梁青青，黃月圓，李錫明，黃鎖義，鐘兆銀

(1.右江民族醫(yī)學(xué)院 臨床學(xué)院，廣西 百色 533000；2.右江民族醫(yī)學(xué)院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，廣西 百色533000；3.右江民族醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，廣西 百色 533000;4.右江流域特色民族藥研究廣西高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 百色 533000)

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雞骨草莖多糖含量測(cè)定

梁青青1，黃月圓2，李錫明1，黃鎖義3,4*，鐘兆銀3，4

(1.右江民族醫(yī)學(xué)院 臨床學(xué)院，廣西 百色 533000；2.右江民族醫(yī)學(xué)院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，廣西 百色533000；3.右江民族醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，廣西 百色 533000;4.右江流域特色民族藥研究廣西高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 百色 533000)

目的: 提取雞骨草莖中的多糖，并對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定。方法: 利用水提醇沉淀法提取多糖，用葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用苯酚-硫酸法測(cè)定雞骨草莖的多糖含量。結(jié)果：回歸方程為：y=0.1175x-0.026 7，相關(guān)系數(shù)r=0.999 7，雞骨草莖多糖含量為1.534%，平均回收率為98.16%，RSD=0.4623%(n=5)。結(jié)論: 苯酚-硫酸法具有簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確可靠等優(yōu)點(diǎn)；提取雞骨草莖的多糖并對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定，為雞骨草的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供了依據(jù)。

雞骨草莖；多糖提??；含量測(cè)定；苯酚-硫酸法

植物多糖是植物體內(nèi)廣泛存在的生物活性物質(zhì)，除具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血糖、抗病毒、降血脂等生物活性外，還具有清除自由基、抗氧化、抗衰老、抗疲勞作用[1-2], 近年來(lái)對(duì)植物多糖的研究已經(jīng)成為一個(gè)熱點(diǎn)，對(duì)于多糖抗氧化活性的研究大多以粗多糖為主[3]。

雞骨草(Abruscantoniensis)，常用異名有黃頭草、大黃草，為豆科植物廣東相思子的全草。味甘、味苦、性涼，具有清熱利濕、散瘀止痛的功效，主要生長(zhǎng)于山地或曠野灌木林邊。其植株含有相思豆堿、皂苷、黃酮苷、膽堿、甾醇、氨基酸、糖類(lèi)化合物等化學(xué)成分。雞骨草廣泛分布于南方各省區(qū)，在春夏潮濕季節(jié)常用雞骨草煲湯作為藥膳食療[4]。并且廣泛用于黃疽,脅肋不舒,胃骯脹痛,急、慢性肝炎[5]，廣西是雞骨草的主要產(chǎn)區(qū)[6]。本文用水提醇沉淀法提取雞骨草莖中的多糖，并采用苯酚-硫酸法測(cè)定雞骨草莖的多糖含量，為我們廣西雞骨草資源的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

1　實(shí)驗(yàn)材料與試劑

1.1原料

雞骨草莖購(gòu)自廣西百色市右江區(qū)，烘干粉碎備用。

1.2試劑

95%乙醇(AR)，無(wú)水乙醇(AR)，乙醚(AR)，苯酚(AR)，濃硫酸(AR)，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品(成都科龍化工試劑廠，批號(hào)20041102)。

1.3儀器設(shè)備

FA1004電子天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司)；臺(tái)式連續(xù)投料粉碎機(jī)(溫嶺市林大機(jī)械有限公司)；722N型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；DHG-9070A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；HH-S4數(shù)顯恒溫水浴箱(上海上登實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

2　結(jié)果分析

2.1雞骨草莖多糖提取

精確稱取雞骨草莖粉末15 g，分成3份，放入200 mL的燒杯中，分別加入水100 mL，將其放在65 ℃的恒溫水浴鍋3 h，抽濾用500 mL的燒杯收集濾液，用相同的方法重復(fù)提取3次，合并3次濾液，用恒溫水浴鍋加熱至98 ℃濃縮至32 mL，冷卻至室溫，加95%已醇90 mL，背光靜置24 h后，抽濾，分出沉淀物依次用無(wú)水乙醇和乙醚洗兩次，得到雞骨草莖多糖固體0.186 g。

2.25%苯酚溶液的配制

量取12.5 mL苯酚，置于250 mL的容量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻，得5.0%的苯酚溶液。

2.3葡萄糖對(duì)照品溶液的配制

精密稱取干燥葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品0.040 g，置于100 mL的容量瓶中，定容，搖勻，得0.4 mg/mL的葡萄糖對(duì)照液。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別量取葡萄糖對(duì)照液2、4、6、8、10 mL，并加入到100 mL的5個(gè)容量品中,定容,搖勻,得到0.016 mg/mL,0.032 mg/mL,0.048 mg/mL，0.064 mg/mL，0.080 mg/mL的不同濃度的對(duì)照品溶液，精確量取1.0 mL置于50 mL的容量瓶中，再分別加入5%的苯酚溶液1.5 mL，再加入7.5 mL濃硫酸，搖勻室溫靜置30 min。用722N型可見(jiàn)分光光度計(jì)，在484 nm處測(cè)量吸光度，以對(duì)照品濃度C為縱坐標(biāo)，吸光度A為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。建立回歸方程(表1)。

表1　紫外線可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定葡萄糖對(duì)照液吸光度

根據(jù)表1得回歸方程：C=0.117 5A-0.026 7，

r=0.999 7。

2.5雞骨草莖多糖含量測(cè)定

精確稱取0.010 g的雞骨草莖多糖置于100 mL的燒杯中，加入1 mol/L H2SO42 mL加熱水解2 h，冷卻至室溫，將其轉(zhuǎn)移至100 mL的容量瓶中，定容，搖勻，得到供試樣品溶液，按照繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，稱取5.0mL的樣品溶液分別置于5個(gè)50 mL的燒杯中，先后加入1.5 mL的苯酚溶液，再加入7.5 mL的濃硫酸溶液，混合均勻后放置20 min，用722N型可見(jiàn)分光光度計(jì)在484 nm處測(cè)量吸光度值，由回歸方程可以計(jì)算雞骨草莖多糖的含量，其測(cè)量結(jié)果如表2：

表2　紫外線可見(jiàn)分光光度計(jì)平行測(cè)定雞骨草莖

由回歸方程及表2計(jì)算得出雞骨草莖多糖含量為：1.534%。

2.6回收率的測(cè)定

精確稱取0.010 g的雞骨草莖多糖置于100 mL的燒杯中，加入1 mol/L H2SO42 mL加熱水解2 h，冷卻至室溫，將其轉(zhuǎn)移至100 mL的容量瓶中，定容，搖勻。按照“2.4”方法，往不同濃度的對(duì)照品系列溶液中，分別加入0.1 mL上述溶液進(jìn)行糖含量的測(cè)定，得到平均回收率98.16%，RSD=0.4623%(n=5)

3　結(jié)果和討論

3.1隨著對(duì)多糖生物活性的深入研究，多糖的生物活性機(jī)理，功效因子會(huì)更加明顯，它的應(yīng)用領(lǐng)域也將會(huì)更加擴(kuò)寬[7]。

3.2多糖是強(qiáng)極性分子，據(jù)其溶于水而不溶于有機(jī)溶劑的特點(diǎn)，采用水提醇沉法提取，防止引起糖苷鍵的斷裂[8]。

3.3本實(shí)驗(yàn)采用水提醇沉淀法及苯酚-硫酸法對(duì)雞骨草莖多糖含量進(jìn)行提取和測(cè)定，使用722N型可見(jiàn)分光光度計(jì)在484 nm處測(cè)量吸光度值。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示雞骨草莖多糖的含量為1.534%，平均回收率為98.16%,RSD=0.4623%(n=5)。

3.4苯酚-硫酸法顯色穩(wěn)定，精密準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，且靈敏度顯著提高，這有利于低密度供試品溶度的分析，擴(kuò)大了可分析的樣品范圍[9]，該方法可用于雞骨草莖多糖含量的測(cè)定。

[1]謝好貴,陳美珍,張玉強(qiáng).多糖抗腫瘤構(gòu)效關(guān)系及其機(jī)制研究進(jìn)展[J].食品科學(xué),2011,32(11):329-333.

[2]何余堂,潘孝明.植物多糖的結(jié)構(gòu)與活性研究進(jìn)展[J].食品科學(xué),2010,31(17):493-496.

[3]譚冰,嚴(yán)煥寧,黃鎖義,等.廣西壯藥雞骨草多糖的提取及對(duì)羥自由基清除作用的研究[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)教育,2011,18(4):36-39.

[4]李榮,黃秋妹,李子行. 淺談雞骨草的藥理作用[J].首都醫(yī)藥，2013(10):20.

[5]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典：一部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:135.

[6]黃榮韶,玉永雄,胡艷，等. 雞骨草總黃酮含量測(cè)定及其含量動(dòng)態(tài)變化研究[J].中國(guó)中藥雜志，2006,31(17)：1428-1430.

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[8]楊艷，徐應(yīng)淑.川、黔地區(qū)金釵石斛多糖的含量測(cè)定[J].中國(guó)藥房，2010，21(27)：2552-2553.

[9]陰婉婷，李彤，馬辰，等.改良的苯酚-硫酸法測(cè)定蛹蟲(chóng)草多糖含量[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2015,43(4):117-118,173.

Determination of the Content of Polysaccharide Extract of Stems ofAbruscantoniensis

Liang Qingqing1，Huang Yueyuan2，Li Ximing1，Huang Suoyi3,4*，Zhong Zhaoyin3,4

(1.College of Clinical Medicine, Youjiang Medicine University for Nationalities, Baise 533000,China; 2.College of Basic Medicine, Youjiang Medicine University for Nationalities, Baise 533000,China; 3.College of Pharmacy, Youjiang Medicine University for Nationalities, Baise 533000,China; 4.Guangxi Colleges and Universities Key Laboratory of the Characteristics of Ethnic Medicine of the Youjiang Valley, Baise 533000, China)

Objective: To extract polysaccharides from stems ofAbruscantoniensisand determine its content. Methods: Using water extraction and alcohol precipitation method to extract polysaccharide, drawing standard curve with glucose sugar standard products, and using phenol-sulfuric acid method to determine polysaccharide content of stems ofAbruscantoniensis. Results: regression equation:y=0.117 5x-0.026 7, correlation coefficientr=0.999 7, polysaccharide content of stems ofAbruscantoniensisis 1.534%, average recovery is 98.16%, RSD=0.4623% (n=5) .Conclusion: Phenol-sulfuric acid method is simple, fast, accurate, reliable; polysaccharides from stems ofAbruscantoniensiswere extracted and determined, and the study provided scientific basis for further development and utilization of stems ofAbruscantoniensis.

stems ofAbruscantoniensis; extraction of polysaccharide; determination of content; phenol-sulfuric acid method

10.3969/j.issn.1006-9690.2016.04.011

2016-01-08

國(guó)家中醫(yī)藥管理局“十二五”中醫(yī)藥重點(diǎn)學(xué)科中藥化學(xué)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目(國(guó)中醫(yī)藥人教發(fā)[2012]32號(hào))；廣西自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2013GXNSFAA019240);廣西重點(diǎn)學(xué)科藥物化學(xué)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目(桂教科研[2013]16號(hào))；2016年自治區(qū)級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201610599043)。

梁青青(1993—)女，本科在讀，主要研究方向：天然產(chǎn)物化學(xué)、藥物化學(xué)、食品衛(wèi)生。E-mail:787077792@qq.com

黃鎖義(1964—)，男，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事天然藥物化學(xué)、中藥化學(xué)、藥物分析及食品衛(wèi)生等研究工作。

E-mail:huangsuoyi@163.com

R284.1

A

1006-9690(2016)04-0040-03