鄒　娜，劉遠遠，裘　娟，姜　丹，于　水，蔣　奇

(大連市婦女兒童醫(yī)療中心 病理科，遼寧 大連 116037)

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凋亡細胞及過氧化物酶體增殖物激活受體γ在子癇前期患者胎盤中的表達及臨床意義

鄒娜，劉遠遠，裘娟，姜丹，于水，蔣奇

(大連市婦女兒童醫(yī)療中心 病理科，遼寧 大連 116037)

目的研究中間型滋養(yǎng)細胞的凋亡及過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)在子癇前期患者胎盤中的表達及臨床意義。方法收集2014-2016年間大連市婦女兒童醫(yī)療中心住院分娩的正常妊娠晚期(正常組)、輕度子癇前期(輕度子癇前期組)及重度子癇前期(重度子癇前期組)產(chǎn)婦胎盤組織，各30例。采用 TUNEL法檢測3組胎盤底板中間型滋養(yǎng)細胞的凋亡并計算凋亡指數(shù)(AI)，采用免疫組化S-P法檢測PPARγ的表達情況。結果正常妊娠晚期組、輕度子癇前期組及重度子癇前期組胎盤滋養(yǎng)細胞的AI分別為1.5860±0.2541、5.2609±2.8643及9.0000±6.2763，呈增高趨勢，各組間差異有顯著性意義(P<0.05)。PPARγ在正常妊娠晚期組、輕度子癇前期組及重度子癇前期組的表達陽性率分別為46.7%，93.3%，100%，呈增強趨勢，各組間差異有顯著性意義(P<0.05)。子癇前期胎盤組織中PPARγ與凋亡細胞的表達呈正相關(r=0.591,P<0.05)。結論PPARγ可能通過誘導胎盤滋養(yǎng)細胞的凋亡參與子癇前期的發(fā)病。

中間型滋養(yǎng)細胞；子癇前期；細胞凋亡；PPARγ

[引用本文]鄒娜，劉遠遠，裘娟，等.凋亡細胞及過氧化物酶體增殖物激活受體γ在子癇前期患者胎盤中的表達及臨床意義[J].大連醫(yī)科大學學報，2016,38(5)：432-435.

妊娠期高血壓疾病是妊娠期特發(fā)性疾病，子癇前期是該疾病的常見類型，其發(fā)病原因及機制尚不明確。目前認為滋養(yǎng)細胞浸潤能力下降導致“胎盤淺著床”，少數(shù)子宮螺旋動脈不發(fā)生“血管重鑄”，是引起子癇前期發(fā)病的重要原因[1]。有學者提出胎盤植入過淺可能與滋養(yǎng)細胞過度凋亡密切相關[2]，胎盤滋養(yǎng)層細胞凋亡失調可能是導致子癇前期發(fā)生的重要病因[3]。近年來有研究發(fā)現(xiàn)過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)不僅對滋養(yǎng)細胞的浸潤、分化是必須的，而且對滋養(yǎng)細胞的成熟、母胎轉運的建立也是不可或缺的[4]，其表達異常可能參與了子癇前期的發(fā)病，并與病情的嚴重程度相關[5]。在肝癌與胰腺癌腫瘤中的研究表明，激活PPARγ，能通過下調促凋亡基因Bcl-2及上調凋亡基因Bax，而抑制腫瘤細胞的生長增殖，促進腫瘤細胞凋亡[6]。目前有關胎盤滋養(yǎng)細胞凋亡與PPARγ在子癇前期發(fā)病中的相關性研究甚少。本研究通過TUNEL法及免疫組化S-P法檢測正常妊娠晚期、輕度子癇前期及重度子癇前期患者胎盤底板中間型滋養(yǎng)細胞的凋亡指數(shù)及PPARγ的表達，探討它們與子癇前期的發(fā)病關系。

1　材料和方法

1.1材料來源

收集2014-2016年間大連市婦女兒童醫(yī)療中心住院分娩的正常妊娠晚期(正常組)、輕度子癇前期(輕度子癇前期組)及重度子癇前期(重度子癇前期組)產(chǎn)婦的胎盤組織，各30例。3組間產(chǎn)婦年齡、孕周均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。子癇前期的診斷及分類標準參照第八版《婦產(chǎn)科學》[7]。各組產(chǎn)婦均無煙、酒等特殊嗜好，既往無特殊病史、無其他妊娠合并癥及并發(fā)癥。3組產(chǎn)婦均為單胎，為避免順產(chǎn)過程中產(chǎn)道對胎盤組織擠壓的影響，本實驗所選用的胎盤均于剖宮產(chǎn)術中采集，均經(jīng)產(chǎn)婦知情同意。胎盤娩出后立即剪取胎盤母體中央1 cm×1 cm×1 cm大小胎盤組織，避開出血、鈣化及機化灶。生理鹽水漂洗后置于10%中性甲醛溶液24～48 h，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)4 μm切片。

1.2檢測方法

1.2.1原位末端標記法(TUNEL)檢測3組胎盤底板中間型滋養(yǎng)細胞的凋亡

參照中杉金橋凋亡試劑盒說明，切片經(jīng)脫蠟、水化、漂洗，滴加蛋白酶K孵育15 min，過氧化氫浸泡玻片5 min；滴加TUNEL反應液暗室中37 ℃下孵育60 min；滴加Converter-POD在37 ℃水浴箱中孵育30 min；DAB顯色，蘇木素復染，中性樹膠封片。光學顯微鏡下進行滋養(yǎng)細胞凋亡指數(shù)的計算。

1.2.2免疫組化S-P法檢測PPARγ蛋白在3組胎盤底板中間型滋養(yǎng)細胞中的表達

按照PPARγ免疫組化試劑盒說明，切片經(jīng)脫蠟、水化、漂洗，滴入過氧化物酶阻斷溶液孵育5 min；高壓抗原修復后山羊血清封閉10 min，滴加一抗(兔抗人PPARγ多克隆抗體)室溫放置40 min，用PBS代替一抗作為陰性對照；PBS沖洗后滴加生物素化二抗，室溫下放置40 min；DAB顯色，蘇木素復染，中性樹膠封片。鏡下觀察并拍照。兔抗人PPARγ多克隆抗體、SP型免疫組化試劑盒及DAB染色液(聚合物法)試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3結果判定

凋亡指數(shù)(AI)：高倍視野下計數(shù)1000個滋養(yǎng)細胞中核著黃色的凋亡細胞數(shù)所占百分比。免疫組化半定量標準：PPARγ表達于細胞核，以細胞核出現(xiàn)黃色或棕黃色染色為陽性細胞。每張切片隨機選擇10個高倍鏡視野，計數(shù)陽性細胞數(shù)并計算陽性細胞率，陽性細胞率≤5%為(-)，5%～25%為(+)，26%～50%為(++)，>50%為(+++)。

1.4統(tǒng)計學方法

采用 SPSS17.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，對凋亡指數(shù)比較采用均數(shù)的t檢驗；對PPARγ表達水平的比較采用卡方檢驗；并采用Pearson等級相關分析法對二者的相關性進行分析，P<0.05為有統(tǒng)計學意義。

2　結　果

2.1凋亡細胞在胎盤組織中的表達

凋亡細胞核著黃色或棕黃色，同時細胞核呈不同程度的固縮狀態(tài)，形態(tài)各異，可呈圓形、分葉狀和不規(guī)則形。正常組、輕度子癇前期組及重度子癇前期組胎盤底板中間型滋養(yǎng)細胞的凋亡指數(shù)分別為1.5860±0.2541、5.2609±2.8643及9.0000±6.2763，呈增高趨勢，各組間差異有顯著性意義(P<0.05)。見圖1。

圖1　胎盤中間型滋養(yǎng)細胞中的凋亡細胞Fig 1 Apoptosis cells in the intermediate trophoblast of the placentalA：正常組；B：輕度子癇前期組；C：重度子癇前期組

2.2 PPARγ在胎盤組織中的表達

PPARγ主要表達于中間型滋養(yǎng)細胞的胞核中，核著黃色或棕黃色，在正常組、輕度子癇前期組及重度子癇前期組的陽性率分別為46.7%、93.3%及100%，3組間的表達強度呈增強趨勢，各組間差異有顯著性意義，P<0.05。見表1，圖2。

表1　PPARγ在各組產(chǎn)婦胎盤組織中的陽性表達

圖2　胎盤中間型滋養(yǎng)細胞中PPARγ的表達Fig 2 PPARγ expression in the intermediate trophoblast of the placental A：正常組；B：輕度子癇前期組；C：重度子癇前期組

2.3胎盤組織中PPARγ與凋亡細胞的表達相關性分析

子癇前期組患者胎盤組織中PPARγ與凋亡細胞的表達呈正相關(r=0.591,P<0.05)。

3　討　論

PPARγ是一種配體啟動的核轉錄因子，屬II型核受體超家族成員。Barak等基于鼠的遺傳學研究表明PPARγ不僅對滋養(yǎng)細胞的浸潤、分化是必須的，而且對滋養(yǎng)細胞的成熟、母胎轉運的建立也是不可或缺的[4]。Rodie等的研究顯示PPARγ在正常妊娠胎盤組織滋養(yǎng)細胞中表達，隨孕周的增加而表達增強，并參與滋養(yǎng)細胞浸潤能力的調節(jié)[8]。本實驗結果顯示，PPARγ在正常妊娠晚期組、輕度子癇前期組及重度子癇前期組的表達強度呈增強趨勢，各組間差異有顯著性(P<0.05)，提示PPARγ表達異?？赡軈⑴c了子癇前期的發(fā)病，并且隨著子癇前期病情的加重而表達增強，這與Holdsworth等[5]的報道相一致。PPARγ在胎盤中表達增強可能抑制了胎盤滋養(yǎng)細胞的浸潤能力，導致“胎盤淺著床”，胎盤血流灌注減少、胎盤缺血缺氧，造成子癇前期、胎兒宮內生長受限等一系列臨床病理表現(xiàn)。

細胞凋亡是組織細胞接受并識別某些生理、病理刺激后，在特有的基因群調控下發(fā)生的程序性死亡，是機體維持組織器官自身穩(wěn)態(tài)及正常形態(tài)、功能的一種手段和對環(huán)境中不良刺激的一種反應。大量的細胞凋亡是機體清除病理性受損組織的重要現(xiàn)象，也是病理過程發(fā)生發(fā)展的重要標志。有學者發(fā)現(xiàn)子癇前期患者的胎盤滋養(yǎng)細胞存在著明顯的凋亡現(xiàn)象，從而導致滋養(yǎng)細胞分化異常、植入過淺[2]，胎盤無法從母體獲得豐富的血供，使得母胎轉運界面難以有效地建立，提示胎盤滋養(yǎng)細胞的凋亡異常可能構成子癇前期發(fā)生發(fā)展的核心環(huán)節(jié)[9-10]。本研究結果顯示，正常妊娠晚期組、輕度子癇前期組及重度子癇前期組的凋亡指數(shù)呈增高趨勢，各組間差異有顯著性(P<0.05)，提示細胞凋亡可能導致了子癇前期的病理過程，并與病情的嚴重程度相關，這與Alexander等[11]的報道相一致。

研究表明PPARγ的激活可通過調控細胞增殖及凋亡因子的表達發(fā)揮抗增殖及促凋亡的功能，本實驗中PPARγ與凋亡細胞的表達呈正相關，提示PPARγ可能通過調控胎盤滋養(yǎng)細胞的凋亡進而抑制滋養(yǎng)細胞浸潤能力，導致“胎盤淺著床”，滋養(yǎng)細胞侵襲性降低，部分子宮螺旋動脈不發(fā)生“血管重鑄”，在子癇前期的發(fā)生發(fā)展中有著非常重要的作用。

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Clinical significance of apoptosis cells and PPARγ expression in the placenta of patients with preeclampsia

ZOU Na，LIU Yuan-yuan，QIU Juan，JIANG Dan，YU Shui，JIANG Qi

(DepartmentofPathology，DalianMunicipalWomenandChildren'sMedicalCenter，Dalian116037，China)

Objective To investigate the clinical significance of apoptosis index (AI) and PPARγ expression in the placenta of patients with preeclampsia. Methods The placenta tissues from normal-term pregnancy, light preeclampsia and severe preeclampsia patients (30 cases in each group) were collected from 2014-2016 years in Dalian Municipal Women and Children，s Medical Center. TUNEL was performed to measure AI and immunohistochemistry (S-P method) was used to detect PPARγ expression in intermediate trophoblast of placental floor. Results AI was 1.5860±0.2541, 5.2609±2.8643 and 9.0000±6.2763 in normal-term pregnancy group, the light preeclampsia group and the severe preeclampsia group, respectively (P<0.05). The PPARγ expression frequency was 46.7%, 93.3% and 100% in normal-term pregnancy group, the light preeclampsia group and the severe preeclampsia group, respectively (P<0.05). The AI was positively correlated with PPARγ expression in placenta of patients with preeclampsia (P<0.05). Conclusion PPARγ could involve in the pathogenesis of preeclampsia by inducing apoptosis of placental trophoblast cells.

intermediate trophoblast；preeclampsia; apoptosis; PPARγ

大連市醫(yī)學衛(wèi)生科學研究計劃項目(2013)

鄒 娜(1977-)，女，遼寧大連人，副主任醫(yī)師。E-mail：408363000@qq.com

??著

10.11724/jdmu.2016.05.04

R615

A

1671-7295(2016)05-0432-04

2016-07-19；

2016-09-14)