曹玉明

(安徽新和成皖南藥業(yè)有限公司，安徽 宣城　242000)

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高效液相色譜法測(cè)定小兒氨酚黃那敏顆粒中馬來(lái)酸氯苯那敏含量及均勻度

曹玉明

(安徽新和成皖南藥業(yè)有限公司，安徽 宣城242000)

目的建立小兒氨酚黃那敏顆粒中馬來(lái)酸氯苯那敏含量及均勻度的檢測(cè)方法。方法采用高效液相色譜法對(duì)小兒氨酚黃那敏顆粒中的馬來(lái)酸氯苯那敏含量及均勻度進(jìn)行測(cè)定。以shimpack VP-ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱為固定相；甲醇-0.01 mol·L-1辛烷磺酸鈉溶液(三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0，63∶37)為流動(dòng)相；流速為1 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)為261 nm；進(jìn)樣量為10 μL。結(jié)果馬來(lái)酸氯苯那敏在7.928～31.712 mg·L-1的范圍與峰面積呈良好線性關(guān)系，r=0.999 92。樣品中馬來(lái)酸氯苯那敏的平均回收率為99.8%(n=9,RSD=0.83%)。用該文建立的方法對(duì)5個(gè)批次小兒氨酚黃那敏顆粒中的馬來(lái)酸氯苯那敏含量及均勻度進(jìn)行了測(cè)定，其含量均為標(biāo)示量的90.0%～110.0%,均勻度符合規(guī)定。結(jié)論該方法準(zhǔn)確可靠，可作為小兒氨酚黃那敏顆粒中馬來(lái)酸氯苯那敏含量及均勻度的測(cè)定方法。

氯苯那敏/化學(xué);醋氨酚;色譜法,高壓液相

小兒氨酚黃那敏顆粒為國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)化藥地標(biāo)升國(guó)標(biāo)第3冊(cè)收載的品種，該藥為感冒用藥類(lèi)非處方藥藥品,劑型為可溶性顆粒劑。目前該藥為多數(shù)省份納入基本藥物管理的非基本藥物。其主要含有對(duì)乙酰氨基酚、馬來(lái)酸氯苯那敏和人工牛黃，用于緩解兒童普通感冒及流行性感冒所引起的發(fā)熱、頭痛、打噴嚏、流鼻涕、咽痛等癥狀[1-4]。由于臨床療效確切，副作用小，市場(chǎng)需求量較大，現(xiàn)國(guó)內(nèi)有近三百多家藥企生產(chǎn)，其執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)[5]為國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-0214)-2002(試行)。該標(biāo)準(zhǔn)只規(guī)定了對(duì)乙酰氨基酚的含量測(cè)定，無(wú)抗組胺藥馬來(lái)酸氯苯那敏含量及含量均勻度測(cè)定法。臨床上馬來(lái)酸氯苯那敏的副作用主要為困倦、思睡、疲勞等，過(guò)量時(shí)可出現(xiàn)先中樞抑制，后中樞興奮癥狀，甚至可導(dǎo)致抽搐、驚厥等表現(xiàn)。兒童易發(fā)生焦慮、入睡困難和神經(jīng)過(guò)敏[6]。由于該藥品處方中所含的馬來(lái)酸氯苯那敏較少，在生產(chǎn)制備過(guò)程中可能導(dǎo)致混合不均勻，另該標(biāo)準(zhǔn)不完善，不能有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，而產(chǎn)生一定的安全性問(wèn)題。通過(guò)對(duì)小兒氨酚黃那敏顆粒中馬來(lái)酸氯苯那敏含量及均勻度測(cè)定方法的研究,完善其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有效控制生產(chǎn)工藝過(guò)程中混合均勻性，保證該產(chǎn)品的安全有效。

1　儀器與試藥

1.1儀器UV-2450島津紫外分光光度；LC-20A島津高效液相色譜儀，UV檢測(cè)器，N2000色譜工作站；METTLER TOLEDO電子天平。

1.2試藥馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào)：100047-201403)；小兒氨酚黃那敏顆粒(共5批，批號(hào)：141001、141002、141003、K1403211、K1403212)；輔料：蔗糖(由湖南湘易康制藥提供，批號(hào)：140902)乙醇(由湖南爾康制藥有限公司提供，批號(hào)：140805)；甲醇、辛烷磺酸鈉為色譜純；枸櫞酸、三乙胺為分析純；水為重蒸餾水。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)采用shimpack VP-ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱；流動(dòng)相：甲醇-0.01 mol·L-1辛烷磺酸鈉溶液(三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0)；流速：1 mL·min-1；柱溫：25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為261 nm；進(jìn)樣量為10 μL。馬來(lái)酸氯苯那敏色譜峰與對(duì)乙酰氨基酚色譜峰分離度應(yīng)>2.0；理論板數(shù)按馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品色譜峰計(jì)算不低于2 000。檢則波長(zhǎng)確定見(jiàn)圖1。

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液精密稱(chēng)取馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品20 mg，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻,作為對(duì)照品溶液(0.019 96 g·L-1)。

注： 取馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品，加水制成每1 mL含0.2 mg的溶液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法(中國(guó)藥典2010年版二部附錄IV A)在200～400 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。

圖1紫外檢測(cè)波長(zhǎng)確定圖

2.2.2供試品溶液取本品，精密稱(chēng)取適量(約相當(dāng)于馬來(lái)酸氯苯那敏0.5 mg)，置25 mL量瓶中，加適量水置水浴加熱使溶解，放冷，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.3陰性對(duì)照溶液取其他原輔料，按處方制備不含馬來(lái)酸氯苯那敏的陰性樣品，依“2.2.2”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液，作專(zhuān)屬性考察。

2.3測(cè)定法精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。理論板數(shù)按馬來(lái)酸氯苯那敏色譜峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000，馬來(lái)酸氯苯那敏峰保留時(shí)間為(7.8±1.0) min,其色譜峰與對(duì)乙酰氨基酚色譜峰的分離度應(yīng)>2.0。見(jiàn)圖2。

2.4方法學(xué)考察

2.4.1專(zhuān)屬性考察取對(duì)照品溶液、供試品溶液以及陰性對(duì)照溶液，按測(cè)定法進(jìn)樣測(cè)定，色譜圖見(jiàn)圖2。在陰性對(duì)照溶液色譜圖中與馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品相應(yīng)保留時(shí)間上無(wú)明顯色譜峰。

2.4.2線性關(guān)系考察取馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品溶液，用水稀釋制成濃度分別為7.928、11.892、15.856、19.820、23.784、27.748、31.712 mg·L-1的溶液。分別精密吸取上述7種溶液各10 μL注入液相色譜儀，以濃度為X軸，峰面積為Y軸，進(jìn)行線性回歸。得馬來(lái)酸氯苯那敏回歸方程：Y=7.007 816×104X+5.044 197×104(r=0.999 92)。結(jié)果表明馬來(lái)酸氯苯那敏進(jìn)樣濃度在7.928～31.712 mg·L-1的范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.4.3精密度試驗(yàn)取“2.4.2”項(xiàng)下的低、中、高濃度的溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件,連續(xù)進(jìn)樣5次，進(jìn)樣量為10 μL,以峰面積計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)，考察本系統(tǒng)的精密度，結(jié)果見(jiàn)表1，試驗(yàn)結(jié)果表明儀器的精密度良好。

A.對(duì)照品溶液

B.供試品溶液

C.陰性對(duì)照溶液

項(xiàng)目線性方程RSD/%低濃度1.255×106±4.433×1030.35中濃度1.470×106±5.503×1030.37高濃度1.762×106±1.094×1040.62

2.4.4重復(fù)性試驗(yàn)取小兒氨酚黃那敏顆粒(批號(hào)：141001)，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣分析，計(jì)算出該顆粒中馬來(lái)酸氯苯那敏含量平均值為98.8%(相對(duì)標(biāo)示量)，RSD為0.78%，結(jié)果見(jiàn)表2。試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明該方法重復(fù)性良好。

表2　重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.4.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份供試品溶液和對(duì)照溶液，室溫自然光條件下放置，在0～12 h內(nèi)，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別于0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。以峰面積考察其日內(nèi)穩(wěn)定性。計(jì)算其峰面積平均值為1 375 319，RSD為0.99%,結(jié)果表明，供試品溶液日內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.6加樣回收率試驗(yàn)取同批均質(zhì)樣品(批號(hào)：141001)，照“2.3”項(xiàng)下測(cè)定本品的含量。再取上述均質(zhì)樣品適量，共9份，精密稱(chēng)定，分別置25 mL量瓶中，分別精密加入濃度為0.052 2 g·L-1的馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品溶液3、5、7 mL，各3份，照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明，本法測(cè)定馬來(lái)酸氯苯那敏含量回收率較高，方法準(zhǔn)確度較高。

表3　回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.5樣品測(cè)定取小兒氨酚黃那敏顆粒樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品液，照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4　樣品測(cè)定結(jié)果

3　討論

3.1流動(dòng)相選擇小兒氨酚黃那敏顆?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中只有馬來(lái)酸氯苯那敏的鑒別試驗(yàn)，無(wú)法對(duì)其進(jìn)行定量控制?！睹绹?guó)藥典》收載的馬來(lái)酸氯苯那敏[7]含量測(cè)定液相條件中流動(dòng)相為堿性流動(dòng)相，pH值超過(guò)了12，因其有一定的腐蝕性，不適合普通的C18柱。參考《中國(guó)藥典》2010年版二部萘敏維滴眼液藥品標(biāo)準(zhǔn)[8]中馬來(lái)酸氯苯那敏含量測(cè)定色譜條件，但其使用的色譜柱為C8柱，在一般企業(yè)較少配備，以C18柱較常用。因此選擇通用的C18柱進(jìn)行液相條件摸索[9-11]。采用shimpack VP-ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱，分別采用甲醇-pH 3.3的0.1 mol·L-1磷酸二氫鈉(30∶70)、甲醇-pH 3.3磷酸二氫鉀(15∶85)、甲醇-pH 3.0辛烷磺酸鈉溶液(取辛烷磺酸鈉2.16 g，枸櫞酸8.3 g，加水溶解并稀釋至1 000 mL，用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0)(65∶35)3種流動(dòng)相；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：215或261 nm；靈敏度：0.001AUFS，分別進(jìn)樣檢測(cè)。結(jié)果在前兩種流動(dòng)相下陰性樣品在此條件下有干擾，主峰保留時(shí)間太短，或出現(xiàn)雙峰，分離度不好，拖尾嚴(yán)重；后一種在261 nm條件下主峰保留時(shí)間較為靠前，陰性樣品有干擾。因此，應(yīng)調(diào)整流動(dòng)相比例，使陰性樣品不干擾，主峰保留時(shí)間適中。

3.2調(diào)整流動(dòng)相采用shimpack VP-ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱,以甲醇-pH 3.0辛烷磺酸鈉溶液(取辛烷磺酸鈉2.16 g，枸櫞酸8.3 g，加水溶解并稀釋至1 000 mL，用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0)(63∶37),在其它條件相同的情況下,分別測(cè)定供試品溶液、對(duì)照品溶液和陰性溶液。試驗(yàn)結(jié)果表明其陰性不干擾，主峰保留時(shí)間良好，峰形較好，且不拖尾。

3.3檢測(cè)波長(zhǎng)的確定取對(duì)照品溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，在215 nm和261 nm處有較高吸光度，本法選取261 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，一方面是參照美國(guó)藥典相關(guān)測(cè)定，另一方面是因?yàn)樵诖颂帨y(cè)定時(shí)陰性無(wú)干擾。而在215 nm處測(cè)定時(shí)，陰性樣品對(duì)主峰有一定的干擾。

3.4其他馬來(lái)酸氯苯那敏系抗組胺藥，對(duì)感冒癥狀的改善起著非常重要的作用，但也會(huì)出現(xiàn)頭暈、嗜睡等不良反應(yīng)。小兒氨酚黃那敏顆粒是由乙酰氨基酚、馬來(lái)酸氯苯那敏等組成的復(fù)方制劑，是臨床常用的小兒感冒藥?？紤]到小兒臨床用藥的安全性問(wèn)題，本試驗(yàn)對(duì)該藥品中的馬來(lái)酸氯苯那敏含量和均勻度進(jìn)行控制，既有利于企業(yè)在投料方面的準(zhǔn)確性控制，又有利于保證產(chǎn)品質(zhì)量。本試驗(yàn)建立的HPLC法對(duì)5批樣品進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果顯示有些批次的馬來(lái)酸氯苯那敏含量偏低，均勻度值偏大，這可能與原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)此成分無(wú)含量控制有關(guān)。本檢測(cè)方法的建立，有利于提高和控制該產(chǎn)品的質(zhì)量。

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Determination of the content and uniformity of dosage units in Pediatric Paracetamol,Artificial Cow-bezoar and Chlorphenamine Maleate Granules by HPLC

CAO Yuming

(AnhuiNHUPharmaceuticalCo.,Ltd,Xuancheng,Anhui242000,China)

ObjectiveTo develop a method for the chlorphenamine maleate detection in Pediatric Paracetamol,Artificial Cow-bezoar and Chlorphenamine Maleate Granules.MethodsHPLC was adopted for the quantitative and uniformity determination of chlorphenamine maleate.A shimpack VP-ODS column(150 mm × 4.6 mm,5 μm) was used as the stationary phase,with a mobile phase consisting of methanol and 0.01 mol·L-1sodium octane sulfonate solution (adjusted to pH3.0 with triethylamine,63∶37).The flow rate was 1 mL·min-1,the detection wavelength was 261nm and the injection volume was 10 μL.ResultsConsiderable linear relationship was observed when chlorphenamine maleate ranged from 7.928 to 31.712 mg·L-1(r=0.999 92).The average recovery of chlorphenamine maleate was 99.8%(n=9,RSD=0.83%).Five batches of Pediatric Paracetamol,Artificial Cow-bezoar and Chlorphenamine Maleate Granules were analyzed under the established method with results ranging from 90.0% to 110.0%.ConclusionsThe developed method is accurate and reliable,which could be used for the quality control of chlorphenamine maleate in Pediatric Paracetamol,Artificial Cow-bezoar and Chlorphenamine Maleate Granules.

Chlorpheniramine/chemistry;Acetaminophen;Chromatography,high pessure liquid

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.08.018

2016-03-25，

2016-04-29)