劉啟勝楊志花盧學(xué)兵羅　昱焦陽

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論著

食管癌患者NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞免疫功能的檢測及臨床意義

劉啟勝1楊志花2盧學(xué)兵1羅昱1焦陽1

目的分析食管癌患者NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞免疫功能的檢測及臨床意義。方法以87例食管癌患者為觀察組，以80例健康者為對照組。分別對兩組對象的外周血NK細(xì)胞（CD56）和T淋巴細(xì)胞（CD 3、CD4、CD8）的水平進(jìn)行檢測。結(jié)果觀察組患者外周血CD 56、CD8水平均高于對照組（P＜0.05）；CD3、CD4水平均低于對照組（P＜0.05）。觀察組患者不同腫瘤分期中，CD56、CD8水平呈遞增趨勢，即Ⅰ期＜Ⅱ期＜Ⅲ期（P＜0.05）；在CD3、CD 4水平呈遞減趨勢，即Ⅰ期＞Ⅱ期＞Ⅲ期（P＜0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者的NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞指標(biāo)值比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論食管癌患者存在細(xì)胞免疫功能下降，且下降趨勢與腫瘤病情進(jìn)程密切相關(guān)。

食管癌；NK細(xì)胞；T淋巴細(xì)胞；免疫功能

【Abstract】Objective To detectand analyze clinical significance of NK cells and T lymphocytes immune function in the patients w ith esophageal cancer.Methods The study included 87 patients with esophageal cancer（observation group）and 80 healthy persons（control group）.The level of the NK cells（CD56）and the T lymphocytes（CD3，CD4 and CD8）of the peripheralblood in two groupswere detected.Results The levelof CD56 and CD8 in observation groupwashigher than controlgroup（P＜0.05）.However，the levelof CD3 and CD4was lower in observation group（P＜0.05）.According to different tumor staging，CD56 and CD8 showed increasing trend，Ⅰ＜Ⅱ＜Ⅲ（P＜0.05），while CD3 and CD4 showed decreasing trend，Ⅰ＞Ⅱ＞Ⅲ（P＜0.05）.There wasno statistically significantdifference on the levelof NK cellsand T lymphocytes whether the patientswith lymphaticmetastasisor not（P＞0.05）.Conclusion Patientswith esophageal cancer had a decreaseof immunologic function，whichwas closely related to tumor progression.The detection of NK cellsand T lymphocyteswasmeaningful for the condition judgmentand treatmentp lan in esophageal cancer.

【Keywords】Esophageal cancer；NK cells；T lymphocytes；Immune function

隨著臨床醫(yī)學(xué)對腫瘤疾病發(fā)病機(jī)制研究的不斷深入，腫瘤免疫學(xué)研究報(bào)道證實(shí)，細(xì)胞免疫作為機(jī)體抗腫瘤的主要途徑，機(jī)體細(xì)胞免疫功能異常是腫瘤發(fā)生的重要病理基礎(chǔ)，也是影響疾病發(fā)展及預(yù)后的關(guān)鍵因素［1］。NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞亞群作為反映機(jī)體細(xì)胞免疫功能的重要指標(biāo)，通過對二者的監(jiān)測來判斷腫瘤患者免疫功能的變化，為臨床治療措施的制定及預(yù)后的判斷提供參考依據(jù)已成為臨床關(guān)注的熱點(diǎn)。食管癌是常見的消化道惡性腫瘤，近年來隨著人們生活環(huán)境的變化以及飲食習(xí)慣的改變，其發(fā)病率呈逐漸升高趨勢，成為威脅人類生存質(zhì)量的重要疾病。本文以我院收治的87例食管癌患者為研究對象，探討患者NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞免疫功能的變化及意義，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

一、臨床資料

選擇我院2014年3月至2015年3月期間收治的87例食管癌患者為觀察組，所有患者均經(jīng)手術(shù)病理確診。其中，男46例，女41例；年齡45～75歲，平均（61.425.66）歲；所有患者的采樣均于未進(jìn)行手術(shù)、放化療等治療前進(jìn)行。另選擇同期于我院行健康體檢的80例健康者為對照組，男42例，女38例；年齡45～75歲，平均（62.01±5.04）歲。研究對象納入標(biāo)準(zhǔn)：①無先天性免疫缺陷病者；②近2周內(nèi)未使用過激素及免疫調(diào)節(jié)劑史者；③自愿參與本次研究者。在性別、年齡方面，兩組對象比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

二、方法

分別采集兩組對象空腹靜脈血2 m L，置入EDTA抗凝的真空采血管中。取抗凝全血0.1m L，加入鼠抗人單克隆CD3-FITC/CD56-PE、CD4-FITC/CD8-PE；雙標(biāo)記抗體20μL（美國貝克曼公司生產(chǎn)），室溫下孵育25～30m in。采用流式細(xì)胞儀（FCM）對外周血NK細(xì)胞CD56和T淋巴細(xì)胞CD3、CD4、CD8的指標(biāo)水平進(jìn)行檢測［2］。

三、觀察指標(biāo)

1.兩組對象外周血NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的指標(biāo)值

根據(jù)檢測結(jié)果，對比分析兩組對象外周血NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的指標(biāo)值。

2.不同病理特征下觀察組患者NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的指標(biāo)值

（1）不同病理分期：根據(jù)觀察組患者腫瘤的TNM分期（UICC 2009版）標(biāo)準(zhǔn)將87例患者分為Ⅰ期34例，Ⅱ期28例，Ⅲ期25例；

（2）有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：根據(jù)觀察組患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，將87例患者分為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組42例和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組45例。分別對比分析不同病理特征下觀察組患者NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的指標(biāo)值。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié)果

一、兩組對象外周血NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的指標(biāo)值

從表1可以看出，觀察組患者外周血CD56、CD8指標(biāo)值均高于對照組（P＜0.05）；CD3、CD4指標(biāo)值均低于對照組（P＜0.05），見表1。

二、不同病理特征下觀察組患者NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的指標(biāo)值

從表2可以看出，不同腫瘤分期其CD56、CD8指標(biāo)值呈遞增趨勢，即Ⅰ期＜Ⅱ期＜Ⅲ期（P＜0.05）；CD3、CD4則呈遞減趨勢，即Ⅰ期＞Ⅱ期＞Ⅲ期（P＜0.05）。

三、觀察組有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的指標(biāo)值

從表3可以看出，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者的NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞指標(biāo)值比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

討論

淋巴細(xì)胞、細(xì)胞因子、共同刺激因子、黏附因子等多種細(xì)胞及因子的失衡是造成機(jī)體細(xì)胞免疫功能紊亂的重要原因，而細(xì)胞免疫功能又在腫瘤免疫機(jī)制中發(fā)揮著主導(dǎo)作用，其功能的紊亂是造成腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵因素［3］。因此，目前通過對腫瘤患者機(jī)體細(xì)胞免疫功能的檢測為疾病的診斷、治療及預(yù)后判斷提供參考依據(jù)成為臨床研究的熱點(diǎn)。NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞不僅是反映機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)的直接指標(biāo)，也是重要的腫瘤免疫效應(yīng)細(xì)胞，在機(jī)體抗腫瘤機(jī)制中起著重要的作用。

表1　兩組外周血NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞指標(biāo)值對比（±s，%）

表1　兩組外周血NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞指標(biāo)值對比（±s，%）

注：與對照組比較，*P＜0.05。

組別n CD56 CD3 CD4 CD8觀察組87 18.76±5.28*62.63±4.20*30.54±3.04*37.01±5.21*對照組80 13.92±3.71 72.55±5.03 38.85±3.27 28.92±4.27 t值-7.163 6.185 9.224 8.157 P值-0.039 0.045 0.042 0.038

表2　觀察組不同分期NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞指標(biāo)值對比±s，%）

表2　觀察組不同分期NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞指標(biāo)值對比±s，%）

注：與Ⅰ期比較，*P＜0.05；與Ⅱ期比較，#P＜0.05。

不同分期n CD56 CD3 CD4 CD8Ⅰ期34 14.83±4.02 71.93±4.01 36.86±3.27 30.19±4.21Ⅱ期Ⅲ期28 25 18.82±5.01* 22.81±5.81*#60.23±4.12* 50.82±4.21*#29.12±3.25* 22.71±3.19*#37.91±4.05* 44.66±4.21*#F值-3.852 6.462 3.028 9.242 P值-0.028 0.019 0.033 0.017

表3　觀察組有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞指標(biāo)值對比（±s，%）

表3　觀察組有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞指標(biāo)值對比（±s，%）

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移n CD56 CD3 CD4 CD8有42 18.92±5.14 61.18±4.81 29.18±3.05 38.18±5.29無45 18.45±5.21 63.47±5.02 32.27±3.22 36.28±5.17 t值-2.183 1.336 1.035 2.035 P值-0.135 0.273 1.532 1.392

本研究采用病例對照研究的方法，以健康者為對照，檢測分析食管癌患者NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞免疫功能的變化，結(jié)果顯示：①食管癌患者NK細(xì)胞比例呈升高趨勢，且升高幅度與腫瘤病情的進(jìn)展一致。CD56作為NK細(xì)胞的亞群，與CD3、CD4一起表現(xiàn)出最強(qiáng)的NK細(xì)胞殺傷活性［4］。本研究結(jié)果顯示，觀察組患者外周血CD56指標(biāo)值均高于對照組，且隨患者腫瘤分期的增加，其指標(biāo)值越高?？赡苁且?yàn)殡S腫瘤病情發(fā)生及發(fā)展作用機(jī)制的影響，對人體的免疫系統(tǒng)造成刺激，進(jìn)而促進(jìn)更多NK細(xì)胞的產(chǎn)生以參與抗腫瘤免疫［5］。而這些NK細(xì)胞因腫瘤疾病相關(guān)因素的影響多未發(fā)育成熟，不能進(jìn)入腫瘤組織發(fā)揮抗腫瘤作用，最終于外周血中滯留，造成腫瘤患者外周血NK細(xì)胞比例的上升［6］。②食管癌患者細(xì)胞免疫功能下降，且下降趨勢與腫瘤病情的進(jìn)展一致。CD3、CD4、CD8均為T淋巴細(xì)胞亞群，其中，CD3為成熟T淋巴細(xì)胞的總和，是反映T淋巴細(xì)胞活性的重要標(biāo)志物；CD4為輔助性T淋巴細(xì)胞，在抗腫瘤免疫機(jī)制中占據(jù)重要地位；CD8為抑制性T淋巴細(xì)胞［7］。本研究結(jié)果顯示，察組患者外周血CD8指標(biāo)值均高于對照組，CD3、CD4指標(biāo)值均低于對照組。提示食管癌患者細(xì)胞免疫應(yīng)答受到抑制，尤其是CD4指標(biāo)值的下降，這可能是機(jī)體抗腫瘤免疫功能下降的根本原因。同時(shí)，本研究結(jié)果顯示，在CD8指標(biāo)值上，Ⅰ期＜Ⅱ期＜Ⅲ期；在CD3、CD4指標(biāo)值上，Ⅰ期＞Ⅱ期＞Ⅲ期。即CD3、CD4的下降趨勢及CD8的升高趨勢與食管癌患者的腫瘤分期增加趨勢一致，隨患者腫瘤病情的進(jìn)展，患者細(xì)胞免疫功能不斷下降，機(jī)體抗腫瘤免疫功能亦不斷下降［8］。另外，本研究結(jié)果中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者的NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞指標(biāo)值比較，無明顯差異；提示，臨床上通過食管癌患者NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的檢測，并不能作為患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否判斷的依據(jù)。

綜上，食管癌患者存在細(xì)胞免疫功能下降，且下降趨勢與腫瘤病情進(jìn)程密切相關(guān)，臨床上通過對NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的檢測對食管癌臨床治療方案的制定及病情的判斷具有一定的意義。

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（本文編輯：鄭浩軒）

Detection and clinical significance of NK cells and T lymphocytes immune function in the patients with esophageal cancer

LIUQi-sheng1，YANGZhi-hua2，LUXue-bing1，LUOYu1，JIAOYang1.1）Departmentof clinicallaboratory，DayeHopitalofTraditionalChineseMedicine，Daye435100，Hubei；2）
DepartmentofAnorectal，DayeHospitalofTraditionalChineseMedicine，Daye435100，Hubei

10.3969/j.issn.1672-2159.2016.01.001

435100大冶市中醫(yī)醫(yī)院（1檢驗(yàn)科；2肛腸科）通訊作者：楊志花

（2015-06-12）