彭　聰,叢憲玲,楊宏鳳,孫鴻雁,毛瑞濤

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院,吉林 長春130033)

?

p53、E-cad在皮膚鱗癌中的表達(dá)及意義

彭聰,叢憲玲,楊宏鳳,孫鴻雁,毛瑞濤*

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院,吉林 長春130033)

鱗狀細(xì)胞癌(SCC)為一種起源于表皮或皮膚附屬器角質(zhì)細(xì)胞的惡性上皮性腫瘤，好發(fā)于皮膚及被覆鱗狀上皮部位，如喉、食管、肺、宮頸等。多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移都與p53蛋白有密切關(guān)聯(lián)，但是對于皮膚鱗狀細(xì)胞癌中p53蛋白表達(dá)情況的研究報道較少。上皮性鈣黏蛋白(cad)為一種分布于所有的上皮組織中跨膜糖蛋白，具有促進(jìn)組織結(jié)構(gòu)完整性和極性的積極作用，但在皮膚鱗癌中的表達(dá)水平尚不明確。

1　材料與方法

1.1材料標(biāo)本來自2011年1月至2015年1月間吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院皮膚科和病理科的門診手術(shù)切除及術(shù)中病理獲取的皮膚鱗狀細(xì)胞癌石蠟標(biāo)本。篩選所有標(biāo)本，剔除曾經(jīng)復(fù)診及接受過其他任何治療的患者，并經(jīng)常規(guī)HE染色，專業(yè)病理醫(yī)師閱片除外皮膚轉(zhuǎn)移癌后，共計26例標(biāo)本納入皮膚鱗癌組，其中男16例，女10例，年齡17至89歲，平均年齡56.85±18.80歲。正常對照組標(biāo)本取自中日聯(lián)誼醫(yī)院皮膚科門診手術(shù)切除的正常皮膚標(biāo)本，共計21例，其中男15例，女6例，年齡20至72歲，平均年齡48.61±14.89歲，正常皮膚組與皮膚鱗癌組在年齡及性別構(gòu)成等方面均無顯著性差異(所有標(biāo)本的來源均符合倫理學(xué)要求)。

1.2方法p53鼠抗人單克隆抗體(MAB-0674)，E-cad鼠抗人單克隆抗體(MAB-0589)，即用型免疫組織化學(xué)UltraSensitiveTM SP試劑盒，DAB顯色試劑盒(均購自福州邁新公司)。按試劑盒說明書操作。所有皮膚鱗癌組織標(biāo)本均采用完全切除的方式。將皮膚鱗癌組織和正常皮膚組織分別浸入4%多聚甲醛中固定。用已知蛋白表達(dá)陽性的組織切片的免疫組化染色結(jié)果作為本實驗的陽性對照，用PBS代替一抗的免疫組化染色結(jié)果作為本實驗的陰性對照。

1.3結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)p53蛋白主要在細(xì)胞核中表達(dá)，顯色后陽性細(xì)胞為細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒的細(xì)胞；E-cad蛋白主要在細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，顯色后陽性細(xì)胞為細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒的細(xì)胞。請專業(yè)病理醫(yī)師進(jìn)行雙盲閱片。具體判斷標(biāo)準(zhǔn)：顯微鏡下隨機(jī)選擇3個不連續(xù)的視野(×400倍)計數(shù)，結(jié)合比較著色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分率進(jìn)行其結(jié)果的判定。著色強(qiáng)度的記分標(biāo)準(zhǔn)如下：基本無著色記為0分，弱陽性著色記為1分，中度陽性著色記為2分，強(qiáng)陽性著色記為3分；陽性細(xì)胞的百分率計分標(biāo)準(zhǔn)如下：每個高倍鏡視野下分別計數(shù)100個細(xì)胞，記錄其中陽性細(xì)胞所占細(xì)胞總數(shù)的百分比均值：<5%記為0分，5%-25%記為1分，26%-50%記為2分，>50%記為3分。將兩者的乘積記為最后得分：陰性(-)：0分，弱陽性(+)：1-2分，陽性(++)：3-4分，強(qiáng)陽性(+++)：5分以上。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行實驗數(shù)據(jù)分析，p53蛋白、E-cad蛋白在皮膚鱗狀細(xì)胞癌與正常皮膚之間的表達(dá)差異采用χ2檢驗。

2　結(jié)果

2.1p53蛋白的免疫組化染色結(jié)果

p53在皮膚鱗癌組及正常皮膚組中表達(dá)的陽性率分別為19.05%、57.69%。p53在皮膚鱗癌組中的表達(dá)低于正常皮膚組，且其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.204，P=0.007)，見表1,圖1。

2.2E-cad蛋白的免疫組化染色結(jié)果

E-cad蛋白在正常皮膚組、皮膚鱗癌組中表達(dá)的陽性率分別為95.24%、84.62%。E-cad蛋白在皮膚鱗癌組中表達(dá)陽性率低于正常皮膚組，二者之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.488，P=0.485)，見表2，圖2。

圖1　正常皮膚及皮膚鱗癌中P53的表達(dá)

圖2　正常皮膚及皮膚鱗癌中E-cad的表達(dá)表1　p53免疫組化染色結(jié)果

組別p53陽性陰性陽性率(%)正常皮膚41719.05皮膚鱗癌151157.69

表2　E-cad免疫組化染色結(jié)果

3　討論

p53基因是一種重要的抑癌基因[1]，是以其蛋白質(zhì)產(chǎn)物p53蛋白質(zhì)的分子量命名的，p53蛋白質(zhì)是一種位于細(xì)胞內(nèi)Mr53000的核磷酸蛋白質(zhì)。p53基因作為一種抗癌抑制基因，定位于17號染色體的短臂上。在1979年，p53蛋白在SV40病毒中首次被發(fā)現(xiàn)[2]，大量的研究證明，p53基因突變不僅存在于結(jié)腸癌中[3]，同時也存在于50%以上的人類腫瘤中，通過本實驗初步證實了在皮膚鱗癌中p53蛋白的表達(dá)上調(diào)，可能與疾病的發(fā)生、發(fā)展及浸潤有關(guān)。

上皮性鈣黏蛋白(E-cadherin)基因位于16q24.3染色體上，在肺癌和乳腺癌中發(fā)現(xiàn)其頻繁的等位基因的缺失[4]。該基因的CpG島甲基化會導(dǎo)致其失活，這也是誘發(fā)腫瘤的主要原因。有報道表明，在諸多惡性腫瘤中，發(fā)現(xiàn)E-cad基因沉默，例如，胃癌，前列腺癌，子宮頸癌，結(jié)腸癌，膀胱癌，乳腺癌[5]，食管癌和頭頸部的皮膚鱗癌。本次實驗中E-cad蛋白在皮膚鱗癌組織中表達(dá)下調(diào)，但二者之間差異并無統(tǒng)計學(xué)意義，可能是由于E-cad蛋白在皮膚鱗癌進(jìn)展的各個階段的表達(dá)并不相同，但不能否認(rèn)E-cad蛋白與皮膚鱗癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

[1]伍科,劉志宏.蘋果酸脫氫酶與p53蛋白相互調(diào)控對腫瘤進(jìn)程的影響[J].中華實驗外科雜志,2016,33:854.

[2]WilliamA,Freed-pastor,CarolPrives.Mutantp53:onename,manyproteins[J].GenesDevelopment,2012,26(12):1268.

[3]劉亮,陳浩,余超然,等.野生型p53調(diào)控結(jié)腸癌細(xì)胞代謝轉(zhuǎn)換的研究[J].中華實驗外科雜志,2015,32:1905.

[4]GirardL,Zochbauer-MullerS,VirmaniAK,etal.Genomewideallelotypingoflungcanceridentifiesnewregionsofallelicloss,differencesbetweensmallcelllungcancerandnon-smallcelllungcancer,andlociclustering[J].CancerRes,2000,60(17):4894.

[5]ToyookaKO,ToyookaS,MaitraA,etal.Establishmentandvalidationofreal-timepolymerasechainreactionmethodforCDH1promotermethylation[J].AmJPathol,2002,161(2):629.

國家自然科學(xué)基金(81371595，81401966)；吉林省科技廳項目基金(20140414061GH)

1007-4287(2016)09-1533-02

2015-03-29)