李文良，高　亮

(1.山東省東營(yíng)市廣饒縣中醫(yī)院兒科，山東 東營(yíng) 257300;2.廣饒縣婦女兒童醫(yī)院兒科，郵編，257300)

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CD4+T細(xì)胞及淋巴細(xì)胞亞群在小兒哮喘與肺炎中的水平及臨床意義

李文良1，高亮2

(1.山東省東營(yíng)市廣饒縣中醫(yī)院兒科，山東 東營(yíng) 257300;2.廣饒縣婦女兒童醫(yī)院兒科，郵編，257300)

[摘要]目的探究CD4+T細(xì)胞及淋巴亞群在小兒哮喘與肺炎中的水平及臨床意義。方法選取東營(yíng)市廣饒縣中醫(yī)院兒科自2013年9月至2015年9月收治的34例哮喘患兒作為哮喘組,33例肺炎患兒作為肺炎組，另選擇同時(shí)期的正常體檢小兒30例作為對(duì)照組，3組均在早晨空腹情況下抽取靜脈血5mL，并于3小時(shí)內(nèi)進(jìn)行標(biāo)本處理，后采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)外周血中CD4+T細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子T細(xì)胞輔助細(xì)胞(Th)1、Th2、Th17及外周血中CD4+CD25+FOXP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的水平。結(jié)果與對(duì)照組相比，哮喘組CD4+CD25+FOXP3+、CD4+IL-4+Th1及CD4+IL-17+Th17細(xì)胞百分比均增加明顯，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為5.34、5.89、6.11，均P<0.05)。與對(duì)照組相比，肺炎組CD4+CD25+FOXP3+細(xì)胞百分比降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.56，P<0.05)。與肺炎組相比，哮喘組CD4+CD25+FOXP3+、CD4+IL-4+Th1、CD4+IL-17+Th17細(xì)胞百分比均增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為6.12、6.45、6.39，均P<0.05)。與對(duì)照組相比，哮喘組淋巴細(xì)胞水平降低，單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞水平升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為5.34、5.26、5.19，均P<0.05)。與對(duì)照組相比，肺炎組單核細(xì)胞水平升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.99，P<0.05)。與肺炎組相比，哮喘組嗜酸性粒細(xì)胞水平升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.29，P<0.05)。結(jié)論CD4+T細(xì)胞及淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)在診斷與鑒別小兒哮喘與肺炎疾病時(shí)具有重要臨床意義，為臨床治療提供參與依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]CD4+T細(xì)胞；淋巴細(xì)胞亞群；小兒哮喘；小兒肺炎

小兒哮喘及肺炎作為小兒呼吸系統(tǒng)常見(jiàn)病，其發(fā)生發(fā)展均受到了免疫系統(tǒng)的影響，隨著對(duì)T細(xì)胞輔助細(xì)胞(Th)17研究的不斷深入，人們開(kāi)始將CD4+T細(xì)胞分為4個(gè)亞群，分別為T(mén)h1、Th2、Th17及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，并發(fā)現(xiàn)以上4類(lèi)亞群在小兒免疫系統(tǒng)方面起到了重要作用，其中Th1及Th2免疫反應(yīng)可能對(duì)氣道產(chǎn)生保護(hù)作用或促進(jìn)過(guò)敏反應(yīng)、炎癥的發(fā)生[1-2]。為了解CD4+及淋巴細(xì)胞亞群在小兒哮喘及肺炎中水平的異同，我們對(duì)此展開(kāi)研究，并將結(jié)果總結(jié)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1研究對(duì)象

選取東營(yíng)市廣饒縣中醫(yī)院兒科自2013年9月至2015年9月収治的34例哮喘患兒作為哮喘組及33例肺炎患兒作為肺炎組，哮喘組中男20例，女14例，年齡在3至8歲之間，平均年齡為(5.9±1.3)歲，肺炎組中男22例，女11例，年齡在4至7歲之間，平均年齡為(5.5±1.5)歲。納入及排除標(biāo)準(zhǔn)：均符合中華醫(yī)學(xué)兒科學(xué)會(huì)呼吸學(xué)組制定的支氣管哮喘/肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除于試驗(yàn)2周內(nèi)使用過(guò)免疫調(diào)節(jié)藥物的患兒；排除合并嚴(yán)重心肺肝腎疾病的患兒；排除自身免疫性疾病、血液性疾病、傳染性疾病的患兒；由患兒的監(jiān)護(hù)人簽署了關(guān)于本次試驗(yàn)的知情同意書(shū)[3]。另選擇同時(shí)期的正常體檢小兒30例作為對(duì)照組，其中男20例，女10例，年齡在2至9歲之間，平均年齡為(5.6±1.5)歲。納入及排除標(biāo)準(zhǔn)：于試驗(yàn)前2周內(nèi)身體健康，各項(xiàng)生命體征及指標(biāo)正常；排除嚴(yán)重心肺肝腎疾病、自身免疫性疾病、血液性疾病、傳染性疾病的患兒；并由患兒的監(jiān)護(hù)人簽署了關(guān)于本次試驗(yàn)的知情權(quán)同意書(shū)。3組一般資料無(wú)明顯差異，具有可比性。

1.2方法

早晨空腹采用肝素鈉抗凝負(fù)壓真空采血管抽取靜脈血5mL，并于3小時(shí)內(nèi)進(jìn)行標(biāo)本處理，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)外周血中CD4+T細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子Th1、Th17及外周血中CD4+CD25+FOXP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的水平。所用儀器、試劑及試劑盒均由美國(guó)BD公司提供。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)本次研究所取得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差的形式對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行表示，采取t檢驗(yàn)，各組試驗(yàn)組間給予方差分析，以P<0.05代表有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)、Th1及Th17細(xì)胞百分比對(duì)比

與對(duì)照組相比，哮喘組CD4+CD25+FOXP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、CD4+IL-4+Th1及CD4+IL-17+Th17細(xì)胞百分比均增加明顯，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為5.34、5.89、6.11，均P<0.05)。與對(duì)照組相比，哮喘組CD4+IFNγTh1細(xì)胞百分比無(wú)明顯差異(P>0.05)。與對(duì)照組相比，肺炎組CD4+CD25+FOXP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞百分比降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.56，P<0.05)。與肺炎組相比，哮喘組CD4+CD25+FOXP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、CD4+IL-4+Th1、CD4+IL-17+Th17細(xì)胞百分比均增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為6.12、6.45、6.39，均P<0.05)。與肺炎組相比，哮喘組CD4+IFNγTh1細(xì)胞百分比無(wú)明顯差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1　各組外周血Treg、Th1及Th17細(xì)胞百分比對(duì)比

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05；與肺炎組相比，#P<0.05。

2.2各組外周血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

與對(duì)照組相比，哮喘組淋巴細(xì)胞水平降低，單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞水平升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為5.34、5.26、5.19，均P<0.05)。與對(duì)照組相比，哮喘組白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞水平均無(wú)明顯差異(均P>0.05)。與對(duì)照組相比，肺炎組單核細(xì)胞水平升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.99，P<0.05)。與對(duì)照組相比，肺炎組白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞水平均無(wú)明顯差異(均P>0.05)。與肺炎組相比，哮喘組嗜酸性粒細(xì)胞水平升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.29，P<0.05)。與肺炎組相比，哮喘組白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞水平均無(wú)明顯差異(均P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2　各組外周血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果對(duì)比±S)

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05；與肺炎組相比，#P<0.05。

3討論

3.1 CD4+T細(xì)胞及淋巴細(xì)胞在哮喘及肺炎發(fā)生發(fā)展中的作用

隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展，對(duì)免疫學(xué)的相關(guān)研究也不斷深入發(fā)現(xiàn)包括呼吸系統(tǒng)在內(nèi)的各個(gè)部位發(fā)生的炎癥反應(yīng)均與免疫反應(yīng)相關(guān)，由于支氣管哮喘本身就為一種由多種細(xì)胞介導(dǎo)的氣道慢性炎癥反應(yīng)，其中CD4+T細(xì)胞在其發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到了重要的作用[4-6]。另由于小兒免疫系統(tǒng)相比于成人存在特殊性，且相關(guān)研究報(bào)道較少。本次研究結(jié)果顯示，哮喘組的Th17較肺炎及正常對(duì)照組相比均明顯升高，提示Th17在哮喘發(fā)病中占有重要地位，也有研究報(bào)道認(rèn)為T(mén)h17可對(duì)小兒哮喘的發(fā)生發(fā)展起到主導(dǎo)型作用[7]。另外，本次研究結(jié)果顯示，哮喘組較正常對(duì)照組相比CD4+、CD25+Treg水平升高，但并無(wú)明顯差異，推測(cè)其原因可能是部分哮喘組患兒存在家族或自身過(guò)敏史[8]。

3.2 CD4+T細(xì)胞及淋巴細(xì)胞在小兒哮喘、肺炎及正常對(duì)照組中的差異

在本研究中，肺炎組與哮喘組中Th1的水平并無(wú)明顯差異，與正常組CD4+CD25+FOXP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞百分比降低，但與肺炎組相比，哮喘組CD4+CD25+FOXP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、CD4+IL-4+Th1、CD4+IL-17+Th17細(xì)胞百分比增加，結(jié)果提示，Th17上調(diào)的趨勢(shì)相比于哮喘組并不明顯，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的變化與哮喘的發(fā)生發(fā)展呈現(xiàn)出反方向的趨勢(shì)，但由于體內(nèi)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與因子、因子及因子之間存在較為復(fù)發(fā)的變化，同時(shí)也有部分細(xì)胞因子在受到病原體刺激后表現(xiàn)為分泌時(shí)項(xiàng)的改變，從而出現(xiàn)了上述結(jié)果。

3.3血常規(guī)檢查在在小兒哮喘、肺炎診斷中的重要性

另外，在以往的臨床工作中，絕大多數(shù)臨床醫(yī)師僅重視白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板、淋巴細(xì)胞而忽略了單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞的水平。但本研究結(jié)果顯示，哮喘組、肺炎組患兒與正常對(duì)照組的血常規(guī)結(jié)果也存在明顯差異，表現(xiàn)為與對(duì)照組相比，哮喘組淋巴細(xì)胞水平降低，單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞水平升高；與對(duì)照組相比，肺炎組單核細(xì)胞水平升高；與肺炎組相比，哮喘組嗜酸性粒細(xì)胞水平升高?？梢?jiàn)，單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞與哮喘及肺炎的發(fā)生及發(fā)展同樣具有一定的相關(guān)性，對(duì)于炎癥性疾病及過(guò)敏性疾病的疾病同樣具有突出的臨床意義[9-10]。這就需要臨床醫(yī)師結(jié)合患者的病情及其血常規(guī)結(jié)果及免疫學(xué)結(jié)果共同對(duì)疾病作出合理的分析與判斷，以便為下一步臨床治療提供重要的科學(xué)基礎(chǔ)[11]。

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[專(zhuān)業(yè)責(zé)任編輯：侯偉]

[收稿日期]2015-12-01

[作者簡(jiǎn)介]李文良(1975-)，男，主治醫(yī)師，主要從事兒科疾病的診療工作。

[通訊作者]高亮，副主任醫(yī)師。

doi:10.3969/j.issn.1673-5293.2016.07.025

[中圖分類(lèi)號(hào)]R725.6

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1673-5293(2016)07-0861-03

CD4+T cells and lymphocyte subsets levels in children with asthma and pneumonia and their clinical significance

LI Wen-liang,Gao Liang

(1.Department of Pediatrics, Dongying City Guangrao County Hospital, Shandong Dongying 257300, China;2.Department of Pediatrics, Guangrao women and children’s Hospital，257300)

[Abstract]Objective To probe into and analyze CD4+ T cells and lymphocyte subsets levels in children with asthma and pneumonia and their clinical significance. Methods From September 2013 to September 2015 34 children with asthma were selected in asthma group and 33 children with pneumonia in pneumonia group from Dongying City Guangrao County Hospital. At the same period another 30 normal children taking physical examination were chosen in control group. Before breakfast 5mL blood were sampled from venous for all cases in three groups in the morning and processed within 3 hours. Then flow cytometry was used to detect Th1, Th2 and Th17 in CD4+T cells and levels of CD4+CD25+ FOXP3+ in peripheral blood. Results Compared to the control group, cell percentages of CD4+CD25+FOXP3+ , CD4+IL-4+Th1 and CD4+ IL-17+Th17 increased in the asthma group with significant differences (t value was 5.34, 5.89 and 6.11, respectively, all P<0.05). Compared to the control group, CD4+CD25+FOXP3+ cell percentage decreased in the pneumonia group with significant difference (t= 4.56, P<0.05). Compared to the pneumonia group, in the asthma group CD4+ CD25+ FOXP3+ , CD4+ IL-4+Th1, CD4+ IL-17+Th17 cell percentages increased with significant differences (t value was 6.12, 6.45 and 6.39, respectively, all P<0.05). Compared to the control group, lymphocyte levels dropped, monocytes and eosinophils levels increased in the asthma group with significant differences (t value was 5.34, 5.26 and 5.19, respectively, all P<0.05), and monocytes levels increased in the pneumonia group with significant difference (t=4.99, P<0.05). Compared to the pneumonia group, eosinophil levels increased in the asthma group with significant difference (t= 5.29, P<0.05).Conclusion CD4+T cells and lymphocyte subsets detection is of great importance in the diagnosis and identification of pediatric asthma and pneumonia disease, which provides basis for clinical treatment.

[Key words]CD4+T cells; lymphocyte subsets; childhood asthma; pediatric pneumonia