席小紅，李國芬，李新（河南省南陽市中心醫(yī)院 檢驗(yàn)科，河南 南陽 473009）

臨床論著

血清PLA2R抗體與膜性腎病患者病情的相關(guān)性

席小紅，李國芬，李新
（河南省南陽市中心醫(yī)院 檢驗(yàn)科，河南 南陽 473009）

目的探討血清磷脂酶A2受體（PLA2R）抗體與膜性腎?。∕N）患者病情的相關(guān)性。方法選取2013年5月-2015年2月河南省南陽市中心醫(yī)院收治的膜性腎病患者193例，根據(jù)腎組織活檢病理結(jié)果分為特發(fā)性膜性腎病（IMN組）和繼發(fā)性膜性腎?。⊿MN組），選取同期到該院進(jìn)行體檢的健康者30例（對照組），比較3組受試者的血清白蛋白、血清總蛋白、24h尿蛋白定量、血肌酐水平、PLA2R抗體濃度及陽性率。分析實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)與PLA2R抗體的相關(guān)性，并計(jì)算PLA2R抗體檢測的特異性和陽性預(yù)測值。結(jié)果IMN組和SMN組患者的血清白蛋白、血清總蛋白水平明顯低于對照組（P<0.05），24h尿蛋白定量、血肌酐明顯高于對照組（P< 0.05）。IMN組和SMN組各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。IMN組、SMN組、對照組患者的血清PLA2R抗體水平分別為（12.149±5.207）μg/ml、（8.492±3.218）μg/ml及（0.003±0.001）μg/ml，陽性率分別為68.99%、18.75%及0.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。血清白蛋白水平與MN患者血清PLA2R抗體呈負(fù)相關(guān)（r=-0.625，P=0.023），24h尿蛋白定量水平與MN患者血清PLA2R抗體呈正相關(guān)（r=0.796，P= 0.015）。ELISA法PLA2R抗體檢測的特異度為96.67%，陽性預(yù)測值為99.01%。結(jié)論血清PLA2R抗體水平與膜性腎病病情有明顯相關(guān)性，其陽性表達(dá)與腎組織活檢結(jié)果符合度較高。

PLA2R抗體；膜性腎??；血清白蛋白

膜性腎病（membranous nephropathy，MN）即膜性腎小球腎炎，是指免疫復(fù)合物過度沉積在腎小球毛細(xì)血管引起的腎病綜合征，其臨床特征為水腫、高脂血癥、低蛋白血癥及蛋白尿[1]。膜性腎病可分為特發(fā)性膜性腎?。╥diopathic membranous nephropathy，IMN）和繼發(fā)性膜性腎?。╯econdary membranous nephropathy，SMN），患者多表現(xiàn)為高血壓、下肢水腫、腹腔積液、血尿及腎功能損傷等[2]。MN起病隱匿，不同類型的MN的臨床表現(xiàn)極為相近，因此臨床上常出現(xiàn)漏診、誤診等現(xiàn)象，嚴(yán)重影響疾病治療。目前，MN主要通過生理指標(biāo)檢測聯(lián)合腎組織活檢進(jìn)行診斷，該方案雖能準(zhǔn)確篩選出MN陽性患者，但腎活檢是一種創(chuàng)傷性檢查，對適應(yīng)證和禁忌證具有嚴(yán)格要求，且部分患者出現(xiàn)腹痛、血腫、血尿等不良并發(fā)癥[3]。本研究對MN患者血清PLA2R抗體水平進(jìn)行了對比性分析，旨在明確PLA2R抗體對MN診斷及病情評估的臨床價(jià)值，現(xiàn)分析報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2013年5月-2015年2月河南省南陽市中心醫(yī)院收治的膜性腎病患者193例。根據(jù)腎組織活檢病理結(jié)果分為IMN組和SMN組。IMN組129例，其中，男性68例，女性61例；年齡22～67歲，平均（54.1±10.6）歲。SMN組64例，其中，男性35例，女性29例；年齡20～68歲，平均（53.7±9.6）歲。選取同期到本院進(jìn)行體檢的健康者30例（對照組），其中，男性17例，女性13例；年齡23～70歲，平均（54.8±9.2）歲。3組受試者的年齡、性別等資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①IMN組和SMN組患者符合MN診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；②所有受試者均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他腎小球疾??；②患有嚴(yán)重的心、肝、腎、神經(jīng)疾??；③臨床資料不完整者。

1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測方法使用AU5800全自動(dòng)生化分析儀（美國貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)）測定受試者血清白蛋白、血清總蛋白、24 h尿蛋白定量、血肌酐水平。

1.2.2血清PLA2R抗體檢測方法采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測受試者血清PLA2R抗體水平，具體操作如下：①準(zhǔn)備待測樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，加入酶標(biāo)試劑（上海索萊寶生物科技有限公司提供）和二抗試劑（英國abcam公司生產(chǎn)），在37℃環(huán)境下靜置1 h；②使用洗滌液清洗反應(yīng)孔，反復(fù)清洗5次后加入顯色液（北京久峰潤達(dá)公司），在37℃環(huán)境下避光顯色15min；③加入終止液，待藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色后以450 nm波長測定各孔吸光度，計(jì)算PLA2R抗體濃度。

1.3觀察指標(biāo)

比較3組受試者的血清白蛋白、血清總蛋白、24 h尿蛋白定量、血肌酐水平、PLA2R抗體濃度及陽性率。分析實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)與PLA2R抗體的相關(guān)性，并計(jì)算PLA2R抗體檢測的特異性和陽性預(yù)測值。PLA2R抗體表達(dá)：陽性-熒光顯微鏡下，轉(zhuǎn)染細(xì)胞顯色，根據(jù)信號(hào)強(qiáng)度分為強(qiáng)陽性和弱陽性；陰性-熒光顯微鏡下，轉(zhuǎn)染細(xì)胞不顯色，或僅出現(xiàn)微弱信號(hào)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料部分多組間的比較為整體+分割χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料多組間的比較為單因素方差分析+多重比較，相關(guān)性采用Pearson分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.13組受試者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較

IMN組和SMN組患者的血清白蛋白、血清總蛋白水平明顯低于對照組（P<0.05），24h尿蛋白定量、血肌酐明顯高于對照組（P<0.05）。IMN組和SMN組各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P> 0.05）。見表1。

2.23組受試者血清PLA2R抗體比較

IMN組、SMN組、對照組患者的血清PLA2R抗體水平分別為（12.149±5.207）μg/ml、（8.492± 3.218）μg/ml及（0.003±0.001）μg/ml，陽性率分別為（68.99%）（89/129）、（18.75%）（12/64）及（0.00%）（0/30），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2.3血清白蛋白、24h尿蛋白定量與血清PLA2R抗體的相關(guān)性分析

血清白蛋白水平與MN患者血清PLA2R抗體呈負(fù)相關(guān)（r=-0.625，P=0.023），24h尿蛋白定量水平與MN患者血清PLA2R抗體呈正相關(guān)（r=0.796，P=0.015）。

2.4血清PLA2R抗體檢測結(jié)果與腎組織活檢病理結(jié)果比較

ELISA法PLA2R抗體檢測的特異性為96.67% （29/30），陽性預(yù)測值為99.01%（100/101）。見表3。

表1　3組受試者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較 （±s）

表1　3組受試者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較 （±s）

組別血肌酐/（μmol/L）IMN組（n=129）　49.17±9.28　5.19±3.26　87.26±20.49 SMN組（n=64）　47.26±10.48　5.23±4.18　83.15±18.21血清白蛋白/（g/L）26.74±6.23 24.25±6.15血清總蛋白/（g/L）24h尿蛋白定量/g對照組（n=30）F值，P值43.09±4.58 2.093，0.038 75.26±9.14 2.938，0.003 0.05±0.02 2.168，0.033 61.24±14.18 2.416，0.015LSD-t值，P值IMN組vsSMN組0.752，0.4531.786，0.0790.954，0.2671.453，0.156 IMN組vs對照組2.267，0.0252.078，0.041　2.584，0.010　2.016，0.045 SMN組vs對照組　2.331，0.020　2.748，0.007　2.285，0.023 1.994，0.047

表2　3組受試者血清PLA2R抗體比較

表3　血清PLA2R抗體檢測結(jié)果與腎組織活檢病理結(jié)果比較　例

3　討論

膜性腎病是指腎小球基底膜上皮細(xì)胞出現(xiàn)大量免疫復(fù)合物沉積導(dǎo)致基底膜彌漫性增厚造成的腎臟損害，多見于30歲以上人群[5]。現(xiàn)代生物學(xué)研究證明，MN是由自身免疫系統(tǒng)對正常腎小球上皮細(xì)胞抗原產(chǎn)生抗體造成的腎小球損害，大量沉著免疫復(fù)合物能夠激活補(bǔ)體產(chǎn)生膜攻擊復(fù)合物，并通過激活細(xì)胞因子促使基底膜細(xì)胞外基質(zhì)改變[6-7]。臨床資料統(tǒng)計(jì)，MN自發(fā)緩解率約為28.5%，患者存活率約為83%，其中存活患者中的70%以上均為輕中度蛋白尿，可見MN患者病情與預(yù)后有密切關(guān)系。MN各病理類型的臨床癥狀較為相似，因此，診斷鑒別MN成了疾病治療的重中之重。PLA2R抗體是膜性腎病形成過程中的主要抗原，能夠與腎小球PLA2R抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物，參與腎小球病變的主要過程[8-9]。

研究數(shù)據(jù)顯示，IMN組和SMN組患者各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)均與對照組呈現(xiàn)出明顯差異性，其中MN患者的血清白蛋白、血清總蛋白水平明顯低于對照組，24 h尿蛋白定量、血肌酐明顯高于對照組。但是，IMN組和SMN組各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)差異不大，可見實(shí)踐中無法根據(jù)上述指標(biāo)診斷鑒別MN的不同類型。PLA2R是Ⅰ型跨細(xì)胞膜受體，與lgG4共同定位于沉積的腎小球免疫復(fù)合物中[10]。非MN腎小球病變和健康者血清中的PLA2R抗體含量幾乎為0，因此，將其作為鑒別MN的特異性抗體具有較高可靠性。本組病例顯示，IMN組、SMN組、對照組患者的血清PLA2R抗體依次降低（P<0.05），IMN組和SMN組的陽性率分別為68.99%（89/129）、18.75%（12/64），健康對照組均呈陰性，表明PLA2R抗體檢測能夠準(zhǔn)確鑒別MN患者和健康者，且對IMN和SMN的鑒別具有重要意義。臨床上可對存在腎穿刺活檢術(shù)禁忌證的患者進(jìn)行血清PLA2R抗體檢測，在確保安全性的前提下提高M(jìn)N診斷正確率。24 h尿蛋白定量反映腎臟功能的重要指標(biāo)，也是影響腎疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[11]。研究中發(fā)現(xiàn)，MN患者血清白蛋白水平與血清PLA2R抗體呈明顯負(fù)相關(guān)（r=-0.625，P= 0.023），24h尿蛋白定量水平與血清PLA2R抗體呈正相關(guān)（r=0.796，P=0.015），提示血清PLA2R抗體能夠準(zhǔn)確評估MN病情程度。本研究采取ELISA法檢測PLA2R抗體，特異度為96.67%，陽性預(yù)測值為99.01%，與腎組織活檢病理結(jié)果具有較高一致性。研究中部分MN患者血清PLA2R抗體呈陰性，其原因可能包括：①獲取血清樣本時(shí)MN處于緩解期或非活動(dòng)期；②MN患者體內(nèi)存在其他靶抗原；③檢測技術(shù)不足造成誤差[12]。盡管如此，血清PLA2R抗體檢測在MN診斷方面的應(yīng)用價(jià)值仍是值得肯定的。

綜上所述，血清PLA2R抗體水平與膜性腎病病情具有明顯相關(guān)性，其陽性表達(dá)與腎組織活檢結(jié)果符合度較高。值得提醒的是，腎組織活檢病理結(jié)果能夠診斷MN分期，但其對疾病治療效果無明確關(guān)系，而MN患者血清PLA2R抗體表達(dá)可作為疾病治療和預(yù)后的重要參考指標(biāo)。

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（張西倩編輯）

Serum PLA2R antibody in diagnosis and disease evaluation of patients with membranous nephropathy

Xiao-hong Xi，Guo-fen Li，Xin Li
（Department of Clinical Laboratory，Nanyang Central Hospital，Nanyang，Henan 473009，China）

Objective To investigate the correlationship of serum phospholipase A2 receptor（PLA2R）antibody in diagnosis and disease evaluation of patients with membranous nephropathy.Methods 193 patients with membranous nephropathy from May 2013 to February 2015 were divided into three groups according to the results of renal biopsy，IMN group，secondary membranous nephropathy（SMN group），30 healthy subjects as control group.Copare the indexes as followed：serum albumin，total serum protein，24 h urinary protein，serum creatinine，PLA2R antibody concentration and its'positive rate.Correlation analysis laboratory indexes and PLA2R antibodies and calculate specificity and positive predictive value PLA2R antibody detection.Results The levels of serum albumin and serum total protein in IMN group and SMN group were significantly lower than those in control group（P＜0.05），24 h urine protein，serum creatinine were significantly higher than those in control group（P＜0.05）.The difference between the IMN group and the SMN group was not statistically significant（P＞0.05）.The positive rates of serum PLA2R antibody levels in IMN group，SMN group and control group were（5.207±12.149）g/ml，（3.218±8.492）g/ml，（0.001±0.003）g/ml，the positive rate was 68.99%，18.75%，0.00%respectively，the difference was statistically significant（P＜0.05）.Serum albumin level was significantly negatively correlated with serum PLA2R antibody inpatients with MN（r=-0.625，P=0.023），and serum PLA2R antibody was positively correlated with 24 h（r=0.796，P=0.015）.The specificity of PLA2R antibody detection was 96.67%，the positive predictive value was 99.01%，and the positive predictive value was 99.01%.Conclusions PLA2R serum antibody levels with membranous nephropathy disease has obvious relevance，its expression and renal biopsy results consistent with a higher degree.

PLA2R antibody；membranous nephropathy；albumin

R 692

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.04.014

1005-8982（2016）04-0067-04

2015-11-04