李小琴，白彩云

(延安大學附屬醫(yī)院婦產科，陜西 延安 716000)

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臍血中Caspase7蛋白在羊水量異常產婦中的表達

李小琴，白彩云

(延安大學附屬醫(yī)院婦產科，陜西 延安 716000)

目的探討Caspase7蛋白在羊水量異常和正常的產婦血清中的表達差異。方法采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)分別檢測30例羊水過少、30例羊水過多和30例羊水量正常產婦臍帶血中Caspase7蛋白表達水平的情況，并加以分析。結果Caspase7蛋白在3組產婦血清中均有陽性表達。羊水過少組血清中Caspase7蛋白平均濃度(160.2±25.8ng/mL)比對照組高(142.9±18.4ng/mL)，差異有統(tǒng)計學意義(t=2.99，P<0.05)。羊水過多組血清中Caspase7蛋白平均濃度(119.2±21.5ng/mL)比對照組低(142.9±18.4ng/mL)，差異也有統(tǒng)計學意義(t=4.59，P<0.05)。結論羊水過少或過多產婦血清中Caspase7蛋白表達異常，提示其可能與羊水量異常的發(fā)生有關。

羊水過少；羊水過多；臍血；Caspase7蛋白

[Abstract]ObjectiveToexplorethedifferenceinexpressionofCaspase7inumbilicalserumbetweenpregnantwomenwithabnormalamnioticfluidandnormalpregnantwomen.MethodsELISAwasperformedtodeterminetheconcentrationofCaspase7proteininumbilicalserumof30casesofoligohydramnios, 30casesofpolyhydramniosand30normalcases.ResultsCaspase7waspositivelyexpressedinumbilicalserumofthreegroups.TheexpressionofCaspase7washigherintheoligohydramniosgroup(160.2±25.8ng/mL)thaninthenormalgroup(142.9±18.4ng/mL),andtherewassignificantdifference(t=2.99,P<0.05).TheexpressionofCaspase7waslowerinthepolyhydramniosgroup(119.2±21.5ng/mL)thaninthenormalgroup(142.9±18.4ng/mL)withsignificantdifference(t=4.59,P<0.05).ConclusionTheexpressionofCaspase7inumbilicalserumofpregnantwomenofoligohydramniosandpolyhydramniosisabnormal,whichindicatesthatitmightbecorrelatedwithabnormalamnioticfluid.

[Keywords]oligohydramnios;polyhydramnios;umbilicalserum;caspase7protein

羊水量異常是妊娠期常見的妊娠合并癥，包括羊水過少和羊水過多。羊水過少是指妊娠晚期羊水量少于300mL。羊水量減少時，子宮與胎兒之間的緩沖減少，臍帶更容易受壓，同時胎肺發(fā)育受到影響，會使胎兒更容易發(fā)生胎心率異常及宮內缺氧等危及胎兒的情況。當妊娠期間羊水量超過2 000mL時，診斷為羊水過多[1]。目前大部分羊水量異常的病因不清，羊水多少不是靜止不動的，而是處于循環(huán)狀態(tài)，因此研究羊水平衡的調控有著十分重要的意義。

近年來，國內外學者開始將目光集中于參與細胞凋亡的因子在孕婦胎盤胎膜以及血清上的分布及其與羊水調節(jié)的關系。目前在婦產科領域，有關Caspase的研究多集中在妊娠期高血壓疾病及婦科腫瘤等方面，而有關與羊水過少的相關研究較少。Caspase7蛋白作為半胱天冬蛋白酶家族中的一員，參與機體內細胞凋亡的過程，是執(zhí)行人體中細胞凋亡程序的關鍵酶之一；其在妊娠婦女胎盤胎膜細胞中的正常表達，確保胎盤胎膜細胞的正常凋亡，從而維持著母胎間的物質交換，并保證胎兒的正常發(fā)育。因此，本研究通過運用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)進一步研究Caspase7蛋白在羊水量正常和異常產婦臍帶血清中的表達水平，探討其與羊水量異常的關系，為尋找羊水量異常的病因與發(fā)病機制提供新的思路。

1對象和方法

1.1研究對象

選擇2014年6至12月在延安大學附屬醫(yī)院產科住院剖宮產分娩足月孕婦，分為羊水過少組、羊水過多組及正常組產婦，每組各30例。研究對象既往無內外科合并癥及其他妊娠合并癥(妊娠期高血壓疾病、胎膜早破、胎兒宮內生長受限、胎兒畸形及其他并發(fā)癥)，近期無藥物服用史、感染及母體脫水等因素。所有研究對象剖宮產的指征為：前次剖宮產和頭盆不稱。產前B超檢測羊水指數(amnioticfluidindex，AFI)≤5.0cm和/或羊水最大暗區(qū)垂直深度(AFV)≤2.0cm，為羊水過少；AFI≥25.0cm和/或AFV≥8.0cm，為羊水過多。剖宮產術中進一步核實羊水量，羊水總量<300mL確診為羊水過少，羊水總量>2 000mL確診為羊水過多。如果術中羊水量和術前羊水指數不相符，該病例予以剔除。

1.2血清標本采集及檢測

所有研究對象于胎兒娩出后及胎盤娩出前，抽取臍帶血2.5mL，立即將其注入已編號的未添加任何抗凝劑的潔凈試管內，隨后在室溫下靜置50min，待其自然凝固，然后將其置入離心機中分離15min，轉速為2 000r/min，依次用合適的移液器將上層透亮的血清移至己標號的潔凈聚丙烯管中，蓋緊后置于-70℃冰箱保存?zhèn)溆?。ELISA試劑盒購自北京博奧森生物工程有限公司，批內和批間變異系數均<9%。血清中Caspase7蛋白測定采用ELISA法，具體方法嚴格按照說明書操作。

1.3結果判定

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

1.4統(tǒng)計學方法

2結果

2.1各組孕產婦年齡、妊娠周數及妊娠次數的情況

羊水過少組孕產婦年齡、妊娠周數及妊娠次數與對照組相比，其表達差異均無統(tǒng)計學意義(t值分別為1.82、1.81、0.62，均P>0.05)；羊水過多組孕產婦年齡、妊娠周數及妊娠次數與對照組相比，其表達差異也均無統(tǒng)計學意義(t值分別為0.47、1.04、0.90，均P>0.05，見表1。

Table 1　Comparison of age, gestational weeks and thenumber of pregnancy between three groups ±S)

2.2各組孕產婦血清中Caspase7蛋白的比較

羊水過少組血清中的Caspase7蛋白平均濃度高于對照組，其表達差異有統(tǒng)計學意義(t=2.99，P<0.05)；羊水過多組血清中的Caspase7蛋白平均濃度低于對照組，其表達差異也有統(tǒng)計學意義(t=4.59，P<0.05)，見表2。

組別例數(n)Caspase7(ng/mL)羊水過少組30160.2±25.8羊水過多組30119.2±21.5對照組30142.9±18.4

3討論

3.1Caspase7蛋白在羊水量異常產婦中表達的分析

Caspase-7即為半胱氨酸蛋白酶-7，是由303個氨基酸組成的蛋白質，分子量約為35kD。Caspase-7與Caspase-3具有高度同源性，在細胞凋亡途徑中作用類似。Caspase-7在N端有一氨基酸殘基片段，它一旦被激活就啟動凋亡程序，并以級聯(lián)放大方式傳導和放大凋亡信號，向下游凋亡執(zhí)行因子傳遞，最終導致細胞凋亡[1]。胰島素樣生長因子可調控Cyt-C釋放入胞質，從而抑制Caspase-7引發(fā)的細胞凋亡[2-5]。一旦體內的凋亡機制發(fā)生異常將引起多種疾病的發(fā)生。

本研究通過運用ELISA方法發(fā)現(xiàn)：Caspase7蛋白在羊水過少組產婦臍帶血清中的濃度明顯比羊水正常組高，在羊水過多組產婦臍帶血清中的濃度明顯比羊水正常組低。本課題組還同時采用免疫組化方法(SP法)檢測了這些研究對象胎膜中Caspase7蛋白的表達，結果發(fā)現(xiàn)：Caspase7蛋白在羊水過少組與羊水正常組產婦的胎膜中均有陽性表達，同時羊水過少組胎膜中Caspase7蛋白的表達比羊水正常組明顯升高[6]。由此推測：Caspase7蛋白在正常妊娠胎膜絨毛滋養(yǎng)細胞的正常表達，確保正常胎膜細胞的凋亡，維持著母胎之間的物質交換及胎兒的正常發(fā)育。在羊水過少組的孕婦胎膜及血清中，Caspase7蛋白的表達異?？捎绊懱ケP胎膜細胞的自身凋亡，干擾胎盤胎膜細胞的結構及其功能，從而使得胎盤的血管網減少，使得物質交換發(fā)生障礙，嚴重地影響體內的水分子及其它小分子物質代謝及其循環(huán)，影響母體、胎兒及胎膜之間的水分子及其它小分子物質交換，導致羊水量異常。另外，胎盤胎膜細胞凋亡增加，影響胎盤胎膜細胞上水通道蛋白(AQP)的結構及其功能。目前在孕婦胎盤或胎膜上僅發(fā)現(xiàn)有AQP1、AQP3、AQP8和AQP9的表達，暫時未發(fā)現(xiàn)其他水通道蛋白；且發(fā)現(xiàn)上述因子在羊水量異常的產婦中表達異常[7-10]。水通道蛋白表達水平一旦下降，一方面使得母胎液體交換、胎兒血容量及胎兒皮膚腎臟水分的排泄減少，從而減少了胎兒尿液的生成，影響羊水的生成途徑；另一方面會改變細胞膜對羊水的通透性，阻止過多的液體重吸收進入胎兒血循環(huán)，在一定程度上減少了羊水膜內途徑的重吸收，從而達到平衡羊水生成與吸收的目的。最后，AQP在胎盤胎膜組織中的表達減少可能參與胎盤老化及胎膜早破的病理分子機制。

3.2展望

羊水過少的病因及發(fā)病機制至今尚未明確，Caspase7蛋白在羊水量異常孕婦的血清中異常表達，為羊水過少的診斷及治療提供了新思路及重要參考價值，從而可改善臨床結局，降低剖宮產率、圍生兒病率和死亡率，提高圍產醫(yī)學質量。但是，它在羊水量調節(jié)平衡中的確切作用機制有待于進一步研究，如Caspase的表達異常是引起羊水量異常的發(fā)病機制，那Caspase可作為一種新的治療羊水過少的手段。因此下一步期望通過制作動物模型及擴大樣本量對羊水量異常進行多因素分析和研究，進一步尋找羊水量異常發(fā)生的生物學特性，揭示其發(fā)生、發(fā)展的規(guī)律，最終為早預防、早診斷和早治療羊水量異常提供新的方向。

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[專業(yè)責任編輯：于學文]

Expression of Caspase7 in umbilical serum of pregnant women with abnormal amniotic fluid

LI Xiao-qin, BAI Cai-yun

(Department of Gynecology and Obstetrics, Yan’an University Affiliated Hospital, Shaanxi Yan’an 716000, China)

2015-06-30

李小琴(1973-),女，副主任醫(yī)師，主要從事產科疾病的診治與研究。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.01.011

R714.2

A

1673-5293(2016)01-0031-03