侯瀚博　陳　悅　張茗鋮　趙　馳　鄭賢程　趙丕文　馬　鑫

膏摩對運(yùn)動后肌肉疲勞恢復(fù)的機(jī)理研究

侯瀚博陳悅張茗鋮趙馳鄭賢程趙丕文馬鑫

目的 觀察膏摩對運(yùn)動后肌肉疲勞大鼠的恢復(fù)療效并探討發(fā)揮作用的可能機(jī)制。方法 將正常SD雄性大鼠32只按體質(zhì)量均衡和隨機(jī)的原則分為正常組、模型組、膏摩組、按摩組。對模型組、膏摩組、按摩組進(jìn)行運(yùn)動疲勞造模，并對膏摩組使用膏摩處理，對按摩組使用按摩處理，3周后，取出左腿股直肌測量其過氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性與丙二醛（malonaldehyde，MDA）含量。結(jié)果 正常組大鼠的SOD/MDA比值（57.204±2.852）與模型組（36.485±3.455）比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），模型組、膏摩組、按摩組3組SOD/MDA比值兩兩比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），且膏摩組SOD/MDA比值（49.103±2.786）高于按摩組（42.938±3.278）。結(jié)論 膏摩對于運(yùn)動后肌肉疲勞有緩解作用，并可加速自由基的代謝。

膏摩； 運(yùn)動后肌肉疲勞； 過氧化物歧化酶； 丙二醛

膏摩是中國傳統(tǒng)治療中一種特色方法，它的最大特點(diǎn)是將藥物外治與局部按摩有機(jī)結(jié)合，以配置的藥膏為介質(zhì)，即將藥膏涂于患者體表，再施用各種按摩手法，發(fā)揮藥、摩的綜合作用［1］。膏摩臨床應(yīng)用范圍廣泛，對不肯服藥之人及不能服藥之癥，更能顯示出其治療的優(yōu)勢［2］，而運(yùn)動后的肌肉疲勞常常困擾著運(yùn)動人群。本實(shí)驗(yàn)通過檢測膏摩對治療運(yùn)動后肌肉疲勞模型SD大鼠的作用，探究膏摩發(fā)揮疲勞緩解療效的可能機(jī)制。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物

SD大鼠32只，雄性，體質(zhì)量280～300 g，購自北京斯貝福實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司，動物合格證號：SCXK（京）2011-0004。實(shí)驗(yàn)期間飼養(yǎng)在三級動物室，溫度（25±1）℃。

1.2實(shí)驗(yàn)藥物

制川烏50 g、大楓子25 g、當(dāng)歸25 g、川續(xù)斷25 g、細(xì)辛25 g、川芎25 g、白芷25 g、防風(fēng)25 g、木香12.5 g、薄荷腦2.5 g，均購自北京同仁堂中藥店。藥材經(jīng)北京白塔寺藥房打粉至80目大小，加入500 g凡士林中混合均勻，所得藥物置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3儀器

YLS-15A大鼠轉(zhuǎn)輪式跑步機(jī)（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司）。

1.4分組及造模

將動物按體質(zhì)量均衡和隨機(jī)的原則，分為正常組、模型組、膏摩組和按摩組。正常組使用吉列刀片對每只大鼠大腿外側(cè)股四頭肌周圍剃毛，置于籠中自然生長。模型組、膏摩組和按摩組按照制定的運(yùn)動方案訓(xùn)練。首先進(jìn)行為期8天的適應(yīng)性訓(xùn)練，每天運(yùn)動15分鐘，運(yùn)動速度由9.2 m/min增加逐漸至30.3 m/min。第9天起進(jìn)行疲勞性訓(xùn)練，運(yùn)動15分鐘，速度為32.1 m/min。最后12天進(jìn)行疲勞積累，每天運(yùn)動15分鐘，速度由33.0 m/min逐漸增加至36.7 m/min。

從第15天開始，正常組不做任何處理，模型組、膏模組和按摩組繼續(xù)訓(xùn)練，膏模組和按摩組訓(xùn)練后進(jìn)行按摩，手法為指揉2分鐘，拿2分鐘，撥2分鐘，位置為雙側(cè)大腿外側(cè)骨外側(cè)肌與小腿外側(cè)肌群處，膏摩組在按摩時使用步驟1.2中預(yù)先準(zhǔn)備好的藥物。

1.5取材

最后一次大鼠疲勞運(yùn)動后，給予不同的取材處理，參考國內(nèi)研究［6］運(yùn)動6小時之后，對照組、模型組、膏摩組與按摩組全部32只大鼠立即腹腔注射10%水合氯醛糖漿（0.3 mL/100 g）麻醉后，迅速剝離取出后肢左腿股直肌，除去筋膜與肌腱，置于冰冷生理鹽水中洗凈血漬，用濾紙吸干，置于EP管內(nèi)，先迅速放于-20℃低溫冰箱稍加冷卻30分鐘，后轉(zhuǎn)移至-80℃超低溫冰箱中冷凍備用。

1.6骨骼肌組織勻漿制備

迅速取股四頭肌0.3 g、在冰冷鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重，剪碎倒入玻璃勻漿管中，加入2.7mL冰冷的生理鹽水，充分研碎，使組織勻漿化。將制備好的10%勻漿用低溫低速離心機(jī)2000 rpm離心15分鐘，取上清液，測骨骼肌勻漿蛋白濃度及丙二醛（malonaldehyde，MDA）含量與過氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性。

1.7統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。各組數(shù)據(jù)經(jīng)檢驗(yàn)符合正態(tài)分布，方差齊，故采用單因素方差分析；組間比較采用LSD檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

各組大鼠MDA值比較，模型組MDA值明顯高于正常組（P<0.01），按摩組、膏摩組MDA值均低于模型組（P<0.01），膏摩組與按摩組相比MDA值有進(jìn)一步降低的趨勢，更接近于正常組；各組大鼠SOD值比較，模型組SOD值明顯低于正常組（P<0.01），按摩組、膏摩組SOD值均高于模型組（P<0.01），膏摩組與按摩組相比SOD值有進(jìn)一步升高的趨勢（P<0.01），更接近于正常組；各組大鼠SOD/MDA值比較，模型組SOD/MDA比值明顯低于正常組（P<0.01），按摩組、膏摩組SOD/MDA比值均高于模型組（P<0.01），膏摩組與按摩組相比SOD/MDA比值有進(jìn)一步升高的趨勢（P<0.01），見表1。

表1　按摩或膏摩對疲勞大鼠肌肉MDA、SOD以及SOD/MDA的影響（x±s）

3　討論

運(yùn)動損傷給人們帶來痛苦，骨骼肌損傷是其中的重要方面。針對損傷機(jī)制展開的多項(xiàng)研究表明，在劇烈運(yùn)動或急性損傷中生成的自由基，可使細(xì)胞膜的孔隙擴(kuò)大、通透性增加，造成毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，甚至出現(xiàn)炎癥反應(yīng)和退行性變化，并進(jìn)一步損傷骨骼?。?］。

本研究的造模方法是根據(jù)Bedford理論大鼠7周大強(qiáng)度增負(fù)荷跑臺運(yùn)動方式［4-5］改進(jìn)，大鼠經(jīng)過該疲勞模型運(yùn)動后，測得模型組大鼠骨骼肌中MDA高于正常組、SOD低于正常組、SOD/MDA值明顯低于正常組，說明該疲勞模型已成功建立。

自由基又稱游離基，是共價鍵發(fā)生均裂而形成的具有不成對電子的原子或基團(tuán)，如氫自由基、氯自由基、甲基自由基等。Gastrogiovanni和Allen的研究表明在大負(fù)荷運(yùn)動后機(jī)體骨骼肌組織中的自由基會明顯增加從而引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。其中自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)最終生成MDA，其含量高低可反映細(xì)胞受自由基攻擊和損傷的程度。機(jī)體清除自由基、保護(hù)細(xì)胞體系主要依靠SOD的作用，其活性高低可間接反映組織清除自由基的能力［6-7］。

膏摩即通過加速自由基調(diào)節(jié)，通行絡(luò)脈從而緩解肌肉疲勞。近期對于膏摩的臨床使用亦有許多研究，華夏等［8］通過臨床數(shù)據(jù)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)膏摩在推拿的機(jī)械力學(xué)作用下，除可發(fā)揮頸肩部穴位的特異性作用，通過按摩的刺激，還可達(dá)到冬青膏通經(jīng)活絡(luò)、行氣活血止痛的功效，從而改善頸椎病患者局部的血液循環(huán)，并解除肌肉痙攣，減輕頸部疼痛。陳鵬等［9］在臨床實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)膏摩法結(jié)合超聲藥物透入治療可通過增加患者血清中IL-1β受體拮抗劑濃度、降低IL-6和腫瘤壞死因子等水平，發(fā)揮緩解頸源性肩背痛的療效。

依據(jù)中醫(yī)理論，運(yùn)動疲勞可以從絡(luò)脈理論進(jìn)行詮釋，吳以嶺教授提出的“脈絡(luò)-血管系統(tǒng)病”［10］從中西醫(yī)兩種醫(yī)學(xué)認(rèn)識角度發(fā)展了中醫(yī)的絡(luò)病理論與西醫(yī)的血管系統(tǒng)。絡(luò)脈分布于肌膚的表層，在人體氣血營衛(wèi)中起到了重要的溝通作用［11］。大量運(yùn)動后血?dú)鈸p傷絡(luò)脈，使瘀血阻滯，絡(luò)脈不通，從而引起疼痛。

關(guān)于膏摩的記載最早出現(xiàn)在《金匱要略》中：“若人能養(yǎng)慎，不令邪風(fēng)干忤經(jīng)絡(luò)，適中經(jīng)絡(luò)，未流傳臟腑，即醫(yī)治之；四肢才覺重滯，即導(dǎo)引、吐納、針灸、膏摩、勿令九竅閉塞。”［12］提出了使用膏摩治療疾病的傳統(tǒng)療法。本試驗(yàn)中選用的膏方組成參考了唐代王燾的《外臺秘要》中的范汪蹉跌膏兼療金瘡方：“當(dāng)歸，續(xù)斷，附子（去皮），細(xì)辛，甘草（炙），通草，芎勞，白芷，牛膝各二兩，蜀椒二合。右十味咀。以豬膏二斤煎，以白芷色黃膏成，絞去滓。日再以摩損處。”［13］對其進(jìn)行改進(jìn)，使用凡士林作為膏摩底物以簡化制作過程，藥物上進(jìn)行加減以增強(qiáng)其活血止痛的功效，同時引藥入絡(luò)。

實(shí)驗(yàn)中膏摩組大鼠骨骼肌中SOD高于按摩組、SOD/MDA值高于按摩組說明膏摩能夠有效加速自由基的代謝，在緩解運(yùn)動后肌肉疲勞上有顯著效果。本研究在前人研究的基礎(chǔ)上擴(kuò)展了膏摩的臨床適用性，為這種傳統(tǒng)的療法得以更廣泛地應(yīng)用與臨床提供了直接的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時為緩解肌肉疲勞提供了新的思路。如運(yùn)動員運(yùn)動后肌肉疲勞的情況可通過此傳統(tǒng)中醫(yī)療法進(jìn)行治療，相對于單純按摩的手法效果更佳。

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［13］ 唐·王燾.外臺秘要［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1958：782.

（本文編輯：蒲曉田）

Study on the mechanism of the curative effect of ointment-massage on post-exercise muscularfatigue

HOU Han-bo，CHEN Yue，ZHANG Ming-cheng，et al.School of Basic Medical Sciences，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China

ZHAO Pi-wen，E-mail：pwzhao@sina.com

Objective To observe the curative effect of ointment-massage on post-exercise muscular fatigue in SD rat models and to explore the possible mechanism.Methods Thirty-two male SD rats had been randomly divided into four groups：normal group，model group，ointment-massage group，and massage group.The rats in all the groups except normal group were designed to run regularly to establish models，and each group was treated with corresponding treatment.Three weeks later，each rat's left rectus femoris would be separated to observe the activity of SOD to measure the content of MDA.Results It turned out that the difference of the results of SOD/MDA between model group（36.485±3.455）and normal group（57.204±2.852）was statistically significant（P<0.01），the differences of SOD/MDA among model group，ointment-massage group and massage group were statistically significant（P<0.01）. Also，the results of SOD/MDA turned out that ointment-massage group（49.103±2.786）is higher than massage group（42.938±3.278）.Conclusion The ointment-massage can produce a curative effect on post-exercise muscular fatigue and accelerate metabolisms of free radicals.

Ointment-massage； Post-exercise muscular fatigue； SOD； MDA

R244.1

A

10.3969/j.issn.1674-1749.2016.06.006

國家級大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項(xiàng)目（20140026046）

100029 北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院［侯瀚博（本科生）、陳悅（本科生）、張茗鋮（本科生）、趙馳（本科生）、鄭賢程（本科生）、趙丕文、馬鑫］

侯瀚博（1994-），2013級在讀本科生。研究方向：中醫(yī)學(xué)。E-mail：2996053048@qq.com

趙丕文（1967-），女，碩士，教授。研究方向：婦科中藥藥理作用機(jī)制研究。E-mail：pwzhao@sina.com

2015-10-11）