翟少偉 史慶超 陳學(xué)豪

（集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院， 廈門 361021）

飼料中添加抗菌肽Surfactin對吉富羅非魚腸道健康的影響

翟少偉 史慶超 陳學(xué)豪

（集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院， 廈門 361021）

為研究飼料中添加抗菌肽Surfactin對吉富羅非魚（GIFT， Oreochromis niloticus）腸道健康指標(biāo)的影響， 實驗將平均體重為（12.01±0.03） g/尾的320尾吉富羅非魚， 隨機分為4組， 每組4個重復(fù)， 每個重復(fù)20尾魚， 分別投喂抗菌肽Surfactin添加水平為0（對照組）、50、100和200 mg/kg的試驗飼料7周。結(jié)果顯示： 與對照組相比， 吉富羅非魚飼料中添加抗菌肽Surfactin可使腸道皺襞高度顯著增加（P＜0.05）， 肌層厚度無顯著變化（P＞0.05）； 大腸桿菌數(shù)量顯著降低（P＜0.05）， 乳酸桿菌數(shù)量顯著增加（P＜0.05）， 細(xì)菌總數(shù)無顯著變化（P＞0.05）； 顯著提高腸道總抗氧化能力水平、谷胱甘肽過氧化物酶活性和超氧化物歧化酶活性（200 mg/kg抗菌肽添加組除外）（P＜0.05）， 顯著降低腸道丙二醛水平（P＜0.05）， 對過氧化氫酶活性無顯著影響（P＞0.05）； 吉富羅非魚腸道健康指標(biāo)以50 mg/kg抗菌肽Surfactin添加組最佳。試驗表明， 吉富羅非魚飼料中適量添加抗菌肽Surfactin可增加腸道皺襞高度、調(diào)節(jié)腸道菌群和提高腸道抗氧化能力而改善腸道健康狀態(tài)。

抗菌肽； 吉富羅非魚； 腸道健康

近年來， 抗菌肽（Antimicrobial peptides， AMPs）作為飼用抗生素替代品的研究與應(yīng)用成為飼料添加劑研究領(lǐng)域的熱點之一。目前， 應(yīng)用于水產(chǎn)動物飼料的抗菌肽主要從動物中提取或基因重組表達所得， 對水產(chǎn)動物的生長或免疫能力具有明顯效果［1—3］。而微生物自然分泌的抗菌肽類物質(zhì)報道較少。隨著該領(lǐng)域研究的不斷深入， 微生物源AMPs的高效抗菌作用越來越引起人們的重視［4］。Surfactin是芽孢桿菌屬不同菌株次級代謝產(chǎn)生的一種脂肽類物質(zhì)， 不僅具有廣譜抗菌作用， 而且對病毒、支原體和原蟲等也有抑制效果； 因其還具有很強的表面活性作用， 又被稱為表面活性素［5—7］。研究表明， 抗菌肽Surfactin添加到飼料中， 可提高羅非魚（Oreochromis niloticus）腸道消化酶活性， 改善血液生化指標(biāo)， 調(diào)節(jié)脂肪代謝， 改善肝胰臟功能， 提高生長性能［8—11］；可提高中華鱉（Pelodiscus sinensis）稚鱉增重率， 調(diào)節(jié)血液生化指標(biāo)［12］。此外， NT-6抗菌脂肽（Surfactin、Fengycin和Iturin混合物）可促進凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）生長， 提高機體免疫， 抑制養(yǎng)殖水體病原菌增殖［13， 14］。但還鮮見抗菌肽Surfactin對水產(chǎn)動物腸道健康影響的報道。腸道健康是水產(chǎn)動物健康養(yǎng)殖的關(guān)鍵， 其對于機體的整體健康起到非常重要的作用， 腸道病變往往引起魚體其他器官（如肝胰臟）的損傷和功能障礙， 進而影響自身健康和水環(huán)境“健康”［15， 16］。通過測定腸道對營養(yǎng)物質(zhì)消化、腸道生長發(fā)育、腸道黏膜免疫、腸道微生態(tài)、腸道黏膜屏障等方面的生理生化指標(biāo)可反映水產(chǎn)動物的腸道健康狀況［15—19］。鑒于此， 本試驗旨在通過吉富羅非魚飼料中添加不同水平的抗菌肽Surfactin， 研究腸道消化酶活性、腸道細(xì)菌數(shù)量以及腸道抗氧化能力等腸道健康指標(biāo)的變化， 為其在漁用飼料中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與 試驗設(shè)計

試驗用魚為吉富羅非魚， 購于福建省漳州市水產(chǎn)開發(fā)中心。暫養(yǎng)2周后， 將320尾健康健壯、均重為（12.01±0.03） g的吉富羅非魚隨機分為4組， 每組4個重復(fù)， 每個重復(fù)20尾魚， 對照組飼喂基礎(chǔ)飼料，其他組分別飼喂在基礎(chǔ)飼料中添加50、100和200 mg/ kg抗菌肽Surfactin的試驗飼料， 試驗期為7周。

1.2 試驗飼料

基礎(chǔ)飼料根據(jù)SC/T 1025-2004《羅非魚配合飼料》標(biāo)準(zhǔn)［20］配制， 其組成和營養(yǎng)水平見表 1（風(fēng)干基礎(chǔ)）。根據(jù)試驗設(shè)計的添加水平， 在基礎(chǔ)飼料中添加抗菌肽Surfactin（由福建正源飼料有限公司提供，有效含量為80%）制作試驗飼料。各種飼料原料經(jīng)粉碎后過篩， 混合均勻后加工成3 mm直徑的顆粒飼料， 室溫自然風(fēng)干后于-20℃冷藏保存。

表 1 基礎(chǔ)飼料組成及營養(yǎng)水平Tab. 1 The ingredients and nutrient levels of the basal diet

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗魚飼養(yǎng)于開有循環(huán)系統(tǒng)的養(yǎng)殖室水族箱內(nèi)， 水族箱體積約為100 L， 規(guī)格為120 cm×60 cm× 70 cm。試驗用水為曝氣自來水， 光源為自然光源。水族箱水溫保持在22—28℃， pH 7.4±0.3， 溶氧度大于7.0 mg/L， 氨氮濃度小于0.2 mg/L。每天分別在07：00、13：00和19：00定時飽食投喂， 每次投喂量為魚體重的3.0%—5.0%。每次投喂30min后， 用虹吸管吸取剩余飼料和糞便， 每日的換水量約為30%。試驗過程中用增氧機持續(xù)增氧。試驗期間，吉富羅非魚生長正常， 成活率為100%。

1.4 樣品采集與組織勻漿的制備

試驗魚于試驗結(jié)束后禁食24h， 對每缸所有魚稱重并記錄總重， 每缸隨機取6尾， 用適量濃度的丁香酚麻醉， 解剖試驗魚分離腸道， 除去腸道粘連的脂肪， 并用冷卻的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.86%生理鹽水沖洗干凈， 裝于凍存管中保存于-80℃冰箱內(nèi)， 用于腸道抗氧化指標(biāo)的測定。另外每缸隨機撈取6尾魚， 其中3尾用于腸道細(xì)菌的培養(yǎng)與計數(shù)， 剩余3尾用于腸道組織形態(tài)切片的觀察。

從-80℃冰箱中取出腸道組織樣品置于冰上解凍， 制備10%的組織勻漿液。剪取1—3 g腸道組織，用冰浴過的生理鹽水漂洗去除組織上的血液， 用濾紙拭干后稱重， 再放入勻漿玻璃管中， 按組織∶生理鹽水=1∶9加入0.86%冰冷生理鹽水， 用勻漿機進行勻漿（10s/次， 間隙30s）， 連續(xù)勻漿3—5次。最后把制備好的組織勻漿在4℃離心機下離心（3000 r/min，10min）， 所得上清液分裝到離心管中以備測定。

1.5 測定指標(biāo)及方法

腸道組織切片制作及有關(guān)指標(biāo)測定 腸道組織切片的制作參考翟秋玲等［17］的方法并略作修改， 主要步驟如下： 將試驗魚腸道樣品用PBS沖洗干凈后， 取前腸中間部分0.5 cm， Bouin氏液（飽和苦味酸水溶液75 mL+甲醛25 mL+冰醋酸5 mL）固定24h， 取出后置于75%的酒精中浸泡， 更換數(shù)次以去除樣品中苦味酸的黃色， 然后經(jīng)乙醇溶液（70%—85%—95%—100%）梯度洗脫， 二甲苯透明， 石蠟包埋， 在室溫下切成6 μm的切片， 蘇木精-伊紅（HE）染色， 封片。每個腸道樣品取5張切片， 每個切片選取5個完整、走向平直的腸皺襞位置， 采用光學(xué)顯微鏡（奧林巴斯BX80-JPA）拍照， 于200倍下測量5腸皺襞高度及肌層厚度， 而后使用Image-pro plus 6.0圖像分析軟件進行圖像數(shù)據(jù)測量。

腸道細(xì)菌的培養(yǎng)與計數(shù) 腸道菌群樣品采集參考楊偉［19］的方法并略作修改， 具體操作如下：用蒸餾水沖洗魚體表面， 拭干， 再用酒精棉球擦拭魚體表消毒。用已滅菌的解剖工具打開試驗魚腹腔， 取出腸道， 酒精擦拭腸道外部， 并以磷酸鹽緩沖溶液（PBS， pH=7.3）沖洗腸道2—3次去除內(nèi)容物， 保留腸壁樣品， 置于無菌離心管內(nèi)。超凈工作臺上稱取腸道樣品0.5 g左右， 并以1∶9的質(zhì)量體積比加入預(yù)先配好的無菌PBS， 冰浴中用滅菌勻漿器5000 r/ min充分勻漿， 制成腸道原液， 然后進行梯度稀釋至10-7稀釋液。取適宜梯度稀釋液各100 μL， 分別涂布在準(zhǔn)備好的選擇性培養(yǎng)基MRS培養(yǎng)基、EMB 培養(yǎng)基和TTC培養(yǎng)基平板上（培養(yǎng)基均購自廣州環(huán)凱微生物科技有限公司）， 每個稀釋度每種培養(yǎng)基做兩個重復(fù)， 然后將涂布好的平板置于28℃恒溫生化培養(yǎng)箱（科力儀器PYX-250 S-B）中培養(yǎng)24—48h。培養(yǎng)結(jié)束后， 選取細(xì)菌生長疏密適當(dāng)、菌落清晰的平板進行計數(shù)， 并將結(jié)果換算成每克樣品中菌落數(shù)的對數(shù)值log10 CFU/g 進行統(tǒng)計分析。

腸道抗氧化指標(biāo) 腸道總抗氧化能力（Total antioxidant capacity， T-AOC）、過氧化氫酶（Catalase，CAT）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathion peroxide，GSH-Px）活性及丙二醛（Malondialdehyde， MDA）水平等指標(biāo)均采用南京建成生物工程技術(shù)研究所生產(chǎn)的試劑盒進行測定， 測定步驟詳見說明書。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，使用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析（One-way ANOVA）， 采用Duncan's法進行多重比較， P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 不同水平抗菌肽Surfactin 對吉富羅非魚腸道組織形態(tài)的影響

表 2 飼料中添加抗菌肽Surfactin對吉富羅非魚腸道皺襞高度和肌層厚度的影響Tab. 2 Effects of dietary AMPs-surfactin supplementation on intestinal tract folds height and muscular thickness of GIFT

由表 2可以看出， 各抗菌肽添加組羅非魚腸皺襞高度顯著高于對照組（P＜0.05）， 50 mg/kg添加組腸皺襞高度顯著高于100和200 mg/kg添加組（P＜0.05），各處理組肌層厚度無顯著差異（P＞0.05）。

2.2 不同水平抗菌肽Surfactin 對吉富羅非魚腸道菌群的影響

表 3 飼料中添加抗菌肽Surfactin對吉富羅非魚腸道微生物數(shù)量的影響Tab. 3 Effects of dietary AMPs-surfactin supplementation on intestinal tract microflora of GIFT （lg CFU/g）

由表 3可知， 與對照組相比， 各抗菌肽添加組大腸桿菌數(shù)量顯著降低（P＜0.05）， 乳酸菌數(shù)量顯著增加（P＜0.05）； 隨抗菌肽添加水平的升高， 大腸桿菌數(shù)量呈先降低后升高的趨勢， 50 mg/kg添加組數(shù)量最少， 顯著低于100和200 mg/kg添加組（P＜0.05）； 乳酸菌數(shù)量呈先升高后降低趨勢， 50 mg/kg添加組數(shù)量最高， 顯著高于100和200 mg/kg添加組（P＜0.05）。各處理組腸道總菌數(shù)無顯著差異（P＞0.05）。

2.3 不同水平抗菌肽Surfactin 對吉富羅非魚腸道抗氧化能力的影響

由表 4可知， 各抗菌肽添加組吉富羅非魚腸道T-AOC水平和GSH-Px活性均顯著高于對照組（P＜0.05）， 50 mg/kg添加組T-AOC水平顯著高于100和200 mg/kg添加組（P＜0.05）， 50和100 mg/kg添加組GSH-Px活性顯著高于對照組和200 mg/kg添加組（P＜0.05）， 且50和100 mg/kg添加組間GSH-Px活性無顯著差異（P＞0.05）。50和100 mg/kg添加組腸道SOD活性顯著高于對照組（P＜0.05）； 200 mg/kg添加組和對照組之間、50和100 mg/kg添加組間無顯著差異（P＞0.05）。各抗菌肽添加組的腸道MDA含量均顯著降低（P＜0.05）， 50 mg/kg添加組MDA含量最低， 顯著低于對照組和200 mg/kg添加組（P＜0.05）。各處理組腸道CAT活性無顯著差異（P＞0.05）。

3 討論

3.1 抗菌肽Surfactin 對吉富羅非魚腸道組織形態(tài)的影響

小腸是魚類營養(yǎng)物質(zhì)吸收的主要場所， 腸道的皺襞及絨毛不僅在營養(yǎng)物質(zhì)吸收方面起著重要作用， 而且其隨著腸蠕動而劇烈強有力的擺動， 有助于排斥腸壁上有害物質(zhì)的定植， 其對腸道功能的維持以及腸道健康狀況至關(guān)重要。腸黏膜的肌層厚度反映腸道收縮能力的強弱， 其肌層厚度增加使得腸道收縮力增強， 有助于腸道食糜的混勻、消化和排空［21， 22］。

表 4 飼料中添加抗菌肽Surfactin對吉富羅非魚腸道抗氧化能力的影響Tab. 4 Effects of dietary AMPs-surfactin supplementation on antioxidant ability in intestinal tract of GIFT

在本試驗中， 吉富羅非魚飼料添加抗菌肽Surfactin可使腸皺襞的高度顯著增加， 且50 mg/kg添加組顯著高于其他添加組， 說明添加一定水平的抗菌肽Surfactin對腸皺襞絨毛的生長發(fā)育具有促進作用。研究表明， AMPs可以促進腸道上皮細(xì)胞的增殖和胞外基質(zhì)蛋白生成， 修復(fù)腸道損傷［23， 24］； 提高腸道上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞和杯狀細(xì)胞的數(shù)量， 提高腸道的免疫屏障功能［22］； 還可優(yōu)化腸道菌群結(jié)構(gòu)， 改善腸道微生態(tài)， 對腸道發(fā)育也有重要的作用［7， 23， 24］。

3.2 抗菌肽Surfactin對吉富羅非魚腸道菌群的影響

研究表明， 在飼料中添加適宜劑量的AMPs可以促進動物腸道中乳酸桿菌、雙歧桿菌等有益菌的增殖， 降低腸道中大腸桿菌的數(shù)量［24， 25］。本試驗結(jié)果表明， 飼料中添加抗菌肽Surfactin可顯著增加吉富羅非魚腸道中乳酸菌數(shù)量， 降低大腸桿菌數(shù)量，而不影響腸道總菌數(shù)量。表明抗菌肽Surfactin能夠抑制魚類腸道有害菌， 促進腸道有益菌的增殖， 從而改善腸道微生態(tài)， 促進腸道健康。目前， 大多學(xué)者認(rèn)為Surfactin的抗菌活性與其表面活性作用密切相關(guān)， 可通過攻擊病原菌細(xì)胞膜， 造成膜崩解或滲透壓失衡而發(fā)揮抑菌作用［5， 6］； 此外， Surfactin還能通過抑制蛋白質(zhì)合成胞內(nèi)代謝酶的活性， 影響病原菌正常代謝和增殖［5—7］。

3.3 抗菌肽Surfactin 對吉富羅非魚腸道抗氧化能力的影響

在正常生理情況下， 動物體內(nèi)自由基處于一種產(chǎn)生和清除的動態(tài)平衡狀態(tài)。SOD、CAT和GSHPx是機體內(nèi)清除自由基的主要抗氧化酶， 可減少脂質(zhì)過氧化損傷， 維持機體自由基的動態(tài)平衡狀態(tài)。T-AOC 可以反映機體的總抗氧化水平， 它通過分解體內(nèi)過氧化物， 阻斷過氧化鏈， 來清除體內(nèi)自由基和活性氧。MDA是自由基與脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)的主要產(chǎn)物， 其含量多少可以間接反映機體的脂質(zhì)過氧化程度和自由基產(chǎn)生情況［26］。

研究表明， 枯草芽孢桿菌Y-6產(chǎn)生的抗菌肽（活性成分為Surfactin、伊枯草菌素和豐原素）是一種高效的抗氧化劑， 可清除O2-、OH-和H2O2等自由基， 抑制MDA生成［27］。在本研究中， 適量添加抗菌肽Surfatin提高了腸道SOD、GSH-Px活性以及TAOC水平， 降低了MDA水平。這與我們研究Surfactin對吉富羅非魚肝胰臟抗氧化指標(biāo)影響的結(jié)果類似［11］。Surfactin提高機體抗氧化能力的作用也在小鼠［28］和肉仔雞［29］中得到證實。Surfactin提高動物抗氧化能力的機制可能是： （1）通過提高有益菌數(shù)量， 降低有害菌數(shù)量， 減少自由基生成。益生菌具有較強的抗氧化功能， 其能夠釋放SOD、GSHPx和巰基化合物等抗氧化物質(zhì)， 清除周圍的活性氧和自由基， 減少脂質(zhì)抗氧化損傷［30］； 此外， 有害菌的減少還可以降低內(nèi)毒素的積累， 降低誘發(fā)氧衍 生為自由基的可能性［31］。（2）其分子中含有疏水性氨基酸， 如亮氨酸和纈氨酸可與氧結(jié)合或抑制脂質(zhì)中氫的釋放， 促進肽鏈與脂肪酸之間的相互作用， 從而延緩脂質(zhì)過氧化鏈反應(yīng)［5， 6， 32］； （3）通過分子內(nèi)的谷氨酸和天冬氨酸與Fe2+、Fe3+和Cu2+等金屬離子螯合， 可降低金屬離子的催化活性和氧化反應(yīng)速度，減少自由基生成［28］。值得注意的是腸道MDA水平隨著Surfactin添加水平升高有所上升， 這可能與Surfactin發(fā)揮表面活性作用的方式有關(guān)［33， 34］， 也可能與抗菌肽類物質(zhì)具有一定的抗原性有關(guān)［5， 6， 24］， 具體原因還有待查明。

在本試驗中， 吉富羅非魚腸道健康指標(biāo)狀況并未隨抗菌肽Surfactin水平的增加而得到進一步的改善。這與本課題組研究其對吉富羅非魚生長性能、血液生化指標(biāo)、脂肪代謝指標(biāo)和肝胰臟生理生化指標(biāo)的影響， 以及對中華鱉稚鱉增重率和血液生化指標(biāo)作用的結(jié)果類似， 即超過適量添加水平的抗菌肽Surfactin對試驗動物的作用效果無顯著提高［8—12］。這可能主要與抗菌肽Surfactin的表面活性有關(guān)。研究表明， Surfactin的多種生物學(xué)活性以表面活性作用為基礎(chǔ)。當(dāng)發(fā)揮表面活性作用時， 其乳化效果與用量直接相關(guān)， 在臨界膠束濃度以下時，其乳化能力隨著用量的增加而增加； 但超過臨界膠束濃度后， 乳化性能趨于穩(wěn)定， 即使加大用量， 乳化效果也不會有太大變化［33， 34］。

4 小結(jié)

在飼料中添加抗菌肽Surfactin可提高吉富羅非魚腸道皺襞高度， 調(diào)節(jié)腸道菌群， 提高腸道抗氧化能力， 而改善吉富羅非魚腸道健康狀態(tài)。在本試驗條件下， 50 mg/kg的抗菌肽Surfactin即可對吉富羅非魚腸道健康指標(biāo)產(chǎn)生有益影響。

［1］Peng K S， She R P， Yang Y R， et al. Anti-adherence of antibacterial peptides and oligosaccharides and promotion of growth and disease resistance in tilapia ［J］. Asian-Australasian Journal of Animal Sciences， 2007， 20（4）：569—576

［2］Zhou X X， Wang Y B， Li W F. Effect of feeding apidaecin on common carp （Cyprinus carpio） growth performances and immune function ［J］. Aquaculture， 2008， 279：108—112

［3］Shi Q C. The effects of dietary surfactin supplementation on the growth and intestinal health of GIFT strain of Nile tilapia （Oreochromis niloticus） ［D］. Thesis for Master of Science. Jimei University. Xiamen. 2015 ［史慶超. 抗菌肽Surfactin對吉富羅非魚生長及腸道健康的影響. 碩士學(xué)位論文， 集美大學(xué). 廈門. 2015］

［4］Hassan M， Kjos M， Nes I F， et al. Natural antimicrobial peptides from bacteria： characteristics and potential applications to fight against antibiotic resistance ［J］. Journal of Applied Microbiology， 2012， 113（4）： 723—736

［5］Seydlova G， Svobodova J. Review of surfactin chemical properties and the potential biomedical applications ［J］. Central European Journal of Medicine， 2008， 3（2）：123—133

［6］Chen W C， Juang R S， Wei Y H. Applications of a lipopeptide biosurfactant， surfactin， produced by microorganisms ［J］. Biochemical Engineering Journal， 2015，103： 158—169

［7］Zhai S W， Li J， Shi Q C. Antimicrobial lipopeptide surfactin： antimicrobial activity and applications ［J］. Chinese Journal of Animal Nutrition， 2015， 27（5）： 1333—1340［翟少偉， 李劍， 史慶超. 抗菌脂肽Surfactin的抗菌活性及應(yīng)用. 動物營養(yǎng)學(xué)報， 2015， 27（5）： 1333—1340］

［8］Shi Q C， Lu J J， Lu P， et al. Effects of antimicrobial lipopeptides supplementation on growth performance and intestinal digestive enzyme activities of genetic improvement of farmed tilapia （GIFT， Oreochromis niloticus） ［J］. Journal of Feed Industry， 2014， 35（12）： 6—10 ［史慶超，盧俊姣， 陸鵬， 等. 飼料中添加抗菌脂肽對吉富羅非魚生長性能和腸道消化酶活性的影響. 飼料工業(yè)， 2014，35（12）： 6—10］

［9］Zhai S W， Li J， Sun X W. Effects of surfactin supplementation on growth performance， serum biochemical indexes and lipid metabolism of genetically improved farmed tilapia （Oreochromis niloticus） ［J］. Chinese Journal of Animal Nutrition， 2015， 27（12）： 3959—3967［翟少偉， 李劍， 孫秀文. 飼料中添加表面活性素對吉富羅非魚生長性能、血清生化指標(biāo)及脂肪代謝的影響.動物營養(yǎng)學(xué)報， 2015， 27（12）： 3959—3967］

［10］Zhai S W， Shi Q C， Lu P， et al. Effects of different types of antimicrobial lipopeptides supplementation on the weight gain rate， serum biochemical indexes and non-specific immune ability of GIFT strain of Nile tilapia （Oreochromis niloticus） ［J］. Guangdong Agriculture Science，2015， （21）： 129—133 ［翟少偉， 史慶超， 陸鵬， 等. 不同抗菌脂肽添加物對吉富羅非魚增重率、血清生化指標(biāo)和非特異性免疫指標(biāo)的影響. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2015， （21）：129—133］

［11］Zhai S W， Li J， Chen X H et al. Effect of dietary surfactin supplementation on some physiological-biochemical parameters in hepatopancreas of GIFT tilapia ［J］. Feed Research， 2015， （23）： 46—48， 54 ［翟少偉， 李劍， 陳學(xué)豪，等. 飼料中添加表面活性素對羅非魚肝胰臟生理生化指標(biāo)的影響.飼料研究， 2015， （23）： 46—48， 54］

［12］Zhai S W， Shi Q C， Sun P X， et al. Effect of dietary surfactin supplementation on weight gain rate and blood biochemical parameters of juvenile chinese soft-shelled turtle （Pelodiscus sinensis） ［J］. Feed China， 2015， （22）： 39—41［翟少偉， 史慶超， 孫培新， 等. 表面活性素對中華鱉稚鱉增重率及血液生化指標(biāo)的影響. 飼料廣角， 2015， （22）：39—41］

［13］Shi G J， Sun L J， Wang Y L， et al. Effects of antibacterial lipopeptides produced by Bacillus subtilis NT-6 in solidstate fermentation on growth performance and non-specific immunity of Litopenaeus vannamei ［J］. Guangdong Agriculture Science， 2014， （22）： 99—102， 108 ［石廣舉，孫力軍， 王雅玲， 等. 納豆芽孢桿菌NT-6 抗菌脂肽對凡納濱對蝦生長性能及非特異性免疫指標(biāo)的影響. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2014， （22）： 99—102， 108］

［14］Shi G J， Sun L J， Wang Y L， et al. Effects of NT-6 antimicrobial lipopeptide on growth performance of Litopenaeus vannamei and Vibrio number during breeding process ［J］. Guangdong Agriculture Science， 2014， （12）：119—122 ［石廣舉， 孫力軍， 王雅玲， 等. NT-6抗菌脂肽對凡納濱對蝦生長性能及養(yǎng)殖源頭弧菌數(shù)的影響. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2014， （12）： 119—122］

［15］Zhou X Q. Relationship between Nutrient and Fish In-testi- nal Health ［A］. In： Liu J X （Eds.）， Advanced Research in Animal Nutrition （2012 edition） ［C］. Beijing：China Agriculture Science and Technology. 2012，246—260 ［周小秋. 營養(yǎng)物質(zhì)與魚腸道健康的關(guān)系. 見：劉建新， 動物營養(yǎng)研究進展（012年版）. 北京： 中國科學(xué)技術(shù)出版社. 2012， 246—260］

［16］Mi H F， Sun R J， Zhang L， et al. Research progress of fish intestinal health ［J］. China Feed， 2015， （15）： 19—22 ［米海峰， 孫瑞健， 張璐，等.魚類腸道健康研究進展. 中國飼料， 2015， （15）： 19—22］

［17］Zhai Q L， Zhang C X， Sun Y Z， et al. Effects of tributyrin and mannan-oligosaccharide on growth performance，body composition and intestinal health indices of tawny puffer （Takifugu flavindus） ［J］. Chinese Journal of Animal Nutrition， 2014， 26（8）： 2197—2208 ［翟秋玲， 張春曉， 孫云章， 等. 三丁酸甘油酯和甘露寡糖對菊黃東方鲀生長性能、體組成及腸道健康指標(biāo)的影響. 動物營養(yǎng)學(xué)報， 2014， 26（8）： 2197—2208］

［18］Wang M Q， Huang X L， Jin M， et al. Improvement effect of dietary plant essential oil on growth performance and intestinal health of Litopenaeus vannamei ［J］. Chinese Journal of Animal Nutrition， 2015， 27（4）： 1163—1171［王猛強， 黃曉玲， 金敏， 等. 飼料中添加植物精油對凡納濱對蝦生長性能及腸道健康的改善作用. 動物營養(yǎng)學(xué)報， 2015， 27（4）： 1163—1171］

［19］Yang W. Effects of dietary amylase/amylopectin ratios on the growth， feed utilization and intestinal health of tilapia，Oreochromis niloticus ［D］. Thesis for Master of Science. Jimei University. Xiamen. 2012 ［楊偉. 飼料中直鏈/支鏈淀粉比對羅非魚生長、飼料利用及腸道健康的影響.碩士學(xué)位論文， 集美大學(xué). 廈門. 2012］

［20］The Ministry of Agriculture of the People's Republic of China. SC/T 1025—2004 Formulated Feed of Tilapia ［S］. China Standard Press. 2004 ［中華人民共和國農(nóng)業(yè)部. SC/T 1025—2004羅非魚配合飼料. 北京： 中國標(biāo)準(zhǔn)出版社. 2004］

［21］Zheng Y H， Peng C， Wu X F， et al. Effects of hydrolyzed yeast on growth performance， lipids metabolism and intestinal structure of largemouth bass （Micropterus salmoides） ［J］. Chinese Journal of Animal Nutrition， 2015，27（5）： 1605—1612 ［鄭銀樺， 彭聰， 吳秀峰， 等. 酵母酶解物對大口黑鱸生長性能、脂類代謝及腸道組織結(jié)構(gòu)的影響. 動物營養(yǎng)學(xué)報， 2015， 27（5）： 1605—1612］

［22］Li Y L， Gao Q P， Shuai K， et al. Effects of soybean meal replacement by fermented soybean meal on growth performance and intestinal tissue structure of common carp （Cyprinus carpio） ［J］. Chinese Journal of Animal Nutrition， 2015， 27（2）： 469—475 ［李云蘭， 高啟平， 帥柯， 等.發(fā)酵豆粕替代豆粕對鯉魚生長性能和腸道組織結(jié)構(gòu)的影響. 動物營養(yǎng)學(xué)報， 2015， 27（2）： 469—475］

［23］Ostaff M J， Stange E F， Wehkamp J. Antimicrobialpeptides andgutmicrobiota in homeostasis and pathology ［J］. Embo Molecular Medicine， 2013， 5（10）：1465—1483

［24］Wang S， Thacker P A， Watford M， et al. Functions of antimicrobial peptides in gut homeostasis ［J］. Current Protein and Peptide Science， 2015， 16： 582—591

［25］Xiao H， Shao F Y， Wu M M， et al. The application of antimicrobial peptides as growth and health promoters for swine ［J］. Journal of Animal Science and Biotechnology，2015， 6（1）： 19

［26］Wu K， Huang X S， Jin J N， et al. Effects of feeding with faba bean （Vicia faba） on the antioxidant capability and immune functions of grass carp （Cenopharyngodon idellu） ［J］. Acta Hydrobiologica Sinica， 2015， 39（2）：250—258 ［吳康， 黃曉聲， 金潔南， 等. 飼喂蠶豆對草魚抗氧化能力及免疫機能的影響. 水生生物學(xué)報， 2015，39（2）： 250—258］

［27］Zhang J， Ding H Y， Qi X Y， et al. Antioxidant activities in vitro of antimicrobial peptide produced by Bacillus subtilis Y-6 ［J］. Journal of Nuclear Agricultural Sciences，2011， 25（3）： 518—522， 558 ［張捷， 丁韓英， 戚向陽， 等.枯草芽孢桿菌Y-6產(chǎn)抗菌肽的體外抗氧化效果研究. 核農(nóng)學(xué)報， 2011， 25（3）： 518—522， 558］

［28］Yal??n E， ?avu?oglu K. Structural analysis and antioxidant activity of a biosurfactant obtained from Bacillus subtilis RW-I ［J］. Turkish Journal of Biochemistry Turk Biyokimya Dergisi， 2010， 35（3）： 243—247

［29］Du H M， Lu Z X， Wang T. Effect of antimicrobial peptides on antioxidant capacity and biochemical indicators in broilers ［J］. Animal Husbandry and Veterinary Medicine， 2010， 42（6）： 8—13 ［都海明， 陸兆新， 王恬. 抗菌脂肽對肉雞抗氧化能力及血清生化指標(biāo)的影響. 畜牧與獸醫(yī)， 2010， 42（6）： 8—13］

［30］Wang J B， Chu J L， Qi L L， et al. The relationship between probiotics and animal intestinal free radical ［J］. Chinese Journal of Animal Nutrition， 2014， 26（12）：3545—3549 ［王進波， 初佳麗， 齊莉莉， 等. 益生菌與動物腸道自由基的關(guān)系. 動物營養(yǎng)學(xué)報， 2014， 26（12）：3545—3549］

［31］Wang T， Du H M， Lu Z X. Advance of antimicrobial lipopeptide and its application in animal production ［A］. In： Liu J X （Eds.）， Advanced Research in Animal Nutrition （2012 edition） ［C］. Beijing： China Agriculture Science and Technology. 2012， 327—337 ［王恬， 都海明， 陸兆新. 抗菌脂肽及其在動物生產(chǎn)中的應(yīng)用研究進展. 見：劉建新， 動物營養(yǎng)研究進展（2012年版）. 北京： 中國科學(xué)技術(shù)出版社. 2012， 327—337］

［32］Xiao M Z， Jin X B， Zhu J Y. Antioxidant mechanism and application prospective of antibacterial peptides ［J］. Food Science， 2010， 31（11）： 312—315 ［肖明珠， 金小寶， 朱家勇. 抗菌肽抗氧化作用機制及其應(yīng)用前景. 食品科學(xué)，2010， 31（11）： 312—315］

［33］Li Y， Zou A H， Ye R Q， et al. Effects of molecular struc-ture on surfactin micellization activity ［J］. Acta Physico-Chimica Sinica， 2011， 27（5）： 1128—1134 ［李翌， 鄒愛華，葉汝強， 等. 表面活性素分子結(jié)構(gòu)對其膠束化行為的影響. 物理化學(xué)學(xué)報， 2011， 27（5）： 1128—1134］

［34］Sahnoun R， Mnif I， Fetoui H， et al. Evaluation of Bacillus subtilis SPB1 lipopeptide biosurfactant toxicity towards mice ［J］. International Journal of Peptide Research and Therapeutics， 2014， 20（3）： 333—340

EFFECT OF DIETARY ANTIMICROBIAL PEPTIDES-SURFACTIN SUPPLEMENTATION ON PARAMETERS OF INTESTINAL HEALTH INDICES OF GENETICALLY IMPROVED FARMED TILAPIA （GIFT， OREOCHROMIS NILOTICUS）

ZHAI Shao-Wei， SHI Qing-Chao and CHEN Xue-Hao
（Fisheries College of Jimei Univeristy， Xiamen 361021， China）

A 7-week feeding trial was conducted to evaluate effects of antimicrobial peptides-surfactin on intestinal health indices of genetically improved farmed tilapia （GIFT， Oreochromis niloticus）. Three hundred and twenty fish with initial average weight of （12.01±0.12） g were randomly divided into four treatment groups with four replicates and 20 fish in each replicate. The fish were fed experimental diets supplemented with 0 （control group）， 50， 100， and 200 mg/kg antimicrobial peptides-surfactin， respectively. Surfactin supplementation increased intestinal folds height of GIFT （P＜0.05）， but did not impact the muscular thickness （P＞0.05）. Surfactin supplementation significantly decreased the number of Escherichia coli of GIFT （P＜0.05） and significantly increased the number of Lactobacillus （P＜0.05）. There was no significant difference in the total bacterial number among all treatment groups （P＞0.05）. Surfactin supplementation significantly increased the total antioxidant capacity level and activities of glutathion peroxidase and superoxide dismutase （except 200 mg/kg Surfactin supplementation group） （P＜0.05） but significantly decreased the content of malondialdehyde （P＜0.05）. Surfactin supplementation had no effect on catalase activity （P＞0.05）. The intestinal health parameters of 50 mg/kg antimicrobial peptides-surfactin supplementation group were the best among all supplementation groups. In conclusion， surfactin supplementation at 50 mg/kg could improve intestinal health status of GIFT by increasing the intestinal folds height and regulating intestinal microbial population and antioxidant ability.

Antimicrobial peptides； Genetically improved farmed tilapia； Intestinal health

S963

A

1000-3207（2016）04-0823-07

10.7541/2016.106

2015-12-29；

2016-01-11

“十二五”農(nóng)村領(lǐng)域國家科技計劃課題“功能性肽產(chǎn)品的創(chuàng)制與應(yīng)用”（2013BAD10B03）資助 ［Supported by Key Project of National Science and Technology R&D Program During the Twelfth Five-Year Plan Period “Development and Application of Functional Peptide Products”（2013BAD10B03）］

翟少偉 （1973—）， 男， 河北晉州人； 博士， 副教授； 主要研究方向為動物營養(yǎng)與飼料資源開發(fā)。E-mail： shaoweizhai@163.com