聶善靜，李丹，王宏

（石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)科，新疆 石河子 832000）

血清親環(huán)素A與頸動(dòng)脈不穩(wěn)定斑塊及腦梗死的相關(guān)性研究

聶善靜，李丹，王宏

（石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)科，新疆 石河子 832000）

目的通過檢測(cè)頸動(dòng)脈硬化不穩(wěn)定斑塊伴動(dòng)脈粥樣硬化腦梗死（A C I）患者（A C I組）、頸動(dòng)脈硬化不穩(wěn)定斑塊患者（單純斑塊組）及健康體檢者（對(duì)照組）血清親環(huán)素A（C y P A）、脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（Lp-P L A2）水平，探討觀察者血清C y P A、Lp-P L A2水平與斑塊不穩(wěn)定性及A C I的關(guān)系。方法頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊經(jīng)頸部血管彩色超聲檢查確定；采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（EL ISA）測(cè)定觀察者血清C y P A、Lp-P L A2水平。結(jié)果

患者的血清C y P A水平A C I組（2.031±0.679）ng/m l＞斑塊組（3.790±0.943）ng/m l＞對(duì)照組（5.113±1.568）ng/m l，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；血清Lp-p l A2水平A C I組（1.949±0.666）ng/m l＞斑塊組（1.703±0.541）ng/m l＞對(duì)照組（1.426±0.406）ng/m l，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。L o gis t i c回歸分析顯示，C y P A是不穩(wěn)定斑塊患者發(fā)生腦梗死的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（ ＾O R=2.71，95%C I：1.52，4.83，P=0.01）。以C y P A、Lp-P L A2為雙變量行相關(guān)分析顯示兩者呈正相關(guān)（r=0.343）。結(jié)論血清C y P A、Lp-P L A2水平可作為頸動(dòng)脈不穩(wěn)定斑塊的臨床標(biāo)志物；聯(lián)合檢測(cè)血清C y P A、Lp-P L A2水平可能會(huì)預(yù)測(cè)A C I的發(fā)生。

頸動(dòng)脈不穩(wěn)定斑塊；動(dòng)脈粥樣硬化腦梗死；血清親環(huán)素A；脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2

腦梗死的發(fā)生嚴(yán)重威脅著人們的健康，加重人們的生活負(fù)擔(dān)，其中動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死（atherosclerosis cerebral in f arction，A CI）是最常見的類型［1］。動(dòng)脈粥樣硬化（A therosclerosis，A S）是慢性炎癥過程，炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激貫穿A S起始、不穩(wěn)定斑塊形成和斑塊破裂整個(gè)過程［2］。近年來(lái)血清親環(huán)素A（C yp A）、脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（L p-P L A2）作為一種新型炎癥標(biāo)志物，被證實(shí)與斑塊的不穩(wěn)定性相關(guān)［3-4］。C yp A與內(nèi)皮功能、A S的發(fā)生、發(fā)展及斑塊的穩(wěn)定性有密切關(guān)系，但尚未有研究報(bào)道其在單純不穩(wěn)定斑塊及A CI患者血漿中的水平變化，故本研究主要通過測(cè)定L p-P L A2的水平來(lái)評(píng)估不穩(wěn)定斑塊的嚴(yán)重程度及炎癥水平，比較單純頸不穩(wěn)定斑塊及A CI患者血清C yp A、L p-P L A2水平的變化，以探討C yp A、L p-P L A2與頸動(dòng)脈不穩(wěn)定斑塊及A CI之間的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1臨床資料

選取2014年11月～2015年8月于石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科的腦梗死患者，行頸動(dòng)脈彩色B超確定合并有不穩(wěn)定斑塊者50例，作為斑塊合并腦梗死組（A CI）；同期選體檢中心健康人群，經(jīng)頸動(dòng)脈彩色B超確定有不穩(wěn)定斑塊者50例作為單純斑塊組，經(jīng)頸動(dòng)脈彩色B超確定無(wú)斑塊者50例作為正常對(duì)照組。

病例組納入排除標(biāo)準(zhǔn)：所有腦梗死患者均符合2012年缺血性腦卒中診斷和診療質(zhì)量控制行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，且符合T O A S J分型等L AA型；均經(jīng)神經(jīng)系統(tǒng)查體、頭顱C T和（或）M R I、頸動(dòng)脈彩色多普勒超聲、心電圖等檢查確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：①非大動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死；②急性冠狀動(dòng)脈綜合征、心力衰竭及其他周圍血管病；③自身免疫性疾病及其他炎癥疾?。虎苣[瘤、嚴(yán)重肝腎功能損害等疾??；⑤3個(gè)月內(nèi)手術(shù)及外傷史。

對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡、性別與病例組相匹配，既往無(wú)腦血管病病史，頭顱磁共振證實(shí)無(wú)卒中。

頸動(dòng)脈斑塊分組：穩(wěn)定斑塊組（包括硬斑和扁平斑）；不穩(wěn)定斑塊組（軟斑和潰瘍斑）。同時(shí)存在穩(wěn)定及不穩(wěn)定斑塊的均歸為不穩(wěn)定斑塊。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集對(duì)照組、單純斑塊組、A CI組分別采取空腹靜脈血2m l，采血后均立即加入EDT A抗凝管中，以3 000 r/min離心15min后，收集上清液，將標(biāo)本置入-80℃冰箱冷凍保存待測(cè)。為減少批間誤差和測(cè)量誤差，全部標(biāo)本采集完成后一次性檢測(cè)。

1.2.2檢測(cè)方法采用 E L I S A法測(cè)定標(biāo)本中C y P A、L p-P L A2水平，流程嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，人C yp A及人L p-P L A2酶聯(lián)免疫試劑盒均購(gòu)于上海西唐生物科技有限公司。其余常規(guī)生化實(shí)驗(yàn)室檢查由本院檢驗(yàn)科完成。

1.2.3頸動(dòng)脈彩色多普勒超聲檢查采用飛利浦I E33型彩色多普勒超聲診斷儀，探頭頻率7～11M H z，患者取平臥位，頭偏向一側(cè)，沿頸動(dòng)脈走向，將探頭自上而下進(jìn)行連續(xù)縱橫切面掃描雙側(cè)頸總、頸內(nèi)、頸外動(dòng)脈，觀察斑塊形態(tài)及回聲特點(diǎn)。將頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊［5］定義為內(nèi)膜中層不連續(xù)性、不均勻性增厚并凸入管腔，邊界光滑，病變厚度是鄰近部位內(nèi)-中層厚度的1.5倍或彩色多普勒顯示血管腔某處彩色血流缺損，缺損處面積≥10mm2。斑塊分型方法：①內(nèi)膜不光滑，回聲增強(qiáng)、增厚，局部輕微隆起為扁平斑；②斑塊凸出管腔，回聲強(qiáng)弱不均，表面光滑連續(xù)為軟斑；③斑塊較大，基底較寬，表面出現(xiàn)凹凸，邊緣回聲較低為潰瘍斑；④斑塊高低不平，強(qiáng)回聲，后伴聲影為硬斑。將扁平斑、硬斑歸為穩(wěn)定斑塊組，軟斑、潰瘍斑歸為不穩(wěn)定斑塊組。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用S P SS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，正態(tài)分布計(jì)量資料用方差分析，非正態(tài)分布的計(jì)量資料用非參數(shù)檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)；血漿C y P A、L p-P L A2水平比較用方差分析兩兩比較法；腦梗死的相關(guān)危險(xiǎn)因素用L og istic回歸分析，以比值比（odds ratio，O R＾）及95%可信區(qū)間（con f idence inter v al，CI）表示；相關(guān)分析用雙變量線性相關(guān)分析；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.13組一般資料比較

經(jīng)分析3組觀察者性別、年齡、吸煙史、體重指數(shù)（B MI）比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.23組之間血清C y P A、Lp-PL A2水平比較

A CI組血清C y P A、L p-P L A2水平與對(duì)照組和斑塊組的比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），A CI組血清C y P A、L p-P L A2水平高于對(duì)照組與斑塊組。C y P A3組間兩兩比較，對(duì)照組與斑塊組，對(duì)照組與A CI，斑塊組與A CI比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P=0.000）；L p-P L A23組間兩兩比較，對(duì)照組與斑塊組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.013），對(duì)照組與A CI比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000），斑塊組與A CI比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）。見表2。

表1　3組一般資料比較 （n=50）

表2　3組間血清C y P A、Lp-PL A2水平的比較（n g/ml，x±s）

2.3A C I相關(guān)危險(xiǎn)因素分析

以不穩(wěn)斑塊組是否發(fā)生腦梗死為因變量，以性別、年齡、吸煙史、B MI、三酰甘油（T G）、血清總膽固醇（T C）、低密度脂蛋白（L D L-C）、高密度脂蛋白（H D LC）、同型半胱氨酸（H C Y）、糖化血紅蛋白（H b A1c）、C反應(yīng)蛋白（C R P）、C y P A、L p-P L A2為協(xié)變量，分別進(jìn)行單因素L o g istic回歸分析，結(jié)果T G、T C、L D L-C、H C Y、H b A1c、C R P、C y P A、L p-P L A2差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。將有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的指標(biāo)為協(xié)變量進(jìn)行多因素L o g istic回歸分析，提示C y P A是頸動(dòng)脈不穩(wěn)定斑塊發(fā)生腦梗死的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（=2.71，95%CI： 1.52，4.83，P=0.01）。

2.4觀察者血清C y P A、Lp-PL A2的相關(guān)性分析繪制散點(diǎn)圖后，發(fā)現(xiàn)C y P A與L p-P L A2有相關(guān)趨勢(shì)，經(jīng)S pearman相關(guān)分析，觀察者血漿C y P A與L p-P L A2濃度呈正相關(guān)（r=0.343，P=0.000）。

3　討論

動(dòng)脈粥樣硬化是腦血管事件發(fā)生的主要病理基礎(chǔ)［6］。1986年美國(guó)華盛頓大學(xué)醫(yī)學(xué)院R O SS教授首次明確提出A S是一種炎癥性疾病。斑塊的不穩(wěn)定性是評(píng)價(jià)血管事件發(fā)生、復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素，陳莉等認(rèn)為斑塊的危險(xiǎn)性在于其不穩(wěn)定性［7］，而炎癥反應(yīng)影響斑塊的穩(wěn)定性［8］，斑塊內(nèi)炎癥是引起斑塊不穩(wěn)定的關(guān)鍵因素，斑塊破裂及斑塊糜爛與炎癥共存，不穩(wěn)定狀態(tài)時(shí)斑塊內(nèi)炎癥總是上調(diào)［9］。近期與斑塊不穩(wěn)定性相關(guān)的炎性標(biāo)志物受到學(xué)者的關(guān)注，目前得到普遍認(rèn)可的炎性標(biāo)志物［10］如C R P、金屬機(jī)制蛋白酶（MMP9）等是A S的敏感檢測(cè)指標(biāo)，但炎癥反應(yīng)是一個(gè)復(fù)雜的過程，在A S不同階段，炎癥因子的水平各有差異，然而單項(xiàng)指標(biāo)特異性較差，需要尋找不同階段的炎性指標(biāo)結(jié)合超聲等影像學(xué)檢查，更早、更全面地揭示A S的發(fā)展及嚴(yán)重程度。

L p-P L A2又被稱為血小板活化因子乙酰水解酶，人血清L p-P L A2主要由炎癥細(xì)胞合成分泌，它是與A S密切相關(guān)的磷脂酶家族分子，可預(yù)測(cè)斑塊不穩(wěn)定性及炎癥水平［11］，在國(guó)外研究中也是較公認(rèn)的反應(yīng)內(nèi)斑塊不穩(wěn)定性的新標(biāo)志物之一。本研究表明，觀察者血清L p-P L A2水平為A CI組＞單純斑塊組＞對(duì)照組，說(shuō)明L p-P L A2反應(yīng)斑塊的不穩(wěn)定性，A CI組L p-P L A2水平稍高，可能為A CI組的炎癥程度較高。L p-P L A2水解氧化型低密度脂蛋白膽固醇（O X L D L-C）生成游離的氧化脂肪酸和溶血卵磷脂［12］，這兩種物質(zhì)是強(qiáng)烈的致炎因子，最終影響斑塊不穩(wěn)定性。KO L O D GI E等也發(fā)現(xiàn)在斑塊壞死中心、易損及破裂斑塊周圍L p-P L A2高度表達(dá)，但在正常對(duì)照及穩(wěn)定斑塊中難以檢測(cè)到。另外，白小涓等研究［9］表明，與傳統(tǒng)炎癥因子C-反應(yīng)蛋白比較，L p-P L A2有較高的血管內(nèi)特異性，是獨(dú)立于全身炎癥之外的血管內(nèi)炎性標(biāo)志物。

C y P A是一種在生物界廣泛存在、高度保守的蛋白質(zhì)，它可以存在于細(xì)胞內(nèi)，也可因細(xì)胞凋亡和炎癥反應(yīng)向細(xì)胞外分泌，發(fā)揮類似于細(xì)胞因子的作用［13］。在A S形成中C y P A主要通過以下方面發(fā)揮作用：①唐振旺等認(rèn)為［14］，其通過調(diào)控細(xì)胞因子和炎癥分子而參與內(nèi)皮細(xì)胞的損害及整個(gè)過程；②趨化單核細(xì)胞移行，促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌MMP-9和巨噬細(xì)胞集落刺激因子，增加斑塊的不穩(wěn)定性［15］；③激活E R K1/2、J N K （J u n N-terminal k inase）、核轉(zhuǎn)錄因子（N F-κB）和p38M A P K等信號(hào)通路，加重對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的損害，增加A S斑塊不穩(wěn)定性［16］。本研究在剔除感染性疾病、惡性腫瘤、自身免疫性疾病等因素的影響后發(fā)現(xiàn)觀察者血清C yp A水平為單純斑塊組＞對(duì)照組，提示C yp A水平與斑塊的不穩(wěn)定性有一定關(guān)系，對(duì)于A CI組＞單純斑塊組，不僅能說(shuō)明炎癥反應(yīng)參與不穩(wěn)定斑塊的發(fā)展及腦梗死的發(fā)病過程，還能反映不穩(wěn)定斑塊發(fā)展的嚴(yán)重程度，提示高水平的C yp A更容易合并腦梗死，可能與A CI患者斑塊炎癥程度較高有關(guān)。N IG R O研究也表明，在A S斑塊中C yp A大量表達(dá)，是檢測(cè)炎癥和斑塊活動(dòng)的有效指標(biāo)［3］。C yp A可能會(huì)成為預(yù)測(cè)不穩(wěn)定斑塊發(fā)展的生物學(xué)指標(biāo)。

本研究以不穩(wěn)定斑塊患者是否發(fā)生腦梗死為因變量進(jìn)行多因素L o g istic回歸分析，結(jié)果顯示C y P A、L D L-C、H b A1c有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示除L D L-C、H b A1c傳統(tǒng)影響因素外，C y P A是頸動(dòng)脈不穩(wěn)定斑塊發(fā)生腦梗死的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（=2.71）。雙變量相關(guān)分析結(jié)果顯示，觀察者血清C yp A和L p-P L A2濃度在A S進(jìn)展中呈正相關(guān)，提示C yp A和L p-P L A2具有協(xié)同正向作用，兩者之間可能存在通路，其協(xié)同作用的機(jī)制尚不明確，需要更多研究來(lái)證實(shí)。

綜上所述，C yp A和L p-P L A2為不穩(wěn)定斑塊的特異性炎癥標(biāo)志物，聯(lián)合檢測(cè)它們的含量可能對(duì)A S的早期發(fā)現(xiàn)、判斷斑塊局部炎癥發(fā)展的嚴(yán)重程度、預(yù)防血管事件發(fā)生及臨床干預(yù)有重要意義。

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（申海菊 編輯）

Correlation of cyclophilin A w ith unstable carotid p laques and atherosclerotic cerebral infarction

Shan-jing Nie，Dan Li，Hong Wang
（Department of Neurology，the First Affiliated Hospital，School of Medicine，Shihezi University，Shihezi，Xinjiang 832000，China）

Objective To investigate the relationships of plasma levels of cyclophilin A（CyPA）and lipoprotein-association phospholipase A2（Lp-PLA2）with the unstability of carotid plaques and atherosclerotic cerebral infarction（ACI）.M ethods Carotid atherosclerotic plaques were defined by cervical vascular color ultrasonic inspection.The plasma levels of CyPA and Lp-PLA2 were detected by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）in patients with unstable carotid atherosclerosis plaques and ACI（ACI group），patients with unstable carotid atherosclerosis plaques（simple plaque group）and in healthy people（control group）.Results The plasma level of CyPA in the ACI group［（2.031±0.679）ng/ml］was significantly higher than that in the simple plaque group［（3.790±0.943）ng/m l］，which was in turn higher than that in the control group［（5.113±1.568）ng/ml］（P＜0.05）.The plasma level of Lp-PLA2 in the ACI group［（1.949±0.666）ng/m l］was significantly higher than that in the simple plaque group［（1.703±0.541）ng/m l］，which was in turn higher than that in the control group［（1.426±0.406）ng/m l］（P＜0.05）.Logistic regression analysis showed that CyPA was the independent risk factor for cerebral infarction in the patients of unstable plaques（＾O R=2.71；95%CI:1.52，4.83；P= 0.01）.Correlation analysis showed CyPA and Lp-PLA2 were in a positive correlation（r=0.343）.Conclusions Plasma CyPA and Lp-PLA2 levels can be used as clinical markers of unstable carotid plaques.Joint detectionof CyPA and Lp-PLA2 could predict the occurrence of ACI.

atherosclerotic cerebral infarction；carotid artery unstable plaque；cyclophilin A；lipoproteinassociated phospholipase A2

R 543.5；R 743.33

B

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.15.021

1005-8982（2016）15-0110-04

2015-10-29

王宏，E-mail：w an g832000@sina.com