梁麗霞，肖　燕，高　瑋

(廣東省深圳市南山區(qū)計(jì)劃生育服務(wù)中心檢驗(yàn)科　518052)

?

HPV L1殼蛋白表達(dá)與宮頸上皮瘤變及HPV分型的關(guān)系*

梁麗霞，肖燕，高瑋

(廣東省深圳市南山區(qū)計(jì)劃生育服務(wù)中心檢驗(yàn)科518052)

摘要:目的分析HPV L1殼蛋白的表達(dá)與宮頸上皮病變的關(guān)系及其在HPV分型中的分布情況。方法對(duì)4 320例婦女進(jìn)行宮頸液基細(xì)胞學(xué)(LCT)和HPV分型檢測(cè)，對(duì)LCT≥無(wú)明確診斷意義的非典型鱗狀上皮細(xì)胞(ASC-US)或HPV陽(yáng)性者行HPV L1檢測(cè)，并對(duì)LCT≥ASC-US且HPV陽(yáng)性者行陰道鏡下組織病理學(xué)檢查。結(jié)果對(duì)LCT≥ASC-US或HPV陽(yáng)性者(共401例)進(jìn)行HPV L1檢測(cè)，HPV L1陽(yáng)性率為34.9%(140/401)。對(duì)LCT≥ASC-US且HPV陽(yáng)性者129例進(jìn)行組織病理學(xué)檢查，LCT與組織病理學(xué)診斷符合率為79.2%。HPV L1在LCT診斷為ASC-US、低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)、高度鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)的患者中陽(yáng)性率分別為40.2%(29/72)、69.2%(18/26)、9.0%(2/22)。386例HPV感染者中，單一型別感染率居前四位的是HPV52、58、16、18型，其HPV L1陽(yáng)性率分別為53.3%、28.9%、12.2%、5.6%。結(jié)論HPV L1陽(yáng)性率隨宮頸病變級(jí)別增高呈下降趨勢(shì)，LCT聯(lián)合HPV L1檢測(cè)可為宮頸病變預(yù)后判定提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞:人乳頭瘤病毒；HPV L1殼蛋白；宮頸上皮內(nèi)病變；基因分型

流行病學(xué)和分子生物學(xué)研究已證明人乳頭瘤病毒(HPV)感染是發(fā)生宮頸癌的直接原因和必要因素，但感染HPV的女性并不全都發(fā)展為宮頸癌或相關(guān)病變[1]。臨床研究顯示HPV感染具有自限性，約90%的感染者能清除HPV而自愈，僅有不到10%的HPV感染者發(fā)展為明確病變[2]。HPV是一類對(duì)皮膚及黏膜上皮細(xì)胞具有特殊嗜性的雙鏈環(huán)狀DNA病毒，能合成一系列蛋白質(zhì)，包括自身結(jié)構(gòu)蛋白和致瘤蛋白。HPV L1蛋白是HPV的主要衣殼蛋白，由HPV DNA的晚期基因轉(zhuǎn)錄區(qū)L1編碼合成，為晚期蛋白，與病毒的增殖有關(guān)，近年來(lái)國(guó)外一些研究發(fā)現(xiàn)HPV Ll蛋白具有增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答的功能，是一個(gè)判定預(yù)后的標(biāo)記物[3-4]。本項(xiàng)目旨在研究HPV L1殼蛋白的表達(dá)與HPV分型及宮頸上皮病變的關(guān)系，探討HPV L1殼蛋白表達(dá)在宮頸癌篩查中的作用，為宮頸病變預(yù)后判斷提供參考和借鑒。

1資料與方法

1.1一般資料從2015年1～6月來(lái)深圳市南山區(qū)計(jì)劃生育服務(wù)中心進(jìn)行宮頸癌篩查的4 320例婦女(有性生活史、年齡在19～65歲)進(jìn)行宮頸液基細(xì)胞學(xué)(LCT)和HPV分型檢測(cè)，對(duì)LCT≥無(wú)明確診斷意義的非典型鱗狀上皮細(xì)胞(ASC-US)或HPV陽(yáng)性者行HPV L1檢測(cè)，并對(duì)LCT≥ASC-US且HPV陽(yáng)性者行陰道鏡下組織病理學(xué)檢查。

1.2標(biāo)本采集要求篩查人員避開(kāi)月經(jīng)期，最好在經(jīng)期過(guò)后3～5 d，檢查前3 d避免性生活、陰道上藥和陰道沖洗，檢查時(shí)先排尿。使用一次性宮頸脫落細(xì)胞采集器，將其放入宮頸口處，單方向旋轉(zhuǎn)4～5周以獲得足量的上皮細(xì)胞標(biāo)本，取出后放入液基細(xì)胞保存液中。

1.3方法

1.3.1HPV分型檢測(cè)通過(guò)攝取、擴(kuò)增、雜交(采用PCR-反向點(diǎn)雜交技術(shù))、洗膜、顯色和讀片等步驟檢測(cè)23種基因(高危型HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82，低危型HPV6、11、42、43、81、83)，檢測(cè)試劑盒由亞能生物技術(shù)公司提供。

1.3.2LCT檢測(cè)采用深圳長(zhǎng)海益生物科技有限公司生產(chǎn)的細(xì)胞保存液，采用美國(guó)進(jìn)口的AutouCyte PRE液基細(xì)胞系統(tǒng)進(jìn)行制片，采用TBS報(bào)告系統(tǒng)進(jìn)行判斷。

1.3.3HPV L1檢測(cè)試劑來(lái)源于美國(guó)愛(ài)迪旺思醫(yī)療賽泰-細(xì)胞/組織人乳頭瘤染色試劑盒，HPV L1診斷以免疫組織/細(xì)胞化學(xué)技術(shù)和非同位素標(biāo)記核酸分子雜交技術(shù)為基礎(chǔ)，同時(shí)采用核酸水平和免疫水平雙重檢測(cè)人乳頭瘤病毒殼蛋白(HPV L1)，僅有1個(gè)被染色的細(xì)胞核呈紅色即可作出陽(yáng)性診斷(見(jiàn)圖1)。

圖1　　　　　免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)HPVL1殼蛋白陽(yáng)性細(xì)胞(10×10)

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，雙側(cè)檢驗(yàn)水平α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1HPV L1殼蛋白在宮頸上皮內(nèi)病變及組織病理學(xué)檢查中的表達(dá)情況4 320例篩查人群中，對(duì)LCT≥ASC-US或HPV陽(yáng)性者共401例進(jìn)行HPV L1檢查，其中LCT≥ASC-US且HPV陽(yáng)性者129例，單一HPV陽(yáng)性者257例，單一LCT≥ASC-US者15例。LCT≥ASC-US且HPV陽(yáng)性者129例中，ASC-US 72例、不典型鱗狀細(xì)胞不除外高度病變(ASCUS-H) 9例、低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)26例、高度鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)22例，其組織病理學(xué)診斷為炎癥者45例，宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(CIN)1～3級(jí)者分別有46、24、14例，不同組織病理學(xué)診斷結(jié)果患者中，HPV L1陽(yáng)性率分別為37.8%(17/45)、63.0%(29/45)、12.5%(3/24)、7.1%(1/14)。根據(jù)組織病理學(xué)檢查結(jié)果上、下相差一級(jí)為符合的原則，宮頸細(xì)胞學(xué)與組織病理檢查結(jié)果總符合率為79.2%(38/48)，低度病變與高度病變的符合率分別為73.1%與86.3%。在LCT診斷為ASC-US、LSIL、HSIL的患者中，HPV L1表達(dá)率分別為40.2%(29/72)、69.2%(18/26)、9.0%(2/22)，三者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1；組織病理學(xué)結(jié)果為炎癥、CIN1級(jí)、CIN2級(jí)、CIN3級(jí)的患者中，HPV L1表達(dá)率分別為37.8%、63.0%、12.5%、7.1%，四者間差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表1　　129例不同LCT病變級(jí)別患者HPV L1表達(dá)情況[n(%)]

表2　　129例不同LCT病變級(jí)別患者的組織病理學(xué)檢查及HPV L1表達(dá)情況(n)

2.2HPV L1蛋白在HPV不同亞型之間的表達(dá)情況4 320例篩查人群中，HPV陽(yáng)性386例，感染率為8.94%，單一型別感染311例，占80.6%(311/386)，合并感染75例，占19.4%(75/386)。單一型別感染中，感染率居前四位的亞型是HPV52、58、16、18型，共269例，占69.7%。HPV L1殼蛋白在上述4種亞型中的表達(dá)情況見(jiàn)表3。HPV52、58、16、18型感染者中，HPV L1陽(yáng)性者共有90例，陽(yáng)性率為33.4%(90/269)；HPV16、18型的HPV L1陽(yáng)性率明顯低于HPV52、58型(P<0.05)，提示HPV16、18型感染者宮頸惡性病變的傾向性更強(qiáng)。

表3　　HPV52、58、16、18型感染者中HPV L1的分布[n(%)]

3討論

高危型HPV感染是宮頸癌的主要致病因素。宮頸HPV感染是普遍存在的，但大多數(shù)可以自愈，有文獻(xiàn)報(bào)道，約60%的HPV感染可以在1年內(nèi)被自身免疫系統(tǒng)清除，90%可以在3年內(nèi)被清除[5]。HPV L1殼蛋白為HPV的主要?dú)さ鞍祝巧a(chǎn)HPV疫苗的主要抗原，HPV L1殼蛋白表達(dá)與HPV的早期復(fù)制和感染密切相關(guān)，但在病毒整合到宿主DNA上以后逐漸消失，而HPV整合到宿主DNA上是引發(fā)宮頸惡性病變的重要環(huán)節(jié)[6]。

129例LCT≥ASC-US且HPV陽(yáng)性患者的HPVL1陽(yáng)性在ASC-US、ASCUS-H、LSIL、HSIL分別為40.3%、11.1%、69.2%、9.1%；其對(duì)應(yīng)的組織病理學(xué)中的陽(yáng)性率在炎癥、CIN1級(jí)、CIN2級(jí)、CIN3級(jí)分別為37.8%、63.0%、12.5%、7.1%，同樣顯示HPVL1的陽(yáng)性率隨著病變級(jí)別的升高呈下降趨勢(shì)。這與國(guó)內(nèi)張佳立等[7]研究結(jié)果相符合。表明體內(nèi)有HPVL1的存在，病變有被自身免疫清除的可能，對(duì)于存在ASC-US、LSIL等宮頸病變而HPVL1呈陽(yáng)性的患者，是否可以暫不做創(chuàng)傷性的檢查與過(guò)度治療，而作為跟蹤

隨訪的對(duì)象，為探討宮頸癌篩查的手段提供更合理的建議。

在386例HPV陽(yáng)性人群中，單一型別HPV感染居前四位的是HPV52、58、16、18型，共269例，占69.7%(269/386)，4種亞型單一感染例數(shù)分別為134、60、51、24例，HPV52、58亞型的感染例數(shù)明顯高于HPV16、18型，這與國(guó)內(nèi)其地方報(bào)道HPV16型感染最多不符，這可能與HPV區(qū)域性感染不一有關(guān)；其對(duì)應(yīng)HPV L1陽(yáng)性表達(dá)率分別為53.3%、28.9%、12.2%、5.6%。HPV52、58型感染者中HPV L1陽(yáng)性率明顯高于HPV16、18型。HPV16、18型導(dǎo)致宮頸惡性病變的傾向高于HPV52、58型，這與國(guó)內(nèi)報(bào)道相符[8]。

綜上所述，HPV L1檢測(cè)聯(lián)合LCT和HPV分型不僅能了解機(jī)體HPV的感染狀態(tài)，還能了解機(jī)體的免疫狀態(tài)。HPV L1的陽(yáng)性率都隨病變級(jí)別的增加而呈下降趨勢(shì)，提示HPV L1的表達(dá)有重要的預(yù)測(cè)價(jià)值；而且檢測(cè)宮頸病變脫落細(xì)胞中HPV L1蛋白不需重新取材，可直接在LCT涂片上染色，操作簡(jiǎn)單，敏感性高，穩(wěn)定性好，有望成為預(yù)測(cè)宮頸病變程度及惡性進(jìn)展趨勢(shì)的生物學(xué)標(biāo)志物。

參考文獻(xiàn)

[1]郎景和．婦科手術(shù)筆記[M]．北京：中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社，2001．

[2]Nobbenhuis MA,Walboomers JM,Helmerhorst TJ,et al.Relation of human papillomavirus status to cervical lesions and consequences for cervical-cancer screening:a prospective study[J].Lancet,1999,354(9172):20-25.

[3]Mehlhorn G,Obermann E,Negri G,et al.HPV L1 detection discriminates cervical precancer from transient HPV infection:a prospective international multicenter study[J].Mod Pathol,2013,26(7):967-974.

[4]Xiao W,Bian ML,Ma L,et al.Immunochemical analysis of human papillomavirus L1 capsid protein in Liquid-Based cytology samples from cervical lesions[J].Acta Cytol,2010,54(5):661-667.

[5]Forcier M,Musacchio N.An overview of human papillomavirus infection for the dermatologist:disease,diagnosis,management,and prevention[J].Dermatol Ther,2010,23(5):458-476.

[6]Melsheimer P,Kaul S,Dobeck S,et al.Immunocytochemical detection of HPV high-risk type L1 capsid proteins in LSIL and HSIL as compared with detection of HPV L1 DNA[J].Acta Cytol,2003,47(2):124-128.

[7]張佳立，郜紅藝，張江宇，等．宮頸液基細(xì)胞HPV L1殼蛋白表達(dá)的臨床意義[J]．診斷病理學(xué)雜志，2010，17(6)：456-459．

[8]彭雅亞,許淑媛,金霞,等.宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌與HPV16、18關(guān)系的研究[J].標(biāo)記免疫分析與臨床,2010,17(1):48-49.

* 基金項(xiàng)目：廣東省深圳市南山區(qū)衛(wèi)計(jì)委科研項(xiàng)目(南科研衛(wèi)2014014號(hào))。

作者簡(jiǎn)介：梁麗霞，女，主管檢驗(yàn)技師，主要從事臨床檢驗(yàn)研究。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.14.017

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)14-1944-03

(收稿日期：2016-01-20修回日期：2016-04-11)

Relationship of HPV L1 capsid protein expression with cervical squamous imtraepithelial lesiong and HPV typing*

LIANGLixia，XIAOYan，GAOWei

(DepartmentofClinicalLaboratory,FamilyPlanningServiceCenterofNanshanDistrict,Shenzhen,Guangdong518052,China)

Abstract:ObjectiveTo analyze the relation between HPV L1 capsid protein expression with cervical squamous intraepithelial lesions and its distribution situation in HPV typing.Methods A total of 4 320 women were performed the liquid based cytology test(LCT) and HPV typing.The cases of LCT ≥ no diagnostic sense of atypical squamous epithelial cells(ASC-US) or HPV positive were performed the HPV L1 detection.Then the cases of LCT ≥ASC-US and HPV positive were performed the colposcopic histopathological examination.ResultsA total of 401 cases of LCT≥ASC-US or HPV positive were performed the HPV L1 detection,the HPV L1 positive rate was 34.9%(140/401).One hundred and twenty-nine cases of LCT ≥ASC-US and HPV positive were performed the histopathological examination,the coincidence rate of LCT and histopathological examination was 79.2%.The positive rates of HPV L1 in ASC-US,LSIL and HSIL by LCT were 40.2%(29/72),69.2%(18/26) and 9.0%(2/22)respectively.Among 386 cases of HPV infection,the top 4 of single genotype infection were HPV 52,58,16 and 18,their HPV L1 positive rates were 53.3%,28.9%,12.2% and 5.6% respectively.ConclusionThe HPV L1 positive rate shows the decreasing trend with the cervical lesion grade increase.LCT combined with HPV L1 detection can provide reference basis for judging the prognosis of cervical lesion.

Key words:HPV；HPV L1 capsid protein;cervical squamous intraepithelial lesions;genotype