CIN-Ⅰ級(jí)及以上病變均列為陽性，比較DNA異倍體1～2個(gè)及≥3個(gè)患者活檢病理結(jié)果，發(fā)現(xiàn)前者101位病例中活檢病理陽性55例，而后者87位病例中陽性78例，見表3。

表1DNA倍體異常者宮頸活檢病理結(jié)果

項(xiàng)目正?；蜓装YCIN-ⅠCIN-ⅡCIN-Ⅲ浸潤癌合計(jì)例數(shù)5573351312188比率/%29.2638.8318.626.916.38100

表2TCT異常者宮頸活檢病理檢測結(jié)果

項(xiàng)目正?；蜓装YCIN-ⅠCIN-ⅡCIN-Ⅲ浸潤癌合計(jì)例數(shù)341665465比率/%52.3124.629.237.696.15100

表3DNA異倍體1～2個(gè)與≥3個(gè)患者宮頸活檢病理檢測結(jié)果比較

項(xiàng)目正常或炎癥CIN-ICIN-ⅡCIN-Ⅲ浸潤癌合計(jì)異倍體1～2個(gè)46371152101比率/%45.5436.6310.894.951.98100異倍體≥3個(gè)9421881087比率/%10.3448.2820.699.2011.49100

2.4TCT將ASCUS以上病變均列為陽性，DNA倍體定量分析將1個(gè)異倍體以上列為陽性,兩種方法結(jié)果比較，后者檢出率高于前者，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，見表4。以宮頸活檢病理結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，228例活檢病例中，發(fā)現(xiàn)28例CIN-Ⅲ及以上級(jí)別的宮頸疾病，16例為CIN-Ⅲ，12例為浸潤性宮頸癌。若將ASCUS定為篩查后需活檢的標(biāo)準(zhǔn)，TCT檢測宮頸病變(CIN-Ⅲ及以上)的靈敏度為32.1%，特異度為72%，陽性預(yù)測值為13.8%，陰性預(yù)測值為88.3%。若將DNA異倍體≥1個(gè)以上定為篩查后需活檢的標(biāo)準(zhǔn)，細(xì)胞DNA定量分析檢測宮頸病變(CIN-Ⅲ及以上)的靈敏度為89.3%，特異度為18.5%，陽性預(yù)測值為13.3%，陰性預(yù)測值為92.5%。若將DNA異倍體≥3個(gè)定為篩查后需活檢的標(biāo)準(zhǔn)，檢測宮頸病變(CIN-Ⅲ及以上)的靈敏度為64.3%，特異度為65.5%，陽性預(yù)測值為20.7%，陰性預(yù)測值為92.9%，比較結(jié)果分析見表5、6。

表4TCT與細(xì)胞DNA定量分析比較

項(xiàng)目陽性陰性陽性率/%χ2PTCT659356.568.460.00DNA定量細(xì)胞學(xué)檢測18881218.8

表5TCT與DNA異倍體≥1個(gè)以上檢測宮頸病變(CIN-Ⅲ及以上)的統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析

%

表6TCT與DNA異倍體≥3個(gè)檢測宮頸病變(CIN-Ⅲ及以上)的統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析

%

比較數(shù)據(jù)可得出，細(xì)胞DNA定量分析靈敏度明顯高于TCT，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，若將異倍體≥1個(gè)以上定為篩查后需做活檢的標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，特異度低于TCT(P<0.05)，而將異倍體≥3個(gè)定為篩查后需做活檢的標(biāo)準(zhǔn)則特異度升高，與TCT相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由此，更多宮頸癌早期患者可被發(fā)現(xiàn)，得到確診和治療，同時(shí)因篩查陽性而需做活檢的病例數(shù)也會(huì)有所上升。我們會(huì)繼續(xù)擴(kuò)大樣本采集并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

3討論

宮頸癌是嚴(yán)重影響婦女生活質(zhì)量的常見婦科癌癥[3-4]，宮頸細(xì)胞從感染到病變直至發(fā)展為宮頸癌需3至15年[5-6]，因此早期篩查、診斷及治療，將其阻斷在癌前病變階段，在防治宮頸癌工作中起著極其重要的作用[7]。宮頸細(xì)胞DNA定量分析即通過液基制片、Feulgen染色，最后經(jīng)掃描系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)胞DNA定量分析。正常細(xì)胞DNA指數(shù)大多為1，腫瘤細(xì)胞?！?.5，通過對(duì)細(xì)胞核內(nèi)DNA含量或倍體的測定即可判斷細(xì)胞的生理狀態(tài)或病理改變，因此，測定細(xì)胞核DNA含量，可作為判斷宮頸癌前病變及宮頸癌的客觀依據(jù)。宮頸癌早期篩查使用DNA定量分析技術(shù)，國外早已有大量報(bào)道[8]，在北美及歐洲已作為常規(guī)檢查之一[9]。

我們通過TCT、宮頸細(xì)胞DNA定量分析兩種方法在宮頸癌篩查中的應(yīng)用價(jià)值比較，結(jié)果顯示：細(xì)胞DNA定量分析靈敏度高于TCT，而將細(xì)胞DNA異倍體≥3個(gè)定為活檢標(biāo)準(zhǔn)則特異度也會(huì)明顯升高，由此篩查出宮頸癌高危人群做進(jìn)一步確診，并提示該群體是重點(diǎn)隨訪對(duì)象，我們應(yīng)該繼續(xù)進(jìn)行跟蹤與診治，預(yù)防宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展。

綜上所述，在宮頸細(xì)胞惡變過程中，DNA含量的改變較形態(tài)學(xué)變化要早，故此，DNA定量分析是早期篩查宮頸癌前病變及宮頸癌的有力手段，相對(duì)宮頸活檢而言，具有取樣簡單、無損傷、操作簡便[10]等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)采用該項(xiàng)技術(shù)進(jìn)行宮頸癌篩查也有效解決了在基層開展大規(guī)模普查往往缺乏應(yīng)有的技術(shù)和有經(jīng)驗(yàn)的細(xì)胞學(xué)醫(yī)生的問題，成本效益合理，可考慮作為適合基層大規(guī)模婦女普查宮頸癌一種篩查方法予以推廣。

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文章編號(hào)：1002-0217(2016)04-0371-04

基金項(xiàng)目：衛(wèi)生部醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展研究中心基金項(xiàng)目(W2013GJ44)

收稿日期：2015-09-24

作者簡介：聞明(1975-)，女，副主任醫(yī)師，(電話)15357882072，(電子信箱)1948497833@qq.com；

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】【中圖號(hào)】R 737.33A

Application value of cell DNA quantitative analysis to cervical cancer screening

WEN Ming，TIAN Deming，YANG Xiaomiao，HUAI Jianguo

Department of Obstetrics & Gynecology,Wuhu No.1 People′s Hospital,Wuhu 241001,China

【Abstract】Objective：To investigate the clinical significance of applying cell DNA quantitative analysis to early screening of cervical cancer in married women.Methods:Both automated quantitative image cytometry and thinprep cytology test (TCT) were randomLy performed to screen for early cervical cancer in the married women.Patients with positive findings were undergone cervical biopsy under the colposcope for following pathological verification.Results:In 1000 women received cervical cell DNA quantitative measurements,abnormal DNA ploid was detected in 188(18.8%),in whom the heteroploid occurred between one and two in 101,and equal to or greater than three in 87.Pathological examination of the cervical biopsies in cases with heteroploidy cells indicated that 121 were cervical intraepithelial neoplasia (CIN) Ⅰ-Ⅲ,and 12 were cervical cancer.Cervical cell DNA quantitative analysis screening cervical lesion(CIN III and above) indicated that the sensitivity,specificity,positive predictive value(PPV) and negative predictive value (NPV) was 89.3%,18.5%,13.3% and 92.5%,respectively.TCT was also applied to 1000 women and revealed abnormal cell in 65 cases(6.5%).Following pathology verified that 27 cases were CIN Ⅰ-Ⅲ and 4 cervical cancer.The sensitivity,specificity,PPV and NPV in screening cervical lesion(CIN III and above)by TCT 32.1%,72%,13.8% and 88.3%,respectively.Conclusion:Cervical cell DNA quantitative analysis may reveal higher sensitivity than TCT.The findings suggest that this technique can be more competent in early detection of cervical cancer and precancerous lesions in married women.

【Key words】cervical cancer；cell DNA quantitative analysis;Thinprep cytology test；biopsy

懷建國，男，副主任醫(yī)師，(電子信箱)478205286@qq.com，通信作者.