古麗曼·木哈買提拜（新疆獸藥飼料監(jiān)察所，新疆　烏魯木齊　830063）

氣相色譜法測定乙酰氨基阿維菌素中的殘留溶劑（乙醇、乙腈、丙酮）

古麗曼·木哈買提拜
（新疆獸藥飼料監(jiān)察所，新疆烏魯木齊830063）

為了建立一種氣相色譜法同時測定乙酰氨基阿維菌素中的乙醇、乙腈和丙酮有機(jī)溶劑殘留量的方法，試驗采用外標(biāo)法直接進(jìn)樣，在石英毛細(xì)管柱上進(jìn)行各組分分離，色譜柱為Agilent 19095P-Q04 HP-PLOT，載氣為氮氣，檢測器為氫火焰離子化檢測器，以程序升溫的方式直接進(jìn)樣，使乙醇、乙腈和丙酮完全分離的方法，結(jié)果表明該方法中各溶劑的線性關(guān)系、精密度、準(zhǔn)確度、靈敏度均達(dá)到《中國獸藥典》2010年版中殘留溶劑限量規(guī)定的檢測要求。說明該方法簡單快速、準(zhǔn)確，可用于藥物質(zhì)量控制中的有機(jī)殘留溶劑檢測。

氣相色譜法；殘留溶劑；檢測

10.16863/j.cnki.1003-6377.2016.04.007

乙酰氨基阿維菌素是一種療效高、廣譜、殘留量低的新一代驅(qū)蟲獸用藥物，主要用于預(yù)防治療畜類的寄生蟲、虱、螨、蠅等各種內(nèi)外寄生蟲，用于奶牛和肉牛時不需要休藥期。由于此藥對家畜的體內(nèi)外各種寄生蟲的活性很高，在乳制品中很低的分配系數(shù)，使此藥成為第一個用于各種家畜在任何生長期中的殺蟲劑，是防治家畜體內(nèi)外各種寄生蟲的首選藥物。本產(chǎn)品是由發(fā)酵而得的阿維菌素B1，半合成品。此藥物在合成過程中要用到乙醇、乙腈、丙酮等多種溶劑，此文采用氣相色譜法測定乙酰氨基阿維菌素中的乙醇、乙腈、丙酮殘留溶劑，此方法快速、靈敏、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可以用于有機(jī)溶劑殘留的定性定量分析。

1　材料與方法

1.1氣相色譜儀：Agilent 6890N，配制氫火焰（FID）檢測器，安捷倫公司；電子天平：XS105型，梅特勒-托利多公司。

1.2對照品

乙醇為優(yōu)級純，含量為99.95%；乙腈、丙酮均為色譜純。

1.3試劑

二甲基甲酰胺為分析純。

1.4供試品

乙酰氨基阿維菌素原料（浙江海正藥業(yè)股份有限公司提供）。

1.5色譜條件與專屬性試驗

色譜柱：Agilent 19095P-Q04 HP-PLOT 270℃30 m×530 μm×40 μm，進(jìn)樣口溫度：150℃；檢測器溫度：200℃，柱溫:程序升溫，初始溫度50℃，以每分鐘2℃的速率升溫至80℃，再以每分鐘5℃的速率升溫至220℃，流速為1.0 mL/min。

精密稱取乙醇、乙腈與丙酮對照品，加二甲基甲酰胺分別定量稀釋制成每1 mL中分別含乙醇5 mg、乙腈0.41 mg、丙酮5 mg的溶液；另取二甲基甲酰胺試液作為空白溶液，精密吸取2 μl注入氣液相色譜儀，空白溶液的色譜中在與各對照品色譜峰相未出現(xiàn)相同的峰，不影響乙醇、乙腈與丙酮峰的測定。

1.6對照品溶液

精密稱取乙醇、乙腈與丙酮對照品，加二甲基甲酰胺分別定量稀釋制成每1 mL中分別含乙醇5 mg、乙腈0.41 mg、丙酮5 mg的溶液，作為對照品溶液。

1.7供試品溶液

精確稱取乙酰氨基阿維菌素原料（浙江海正藥業(yè)股份有限公司提供）1.0 g，放于10 mL的容量瓶中，再加二甲基甲酰胺溶液適量溶解，然后定容至刻度，即為供試品溶液。

1.8測定

精密量取對照品溶液與供試品溶液各2.0 μl，注入氣相色譜儀，并且記錄色譜圖，見圖1～5。

圖1　　乙醇對照品溶液色譜圖

圖2　　乙腈對照品溶液色譜圖

圖3　丙酮對照品溶液色譜圖

圖4　　乙腈、乙醇、丙酮對照品混合溶液色譜圖

圖5　　供試品溶液色譜圖

2結(jié)果

2.1線性關(guān)系

精密稱取乙醇、乙腈與丙酮對照品，加二甲基甲酰胺分別定量稀釋制成每1 mL中分別含乙腈0.480 mg、0.123 mg、24.6 μg、4.92 μg（0.984 μg/mL濃度,面積未檢出），乙醇與丙酮6 mg、1.5 mg、0.3 mg、60 μg、12 μg的三組溶液，精密吸取2 μl注入氣液相色譜儀，按殘留溶劑項下的色譜條件測試，記錄色譜圖，乙腈峰面積164.8、39.8、9.3、2.8，乙醇峰面積2002.9、478.7、88.6、18.9、4.0，丙酮峰面積2071.4、481.4、96.7、24.1、8.2，以對照品溶液濃度與相應(yīng)的峰面積計算線性回歸方程，結(jié)果表明：乙腈在4.92 μg/mL～0.480 mg/mL的范圍內(nèi)，乙醇與丙酮在12 μg/mL～6 mg/mL的范圍內(nèi)，峰面積與進(jìn)樣量濃度呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程：乙腈y=341.97x+0.0989、r=0.9998,乙醇y=334.51x-8.0373、r=0.9999,丙酮y=345.23x-7.1754、r=0.9998。

2.2精密度試驗

精密稱取乙醇、乙腈與丙酮對照品，加二甲基甲酰胺分別定量稀釋制成每1 mL中分別含乙醇5 mg、乙腈0.41 mg、丙酮5 mg的溶液，精密量取2.0 μl注入氣液相色譜儀，照殘留溶劑項下的色譜條件檢測，連續(xù)進(jìn)6針，記錄色譜圖，并測定峰面積。乙腈的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.77%、乙醇相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2.17%、丙酮相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2.12%，表明本法的精密度良好（見表1）。

表1　精密度試驗檢測結(jié)果表

2.3重復(fù)性試驗

取浙江海正藥業(yè)股份有限公司的原料樣品批次131 007適量（由于樣品中三種檢測的殘留物均未檢出，故作限值的濃度添加），并精密稱取乙醇、乙腈與丙酮對照品，加二甲基甲酰胺分別定量稀釋制成每1 mL中分別含乙醇5 mg+樣品1.0 g、乙腈0.41 mg+樣品1.0 g、丙酮5 mg+樣品1.0 g的溶液，三組溶液分別制備6份，各測定一次，精密吸取2 μl注入氣液相色譜儀，按殘留溶劑項下的色譜條件測試，測定含量。乙腈相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.77%、乙醇相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.52%、丙酮相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.58%，表明本法的重復(fù)性良好（見表2）。

表2　重復(fù)性試驗檢測結(jié)果表

2.4加標(biāo)回收試驗

取浙江海正藥業(yè)股份有限公司的原料樣品批次131 007適量 (由于樣品中三種檢測的殘留物均未檢出，故設(shè)限值為100%濃度添加量)，并精密稱取乙醇、乙腈與丙酮對照品，加二甲基甲酰胺分別定量稀釋制成每1 mL中分別含乙醇4 mg+乙腈0.328 mg+丙酮4 mg+樣品1.0 g的混合溶液、乙醇5 mg+乙腈0.41mg+丙酮5 mg+樣品1.0 g的混合溶液、乙醇6 mg+乙腈0.492 mg+丙酮6 mg+樣品1.0 g的混合溶液，三組溶液分別各制備3份進(jìn)行測定，精密吸取2 μl注入氣液相色譜儀，按殘留溶劑項下的色譜條件測試，測定含量。試驗如下（見表3～5）。

表3　乙腈回收率試驗檢測結(jié)果表

表4　　乙醇回收率試驗檢測結(jié)果表

表5　　丙酮回收率試驗檢測結(jié)果表

2.5穩(wěn)定性試驗

精密稱取乙醇、乙腈與丙酮對照品，加二甲基甲酰胺分別定量稀釋制成每1 mL中分別含乙醇5 mg、乙腈0.41 mg、丙酮5 mg的溶液，精密吸取2 μl注入氣液相色譜儀，按殘留溶劑項下的色譜條件測試，分別在0、6、10、13、16、19 h進(jìn)樣，測定峰面積，考察樣品穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，乙腈在19 h內(nèi)穩(wěn)定、乙醇在19 h內(nèi)穩(wěn)定、丙酮在19 h內(nèi)穩(wěn)定（見表6～8）。

表6　乙腈穩(wěn)定性試驗檢測結(jié)果表

表7　　乙醇穩(wěn)定性試驗檢測結(jié)果表

表8　　丙酮穩(wěn)定性試驗檢測結(jié)果表

2.6檢測限及定量限

按信噪比S/N=3時，乙腈的檢測限為1 μg/mL、乙醇的檢測限為0.2 μg/mL、丙酮的檢測限為0.05 mg/mL；按信噪比S/N=10時，乙腈的定量限為0.01 mg/mL、乙醇的定量限為0.02 mg/mL、丙酮的定量限為0.2 mg/mL。

3結(jié)論

本文建立了用氣相色譜法測定乙酰氨基阿維菌素中的殘留溶劑(乙醇、乙腈、丙酮)，將原來的頂空進(jìn)樣改為直接進(jìn)樣，經(jīng)考察，能準(zhǔn)確定量，靈敏度高，可快速、準(zhǔn)確的檢查乙酰氨基阿維菌素中的殘留溶劑(乙醇、乙腈、丙酮)，為更好地控制動物藥品質(zhì)量提供了檢測依據(jù)。

[1]《中華人民共和國獸藥典》2010版（第一部）[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2010.

[2]農(nóng)業(yè)部公告第644、804、942號的乙酰氨基阿維菌素三個質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).

[3]美國藥典委員會.美國藥典USP34[M].

[4]朱玉瑩.伊藩立酮[J].中國藥物化學(xué)雜志，2009，19（5）：400.

[5]金路燕.非典型抗精神病藥伊藩立酮[J].藥學(xué)進(jìn)展，2008，32（11）：520-522.

[6]安彥，霍秀敏.依達(dá)拉奉含量測定方法的比較[J].天津藥學(xué)，2003,15（5）：12-13.

[7]陳勇，湯元茂，陳鏗.工業(yè)乙酰乙酸乙酯（S），中華人民共和國化工行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，HG230792.

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[9]夏宇泌，昌軍.毛細(xì)管氣相色譜法測定13種有機(jī)溶劑殘留[J].復(fù)旦學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2013，（2）：222-226.

[10]關(guān)麗，陳歡，唐輝，等.高效毛細(xì)管氣相法測定左旋棉酚中的殘留溶劑[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2010，（15）.

Determination of Residual Solvent Eprinomectin in Gas Chromatography （Ethanol，Acetonitrile and Acetone）

GULIMAN·Muhamaitibai
（Xinjiang Institute of Veterinary and Feed,Urmuqi 830063，China）

To establish a kind of method for detecting residual organic solvents of ethanol acetonitrile acetone in amoxicillin by gas chromatography,the test separates each groups on a quartz capillary column by sampling directly with external standard method,and the chromatographic column is Agilent 19095P-Q04 HP-PLOT, and carrier gas is nitrogen,detector is hydrogen flame ionization.By programmed temperature and ethanol acetonitrile,acetone is completely separated,linear relation of each solvent in this method,precision, accuracy,sensitivity to Chinese Veterinary Pharmacopoeia 2010 Edition residual solvent limit stipulated in the detection requirements.This method is simple,rapid and accurate,and can be used for residual organic solvents in drug quality control.

gas chromatography;residual organic solvents;detection

S816.17

A

1003-6377（2016）04-0036-07

2015版《中國獸藥典》科研項目“《中國獸藥典》委員會辦公室文件（2012）9號文”

古麗曼·木哈買提拜（1969-），女（哈薩克族），大學(xué)本科，從事獸藥飼料及畜產(chǎn)品安全檢測和管理工作。E-mail：1966378660@qq.com

2016-05-20，

2016-05-25