喬新然，陳淑珍

TRAIL誘導(dǎo)細(xì)胞死亡及其耐藥機(jī)制研究進(jìn)展

喬新然，陳淑珍

腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體（tumor necrosis factor-related apotosis-inducing ligand，TRAIL/Apo-2L）是繼腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）、Fas 配體（Fas ligand，F(xiàn)ASL）之后發(fā)現(xiàn)的又一 TNF 超家族成員，廣泛分布于機(jī)體中，在自身免疫疾病及抗腫瘤中扮演重要角色。TRAIL 因其能夠選擇性地靶向腫瘤細(xì)胞而對正常細(xì)胞不產(chǎn)生毒性，成為近年來抗腫瘤研究的熱點(diǎn)。但隨著臨床研究的深入，TRAIL 的單藥治療在多種腫瘤細(xì)胞中出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，這阻礙了 TRAIL 在抗腫瘤治療中的應(yīng)用。因此，本文就TRAIL 誘導(dǎo)細(xì)胞死亡機(jī)制、細(xì)胞耐藥機(jī)制及聯(lián)合用藥策略進(jìn)行綜述。

1 TRAIL 及其受體

1.1 TRAIL/Apo-2L

TRAIL/Apo-2L 是一個(gè) 33 ～ 35 kD 的 II 型跨膜蛋白，由 281 個(gè)氨基酸殘基組成，胞外羧基端所具有的高度保守TNF 同源結(jié)構(gòu)域（TNF homology domain，THD）與三聚體的形成有關(guān)。在生理?xiàng)l件下，TRAIL/Apo-2L 分子以完整的膜結(jié)合形式存在于免疫效應(yīng)細(xì)胞（如 T 細(xì)胞）的細(xì)胞膜上或者以截?cái)嗟目扇苄孕问剑埢?114 ～ 281）被尿激酶纖溶酶激活物（uridylyl phosphate adenosine，uPA）釋放。這兩種形式均具有生物活性，都能與死亡受體形成三聚體，并由鋅離子穩(wěn)定，產(chǎn)生凋亡誘導(dǎo)作用。

1.2 TRAIL 受體

TRAIL 受體屬于 TNF 受體超家族，分為三種：

⑴死亡受體（death receptor）：包括 TRAIL-R1/DR4 和TRAIL-R2/DR5，分別是由 468 個(gè)和 411 個(gè)氨基酸殘基組成的 I 型跨膜蛋白，有 58% 的一致性，在機(jī)體內(nèi)分布廣泛。兩者的胞外區(qū)均有 2 個(gè)富含半胱氨酸的假重復(fù)序列，胞內(nèi)區(qū)有與 TNFR、Fas 同源的死亡結(jié)構(gòu)域（death domain，DD）。

⑵誘騙受體（decoy receptor）：包括 TRAIL-R3/DcR1 和TRAIL-R4/DcR2。DcR1 是由 299 個(gè)氨基酸殘基組成的I 型跨膜蛋白，其胞外區(qū)與 DR4、DR5 類似，存在 2 個(gè)富含半胱氨酸的序列，沒有跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)，僅通過一個(gè)糖酯磷脂酰肌醇（glycosyl phosphatidyl inositol，GPI）連接在細(xì)胞表面。因此，它與 TRAIL 結(jié)合后不能誘導(dǎo)凋亡。DcR2是由 386 個(gè)氨基酸殘基組成的 I 型跨膜蛋白，存在跨膜區(qū)和一段被剪切的 DD，也無法傳遞凋亡信號。

⑶骨保護(hù)素（osteoprotegerin，OPG）：TRAIL 的第 3 個(gè)誘騙受體，由 401 個(gè)氨基酸殘基組成的胞外區(qū)可溶性受體，與 TRAIL 有較弱的結(jié)合能力，能夠抑制 TRAIL 所誘導(dǎo)的凋亡［1-2］。

2 TRAIL 誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的機(jī)制

2.1 TRAIL 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡

TRAIL 與功能性受體 DR4/DR5 結(jié)合后，活化形成三聚體，通過 DD 相互作用，募集死亡結(jié)構(gòu)域連接蛋白（Fas associated death domain，F(xiàn)ADD）到受體上，再通過 FADD中的死亡效應(yīng)結(jié)構(gòu)域（death effector domain，DED）募集啟始 caspases（pro-caspase-8/10）到受體復(fù)合物上，形成死亡誘導(dǎo)信號復(fù)合體（death-inducing signaling complex，DISC）。Pro-caspase-8/10 在 DISC 中自我剪切活化，形成活性caspase-8/10 并釋放到細(xì)胞質(zhì)中，激活下游 caspase 信號級聯(lián)［1，3］，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

由于內(nèi)源性 caspase 抑制劑 X 染色體連鎖凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein，XIAP）的表達(dá)極大地影響 DISC 中 caspase 的活化，因此根據(jù) caspase活化程度及時(shí)間的不同，將細(xì)胞分為 I 型和 II 型。在 I 型細(xì)胞中，caspase-8/10 充分活化，受 XIAP 的抑制較小，能直接激活效應(yīng) caspases（caspase-3/6/7），誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的外在途徑（extrinsic pathway）。在 II 型細(xì)胞中，XIAP 的表達(dá)只允許少量活性 caspase-8/10 的形成，需要激活線粒體介導(dǎo)的內(nèi)在凋亡途徑（intrinsic pathway）：少量活性 caspase-8/10分裂 BH3-only 蛋白（BCL-2 inhibitory BH3-domain containing protein，BID）形成 tBID（truncated BID），tBID 運(yùn)輸?shù)骄€粒體，激活 BAX（Bcl-2 associated X protein）和 BAK（Bcl-2 antagonist killer 1），進(jìn)而誘導(dǎo)線粒體釋放前凋亡因子（如細(xì)胞色素 c、SMAC/DIABLO、HTRA2/Omi）到細(xì)胞質(zhì)中，細(xì)胞色素 c、凋亡蛋白活性因子-1（apoptosis activating factor-1，APAF-1）和 pro-caspase-9 在細(xì)胞質(zhì)中組成凋亡小體，能夠激活另一個(gè)啟始 caspase——caspase-9，從而進(jìn)一步激活效應(yīng) caspase-3/7，引起細(xì)胞凋亡［1，4］。SMAC/DIABLO的釋放能夠抑制 XIAP 的活性，進(jìn)一步促進(jìn)凋亡（圖 1）。

圖1 TRAIL 誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的機(jī)制

2.2 TRAIL 與自噬

2.2.1 自噬的雙面性 細(xì)胞自噬是細(xì)胞一種自我降解的過程，在腫瘤細(xì)胞中，既是細(xì)胞防御機(jī)制，又是程序性細(xì)胞死亡機(jī)制。近年來發(fā)現(xiàn)，自噬在 TRAIL 引起的腫瘤耐藥中有著重要的作用。

2.2.1.1 抑制自噬——增強(qiáng) TRAIL 抗腫瘤活性 研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌細(xì)胞長期暴露在 TRAIL 中，自噬增加，產(chǎn)生耐藥性，當(dāng) TRAIL 與自噬抑制劑氯喹聯(lián)合作用于 TRAIL 耐藥的乳腺癌細(xì)胞時(shí)，能扭轉(zhuǎn)這種耐藥性，使細(xì)胞對 TRAIL敏感，從而增強(qiáng)了抗腫瘤效果［5-6］。煙酸作用于人結(jié)腸癌細(xì)胞 HCT-116 時(shí)，能夠激活自噬流，使細(xì)胞逃離 TRAIL 引起的線粒體膜電位功能紊亂及細(xì)胞死亡。這表明，抑制自噬能增強(qiáng) TRAIL 的抗腫瘤活性［7］。

2.2.1.2 激活自噬——增強(qiáng) TRAIL 抗腫瘤活性 激活自噬也能增強(qiáng) TRAIL 的抗腫瘤活性［8］。例如查耳酮衍生物chalcone-24（Chal-24）通過激活肺癌細(xì)胞中的自噬來引起c-FLIPL 和 c-IAPs 的降解，進(jìn)而增強(qiáng) TRAIL 的抗腫瘤活性［9］。在甲狀腺癌中，增加自噬能使 TRAIL 敏感的 TPC-1細(xì)胞對 TRAIL 更加敏感，產(chǎn)生更好的抗腫瘤效果，而對于TRAIL 耐藥的 FRO 細(xì)胞，抑制自噬才能使其對 TRAIL敏感［10］，若封閉 TRAIL 敏感細(xì)胞中的自噬作用能夠降低對TRAIL 的敏感度，因此，保留基本的自噬水平對 TRAIL 誘導(dǎo)的凋亡是必需的［11］。

2.2.2 自噬與 TRAIL 介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡之間的機(jī)制

2.2.2.1 自噬小體和 p62 蛋白的積累 TRAIL 能夠激活TRAIL 耐藥細(xì)胞中的自噬流，導(dǎo)致 p62 降解并阻止caspase-8 激活，但在 TRAIL 敏感細(xì)胞中，TRAIL 能抑制自噬流，從而導(dǎo)致 caspase-8 活化和細(xì)胞凋亡［12］。研究發(fā)現(xiàn)，在自噬過程中的不同階段抑制自噬能導(dǎo)致 TRAIL 敏感的前列腺癌 PC3 細(xì)胞中對于 TRAIL 誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡產(chǎn)生不同結(jié)果：在 LC3 與自噬體 l 膜聯(lián)合之前，使用 3-甲基腺嘌呤來抑制自噬，能夠阻止 p62 的聚合和 caspase-8 的激活，從而抑制細(xì)胞死亡；而使用 CQ 來抑制自噬小體降解，并沒有影響 TRAIL 誘導(dǎo)的 PC3 細(xì)胞死亡。這表明，在缺乏自噬降解的情況下，自噬小體和 p62 蛋白質(zhì)聚合物的積累對于 TRAIL 誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡是必需的，在 TRAIL敏感細(xì)胞中自噬降解或許處于被抑制的狀態(tài)。

2.2.2.2 活性 caspase-8 的自噬溶酶體降解 活性caspase-8 的自噬溶酶體降解被認(rèn)為是自噬和 TRAIL 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的中間機(jī)制［10］。例如 TRAIL 引起 DNA 損壞，使 PARP 被激活，進(jìn)而發(fā)生 HMBG1 PARylation，HMBG1遷移到細(xì)胞質(zhì)中與 BECN-1 結(jié)合，啟動了自噬，減弱了caspase-8 活性，產(chǎn)生 TRAIL 耐藥，抑制 PARP1-HMGB1途徑能夠減弱自噬，從而增加 TRAIL 引起的凋亡。因此，TRAIL 耐藥細(xì)胞耐藥的原因之一是由于不同途徑啟動的自噬導(dǎo)致活性 caspase-8 的缺失［13］（圖 2）。

圖2 自噬與 TRAIL 介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡之間的機(jī)制

2.2.2.3 Beclin 1 和生存素相互作用 Beclin 1 和生存素之間的相互作用可能是自噬和凋亡之間另一個(gè)潛在的機(jī)制。實(shí)驗(yàn)表明，敲低 Beclin 1 能下調(diào)生存素，使神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞對 TRAIL 誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡敏感，當(dāng)引入生存素時(shí)能抵抗這種敏化效果，這表明下調(diào)生存素能增強(qiáng)細(xì)胞對 TRAIL 誘導(dǎo)凋亡的敏感性［14］。

2.3 TRAIL 誘導(dǎo)細(xì)胞壞死

當(dāng)用 caspase 抑制劑來抑制 caspase 活性時(shí)，TRAIL雖然無法誘導(dǎo)凋亡，但可以誘導(dǎo)受體相互作用蛋白激酶（receptor interacting protein kinase，RIPK）介導(dǎo)的細(xì)胞死亡，稱為程序性壞死［3］，這種類型的細(xì)胞死亡依賴于死亡小體的激活。當(dāng) caspase-8 缺失或被抑制時(shí)，RIPK1 和 RIPK3 通過 RIP 同型結(jié)構(gòu)域（RIP homotypic interaction motif，RHIM）相連接形成死亡小體，RIPK3 在死亡小體中自身磷酸化激活，募集并磷酸化混合譜系激酶（mixed lineage kinase-like，MLKL），使 MLKL 發(fā)生構(gòu)象變化，但是對于MLKL 誘導(dǎo)的凋亡性壞死的分子機(jī)制目前仍不完全清楚。有研究表明，MLKL 可能參與破壞和調(diào)節(jié)細(xì)胞膜孔的變形（圖 1）。

2.4 TRAIL 調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)

TRAIL 能夠在巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞、T 細(xì)胞、NK 細(xì)胞中表達(dá)，在自身免疫性疾病、細(xì)菌和病毒感染、腫瘤新陳代謝的免疫監(jiān)視中起重要作用［4］。TRAIL 通過 NF-κB 途徑誘導(dǎo)趨化因子 CXCL2、CCL4、CCL20 的分泌，這些趨化因子在生理環(huán)境下募集白細(xì)胞，從而調(diào)節(jié)炎癥［15］（圖 1）。TRAIL/TRAIL-R 途徑涉及免疫系統(tǒng)的調(diào)控與穩(wěn)定。例如，在大腦中，TRAIL-DR5 信號通路能調(diào)控炎癥、神經(jīng)增殖分化以及調(diào)節(jié)低氧-組織缺血后的腦損傷。TRAIL 受體缺陷的老鼠更容易產(chǎn)生 DSS（dextran sulphate sodium）誘導(dǎo)的結(jié)腸炎和結(jié)腸炎相關(guān)的癌變，并且在結(jié)腸炎期間，對免疫細(xì)胞有顯著的滲透性，在結(jié)腸上皮細(xì)胞也能觀察到超活化的Janus 激酶和 NF-κB，兩者均與嚴(yán)重的結(jié)腸炎有關(guān)［15］。隨著對 TRAIL 和免疫系統(tǒng)之間關(guān)系的不斷研究，TRAIL 的另一個(gè)完全矛盾的角色漸漸被發(fā)掘，即 TRAIL 能損傷正常細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)，慢性重癥肝炎患者的外周 NK 細(xì)胞能夠高表達(dá) TRAIL，并對人正常的肝臟細(xì)胞產(chǎn)生毒性，同時(shí)患者的血清和肝臟中還存在豐富的炎性細(xì)胞因子（IL-6、IL-8），能夠進(jìn)一步增強(qiáng) TRAIL 的表達(dá)和外周 NK 細(xì)胞的活化，因此在 IL-6/IL-8 的刺激和 NK 高表達(dá) TRAIL 所介導(dǎo)的肝細(xì)胞毒性的情況下，正常的肝臟細(xì)胞對 TRAIL 誘導(dǎo)的凋亡越來越敏感，導(dǎo)致肝損傷［16-17］。

3 TRAIL 的耐藥機(jī)制

3.1 TRAIL 功能性受體的缺失

TRAIL 耐藥和 TRAIL 受體的缺失有密切關(guān)系，在多種類型的腫瘤細(xì)胞中均發(fā)現(xiàn) DR4 和 DR5 功能性缺失。自噬體對 DRs 的吞噬作用導(dǎo)致 TRAIL 耐藥。例如，在TRAIL 耐藥的乳腺癌細(xì)胞 AU565 和 BT474 中，存在較高的自噬小體，DR4 和 DR5 共同連接在自噬體表面LC-3B上，導(dǎo)致膜表面 DR4/DR5 較少，從而產(chǎn)生耐藥性。當(dāng)使用 3-MA 破壞本底自噬體形成后，DR4/DR5 釋放到膜表面，增強(qiáng)了 TRAIL 耐藥細(xì)胞對 TRAIL 的敏感性。相反的，在 TRAIL 敏感的乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-231 中，膜表面 DR4/DR5 較高，并缺少本底自噬體，當(dāng)使用巴弗洛霉素 A1 抑制溶酶體活性后，細(xì)胞中自噬體積累，使膜表面 DR4/DR5 含量降低，從而降低了細(xì)胞對 TRAIL 的敏感性［18］。通過轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和翻譯后修飾調(diào)節(jié)能夠調(diào)節(jié) DRs 的表達(dá)與分布。轉(zhuǎn)錄因子 p53、CHOP、NF-κB、AP-1、FOXO3、Sp-1 等均能上調(diào) DRs，而轉(zhuǎn)錄因子 GLI-3 和 YYI 分別下調(diào) DR4、DR5。而某些癌細(xì)胞中，DRs 能在翻譯后修飾過程中被自噬體、細(xì)胞核膜捕獲，或者被保留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)/高爾基體中，導(dǎo)致細(xì)胞表面受體缺失，從而產(chǎn)生耐藥。

此外，Ras GTPase 途徑也能夠調(diào)節(jié) DRs 的表達(dá)。Ras家族包括 H-Ras、K-Ras、N-Ras，存在于 EGFR 的下游。在 TRAIL 耐藥細(xì)胞中，只有 H-Ras 過表達(dá)，功能特異性地敲低 H-Ras 能夠增加表面 DR4/5 的表達(dá)，增加 TRAIL耐藥細(xì)胞對 TRAIL 的敏感性［11］。

3.2 對 TRAIL 誘導(dǎo)的凋亡途徑的負(fù)性調(diào)節(jié)因子

3.2.1 拮抗受體——DcR1/DcR2/OPG 細(xì)胞內(nèi) DcR1、DcR2、OPG 受體表達(dá)較高時(shí)，能抑制 TRAIL 所誘導(dǎo)的凋亡途徑，產(chǎn)生耐藥。這三個(gè)拮抗受體因缺乏功能域 DD 展現(xiàn)出不同的抑制特性。OPG 是最弱的抑制劑，它與 TRAIL有較低的親和力，在某種程度上表現(xiàn)出與 DR4/DR5 競爭性結(jié)合 TRAIL 來抑制凋亡。DcR1/DcR2 與 TRAIL 有較高的親和力，DcR1 的 C 端有一個(gè) GPI 結(jié)構(gòu)，位于脂質(zhì)筏，當(dāng) TRAIL 刺激時(shí)不能與 DR4/DR5 形成異源多聚體，因此，DcR1 也是通過競爭性結(jié)合 TRAIL 來抑制 TRAIL 誘導(dǎo)的凋亡；而 DcR2 能夠在非脂質(zhì)筏區(qū)域共同募集DR4/DR5，形成異源多聚體復(fù)合物，但 DcR2 缺乏 DD 功能域，因此它的募集通過空間阻礙來妨礙 caspase-8 的激活［3］。

3.2.2 sigma 1 受體 sigma 1 受體（Sig1R）是位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的小分子跨膜蛋白，作為調(diào)節(jié)配體的分子伴侶，與TRAIL 誘導(dǎo)的凋亡有關(guān)。在前列腺癌細(xì)胞中，較高水平的Sig1R 能夠使細(xì)胞對 TRAIL 產(chǎn)生更強(qiáng)的耐藥性，因此，Sig1R 是 TRAIL 誘導(dǎo)凋亡的一個(gè)重要的調(diào)停蛋白［19］。

3.2.3 c-FLIP 同系物 在 TRAIL 耐藥細(xì)胞中，細(xì)胞型Fas 相關(guān)死亡域樣白介素 1β 轉(zhuǎn)換酶抑制蛋白（celluar Fas-associated death domain-like IL-1β converting inhibitory protein，c-FLIP）過表達(dá)。c-FLIP 是 caspase-8/10 主要負(fù)性同系物，和 caspase-8/10 一樣擁有兩個(gè) DED，能夠被TRAIL DISC 募集，并且 c-FLIP 的長鏈形式包含一個(gè)caspase-like 的結(jié)構(gòu)域，缺少 caspase 催化活性，能抑制caspase-8 鏈的形成、自我加工和激活，因此 c-FLIP 同系物主要抑制 TNF 家族誘導(dǎo)的凋亡。

3.2.4 Bcl-2 抗凋亡蛋白和凋亡抑制蛋白 在 II 型細(xì)胞中，Bax 的缺失或者 B 細(xì)胞淋巴瘤-2（B-cell lymphoma 2，Bcl-2）抗凋亡蛋白家族成員，如 Bcl-2、Mcl-1、Bc-xL 的過表達(dá)，均能抑制線粒體凋亡途徑，產(chǎn)生耐藥。而無論是I 型還是 II 型細(xì)胞，過表達(dá)的凋亡抑制蛋白（inhibitor ofapoptosis protein，IAP），如 XIAP、survive、cIAP，均能抑制 TRAIL 所誘導(dǎo)的凋亡。

3.3 生存信號途徑對 TRAIL 誘導(dǎo)的凋亡的調(diào)節(jié)

TRAIL 啟動的非凋亡途徑包括 MAPK、NF-κB 和PI3K-PKB/Akt 等途徑，均能增加不同種類正常/癌細(xì)胞增殖、生存、遷移、侵入或者炎癥的能力，從而產(chǎn)生 TRAIL 耐藥性。

TRAIL 激活的 MAPK 信號通路涉及一種可溶性的第二復(fù)合物的形成［3］。MAPK 主要包括三種不同的成員：胞外信號調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinases，ERKs）、c-Jun 氨基末端激酶（c-Jun N-terminal protein kinases，JNKs）和 p38 裂原激活蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase，p38 MAP kinases）。ERKs 是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)與阻礙 TRAIL 誘導(dǎo)凋亡有關(guān)的 MAPK 成員，能抑制 ERK 途徑，下調(diào) Mcl-2 蛋白，使結(jié)腸癌細(xì)胞對 TRAIL 敏感。p38 MAP kinases 則被認(rèn)為是調(diào)節(jié)酶的細(xì)胞因子。JNKs 涉及細(xì)胞增殖和凋亡，TRAIL 通過受體相互作用蛋白激酶 1（receptor-interacting protein kinase 1，RIPK1）和 TNF 受體相關(guān)因子 2（TNF receptor-associated factor 2，TRAF2）誘導(dǎo) JNKs 途徑。ERKs、JNKs 和 p38 的激活均依賴于細(xì)胞類型，并通過轉(zhuǎn)錄依賴或非依賴的方式調(diào)節(jié) TRAIL 受體、c-FLIP、Bcl-2 家族蛋白的表達(dá)來影響TRAIL 誘導(dǎo)的凋亡。NF-κB 是核轉(zhuǎn)錄因子，在 TRAIL 耐藥細(xì)胞已展現(xiàn)出 NF-κB 依賴性的炎癥表型，增強(qiáng) NF-κB信號能夠抵抗 TRAIL 誘導(dǎo)的凋亡，提高腫瘤轉(zhuǎn)移和侵入能力［4］。在 TRAIL 敏感細(xì)胞中，caspase-8 分裂受體相互作用蛋白 1（receptor interacting protein 1，RIP1）能封閉NF-κB 活性，進(jìn)而啟動 TRAIL 引起的凋亡，但如果將細(xì)胞持續(xù)暴露在低濃度的 TRAIL 中，激活的 NF-κB 不斷被積累，從而增加 miR21/30C/100 產(chǎn)生，進(jìn)一步下調(diào)caspase-8/TRAF-7/caspase-3/FoxO3a，導(dǎo)致 NF-κB 信號的增強(qiáng)，從而建立了一個(gè)正反饋環(huán)路，產(chǎn)生 TRAIL 耐藥和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化［20-21］。TRAIL 誘導(dǎo)激活 JNKs 和 NF-κB 途徑分為兩個(gè)階段：早期階段和延遲階段。早期階段是通過TRAF2/cIAP1 介導(dǎo)的 RIP1 泛素化進(jìn)行激活，延遲階段是通過 caspase 介導(dǎo)的 MEKK1 分裂和激活來產(chǎn)生的。cFLIP的過表達(dá)能夠促進(jìn)早期階段但是抑制延遲階段，當(dāng)在 RIP1或者 TRAF2 缺陷的細(xì)胞中穩(wěn)定地過表達(dá) cFLIP，會發(fā)現(xiàn)細(xì)胞能夠抵抗凋亡，但卻無法激活 NF-κB。而 Bcl-2 的過表達(dá)對這兩個(gè)階段均產(chǎn)生促進(jìn)作用。這些很好地解釋了TRAIL 激活 JNK 和 NF-κB 途徑的機(jī)制［22］。PI3K-PKB/Akt途徑的激活也涉及 TRAIL 耐藥。通過 PI3K 導(dǎo)致 Akt 的磷酸化和激活，而激活的 Akt 能磷酸化一系列底物，導(dǎo)致生存基因如 c-FLIP、Bcl-2、Mcl-1 或 XIAP 在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)或者磷酸化依賴性穩(wěn)定，最終導(dǎo)致 TRAIL 耐藥。在結(jié)腸癌細(xì)胞中抑制 PI3K/Akt 途徑能使細(xì)胞對 TRAIL 敏感（圖 3）。

4 TRAIL 聯(lián)合用藥策略

由于腫瘤細(xì)胞類型不同而存在多重 TRAIL 耐藥機(jī)制。因此，TRAIL 聯(lián)合用藥的策略也具有多樣性和針對性，而與 TRAIL 進(jìn)行聯(lián)合的藥物或化合物的選擇也是根據(jù)某種細(xì)胞的具體耐藥機(jī)制進(jìn)行針對性選擇，大致可以分為以下幾類：

⑴增加功能性受體 DR4/DR5 表達(dá)的藥物或死亡受體激動劑抗體：如曲格列酮（troglitazone，TGZ）［23］。

⑵c-FLIP 抑制劑或者激活 DISC 水平的 caspase-8 的藥物。

⑶Bcl-2、Mcl-1、Bc-xL 抑制劑或者 IAP 拮抗劑、survive 抑制劑。

圖3 TRAIL 的耐藥機(jī)制

⑷組蛋白脫乙酰酶抑制劑（HDACi）：如丙戊酸。

⑸與自噬相關(guān)的藥物：如氯喹、姜辣素、橡黃素［8］。

⑹與抑制 NF-κB 和 MAPK 信號途徑有關(guān)的藥物：如化合物 YM155、海兔素（aplysin）。

⑺常規(guī)的化療藥物：如喜樹堿、阿霉素、5-氟尿嘧啶、伊立替康、紫杉醇［23］。

⑻熱休克蛋白 90 抑制劑：如 NVP-AUY922。

⑼其他：高熱可以增強(qiáng)各癌癥細(xì)胞系對 TRAIL 誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡的敏感性，現(xiàn)已提出溫和熱休克治療能通過引起c-FLIP 退化或激活線粒體凋亡途徑來恢復(fù) Fas 配體或TRAIL-induced 的凋亡［24］。

通常藥物是通過多個(gè)途徑同時(shí)抵抗耐藥性，從而與TRAIL 產(chǎn)生聯(lián)合抗腫瘤效果。例如，姜烯酚能夠通過增加DR5 和促凋亡蛋白 Bax 表達(dá)，降低抗凋亡蛋白 survive 的表達(dá)來克服結(jié)腸癌細(xì)胞對 TRAIL 的耐藥［25］。

5 前景

目前，對于 TRAIL 誘導(dǎo)細(xì)胞死亡及其耐藥機(jī)制的研究已經(jīng)取得了很大的進(jìn)展，同時(shí)其聯(lián)合用藥的策略更是隨著這些機(jī)制的完善而有了更多的發(fā)現(xiàn)，這些都將推動 TRAIL 通過臨床研究。然而，由于腫瘤細(xì)胞的不同，TRAIL 耐藥機(jī)制具有多樣性，目前仍然無法尋找到一種或幾種聯(lián)合藥物能廣泛使用于腫瘤治療中，并且 TRAIL 所介導(dǎo)的凋亡與自噬之間的復(fù)雜關(guān)系也需要更深入的研究去發(fā)現(xiàn)中間的關(guān)聯(lián)機(jī)制。在未來，這些問題的解決將會加快 TRAIL 藥物上市的步伐。

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10.3969/j.issn.1673-713X.2016.05.011

國家自然科學(xué)基金（81373437、81321004）

100050 北京，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所腫瘤室

陳淑珍，Email：bjcsz@imb.pumc.edu.cn

2016-07-12