河北省唐山市人民醫(yī)院彩超室(唐山 063000)

王海霞 劉景萍 梁永平 胡 健 趙西鳳

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肝細(xì)胞肝癌超聲造影峰值強度與血管生成相關(guān)性分析*

河北省唐山市人民醫(yī)院彩超室(唐山 063000)

王海霞 劉景萍 梁永平 胡 健 趙西鳳

目的：探討肝細(xì)胞肝癌(HCC)超聲造影峰值強度與血管生成的相關(guān)性。方法：選擇HCC患者100例，運用免疫組化法(SP)測定其病灶組織與癌旁組織的微血管密度(MVD)，并采用超聲造影檢查超聲造影峰值強度(PI)，研究兩者之間的關(guān)系。結(jié)果：100例HCC 106個病灶超聲造影特征為“快進(jìn)快退”，進(jìn)一步分析 TIC 是上升支陡直，達(dá)峰值比較迅速，病灶峰值強度比癌旁組織的峰值強度更強。病灶組織PI平均值為45.73±9.52 dB,明顯高于癌旁組織PI平均值18.91±7.16 dB(P<0.05)；病灶組織MVD 平均值為51.56±11.74，明顯高于癌旁組織MVD 平均值19.85±8.32 (P<0.05)。免疫組化染色結(jié)果顯示,HCC 病灶里面存在豐富的微血管,但是在癌旁組織里面則發(fā)現(xiàn)的微血管比較少。病灶組織及癌旁組織PI與MVD計數(shù)呈現(xiàn)正相關(guān)的關(guān)系(r=0.791,P<0.05)。結(jié)論：HCC超聲造影峰值強度與血管生成呈正相關(guān),可通過超聲造影峰值強度評估患者微血管密度，也可為HCC臨床診斷及預(yù)后預(yù)測提供有價值的參考。

肝細(xì)胞肝癌(HCC)屬于人類常見的一種惡性腫瘤，預(yù)后較差，病死率比較高。研究證實[1-2],血管生成可促進(jìn)HCC的發(fā)生、侵襲、生長與轉(zhuǎn)移等,而微血管密度(MVD)則常常用來反應(yīng)肝癌患者體內(nèi)新生成的血管情況,通過MVD也可以有效判斷出癌癥患者的預(yù)后。常規(guī)彩超是臨床上首選的微血管診斷手段,然而因為微血管存在顯示困難等因素,致使HCC早期難以正確診斷出來[3]。超聲造影(CEUS)技術(shù)則是近年來隨著超聲技術(shù)的日益發(fā)展而新興起來的一種動態(tài)監(jiān)測癌組織的血流灌注過程，可較好地反映出癌組織的血供特征，有益于癌癥定性及定量的診斷[4]。本文旨在分析HCC超聲造影峰值強度與血管生成的相關(guān)性，以期為HCC的臨床診斷開辟新的方法及途徑。

資料與方法

1 一般資料 選擇2014 年3 月至2016年3 月我院收治的HCC患者100例(106個病灶)，其中男58例，女42例；年齡36～74歲，平均年齡55.3±1.6歲；結(jié)節(jié)直徑3～5 cm，平均直徑3.6±1.2 cm。

2 儀器和試劑 超聲診斷儀為GE LOGIQ E9,由美國生產(chǎn),超聲探頭型號為C1-5型,并配套有CPS超聲造影成像軟件與ACQ超聲造影定量分析軟件。造影劑為六氟化硫微泡(聲諾維)則為上海博萊科信誼藥業(yè)有限責(zé)任公司提供。羊抗鼠試劑盒為上海佳和生物科技有限公司提供，鼠抗人CD34單克隆抗體為上海佳和生物科技有限公司提供。

3 方 法 ①超聲造影：運用二維和彩超全面掃查患者肝臟與其病灶部位，詳細(xì)記錄患者病灶大小、病灶位置、病灶邊界及內(nèi)部血供情況等。開啟CPS超聲造影系統(tǒng)，注入適量的造影劑，調(diào)節(jié)機械操作指數(shù)，動態(tài)監(jiān)測患者的病灶區(qū)域、癌旁肝組織超聲回聲強度、血流灌注過程，然后將超聲造影數(shù)據(jù)給予記錄并存盤。超聲造影完成之后，通過ACQ分析軟件對超聲圖像定性及定量分析。選擇好動脈期的感興趣區(qū)域，對患者強化最為明顯之病灶部位與其癌旁組織進(jìn)行造影時間-強度曲線(TIC)的繪制，這樣就可以得出病灶部位、癌旁組織之造影峰值強度(PI)。②免疫組化檢查：選擇106個病灶經(jīng)超聲造影檢查而顯示出動態(tài)增強區(qū)域(ROI)的組織標(biāo)本，使用蘇木素-伊紅實施染色操作,SP法CD34染色,觀察肝癌病灶及癌旁組織微血管染色,并測定MVD值。設(shè)置陽性與陰性對照,以抑制陽性HCC組織作為陽性對照,以PBS代替一抗,當(dāng)作陰性對照。在光鏡下(×200)下察看并且選擇微血管,在染色最為清楚的區(qū)域中選擇5個背景對照比較佳的視野較小的微血管計數(shù),取其平均值進(jìn)行計數(shù),以此當(dāng)作MVD。

4 統(tǒng)計學(xué)方法 使用SPSS 21.0對各項資料進(jìn)行統(tǒng)計分析，PI與MVD之間關(guān)系采用直線相關(guān)性分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 病灶與癌旁組織超聲造影特征比較 見圖 1、2。100例HCC 106個病灶超聲造影特征為“快進(jìn)快退”，進(jìn)一步分析 TIC 是上升支陡直，達(dá)峰值比較迅速，病灶峰值強度比癌旁組織的峰值強度更強。

圖1 超聲造影顯示肝S3段腫塊動脈期呈高增強

圖2 TIC顯示癌腫峰值強度強于癌旁組織

2 免疫組化染色結(jié)果比較 病灶組織PI平均值為45.73±9.52 dB,明顯高于癌旁組織PI平均值18.91±7.16 dB (P<0.05)；病灶組織MVD 平均值為51.56±11.74，明顯高于癌旁組織MVD 平均值19.85±8.32 (P<0.05)。免疫組化染色結(jié)果顯示，HCC 病灶里面存在豐富的微血管(見圖3)，但是在癌旁組織里面則發(fā)現(xiàn)的微血管比較少(見圖4)。

圖3 病灶組織的微血管染色(CD34×200)

圖4 癌旁組織的微血管染色(CD34×200)

3 PI和MVD之間的關(guān)系 見圖5。病灶組織及癌旁組織PI與MVD計數(shù)呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系(r=0.791，P<0.05)。

圖5 PI與MVD的關(guān)系

討 論

腫瘤生長“血管依賴說”是近年來腫瘤界關(guān)注的一個話題，此學(xué)說認(rèn)為，新生血管對于腫瘤在人體中的生長與發(fā)展過程中的作用很重要，可用于肝細(xì)胞肝癌預(yù)后判斷[5-6]。研究表明[7-8]，新生血管可以為癌癥細(xì)胞生長給予充足的氧氣及其他營養(yǎng)物質(zhì)，也可以加快腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移。而MVD則可以比較客觀地反映出病灶組織之新生血管情況，通過MVD計數(shù)則可以判斷出癌癥患者的臨床預(yù)后。常規(guī)檢查MVD方法是通過組織學(xué)標(biāo)本進(jìn)行測定，此項方法操作復(fù)雜，會給人體帶來一定的創(chuàng)傷，很難在術(shù)前進(jìn)行準(zhǔn)確的判斷，導(dǎo)致組織學(xué)MVD計算難以在臨床中得到廣泛的應(yīng)用[9]。鑒于此，有必要探究出一種具有無創(chuàng)性、操作簡單，可以反復(fù)在活體進(jìn)行操作測定MVD的方法。

超聲造影屬于近年來新興起來的一種影像診斷方法，它是在超聲造影劑的輔助下，通過低機械指數(shù)對病灶部位進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測，并根據(jù)成像特征進(jìn)行觀察血液灌流分布，對腫瘤組織作定性及定量診斷。與常規(guī)的超聲技術(shù)比較，超聲造影由于得到超聲造影劑的輔助，進(jìn)而可以更敏感地觀察到病灶組織，提升臨床診斷的準(zhǔn)確性，也可以更好地將人體血流分布及灌注情況顯示出來[10]。

本研究顯示，100例HCC 106個病灶超聲造影特征為“快進(jìn)快退”，進(jìn)一步分析 TIC 是上升支陡直，達(dá)峰值比較迅速，病灶峰值強度比癌旁組織的峰值強度更強。病灶組織PI平均值為45.73±9.52 dB ，明顯高于癌旁組織PI平均值18.91±7.16 dB(P<0.05)；病灶組織MVD 平均值為51.56±11.74,明顯高于癌旁組織MVD 平均值19.85±8.32(P<0.05)。免疫組化染色結(jié)果顯示,HCC 病灶里面存在豐富的微血管,但是在癌旁組織里面則發(fā)現(xiàn)的微血管比較少。病灶組織及癌旁組織PI與MVD計數(shù)呈現(xiàn)正相關(guān)的關(guān)系(r=0.791,P<0.05)。研究提示,肝細(xì)胞肝癌的病灶組織中的超聲造影峰值強度PI較對應(yīng)的癌旁組織PI更強,PI跟MVD計數(shù)呈正相關(guān),PI值愈大則MVD水平越高；通過病灶組織的PI測定能夠推測出肝細(xì)胞肝癌MVD的水平，從而可判斷出肝癌病灶組織中的新生血管生長情況。也說明腫瘤組織的血流灌注較癌旁組織更高。

綜上所述，HCC超聲造影峰值強度與血管生成呈正相關(guān),可通過超聲造影峰值強度評估患者微血管密度,進(jìn)而評價血管生成情況,可為HCC臨床診斷及預(yù)后預(yù)測提供理論參考。

[1] 蔣映豐,周啟昌.超聲造影在肝臟良惡性腫瘤鑒別診斷中的價值[J].中南大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版,2012，37(1)： 53-56．

[2] 韋 柳,李智賢,彭 濤,等.超聲造影鑒別診斷肝硬化背景下的小肝癌與不典型增生結(jié)節(jié)[J].中華醫(yī)學(xué)影像技術(shù),2012,28(6):1140-1143．

[3] 楊一林,段云友,楊瑞靜,等.超聲造影時間強度量化分析與肝細(xì)胞肝癌VEGF 表達(dá)及微血管密度間關(guān)系的初步研究[J].中華超聲影像學(xué)雜志,2011,20(4)：307-310.

[4] Partovi S,Kaspar M,Aschwanden M,etal.Contrast-enhanced ultrasound after endovascular aortic Repair-current status and future perspectives[J].Cardiovascular Diagnosis & Therapy,2015,5(6)：454-463.

[5] 蘇 巖.超聲對肝細(xì)胞肝癌診斷價值及其與腫瘤血管生成相關(guān)性分析[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2014,11(6): 784.

[6] Klotz LV,Dirk-Andre C,Siiri S,etal.Contrast-enhanced Ultrasound Imaging of Antiangiogenic Tumor Therapy[J].Anticancer Research,2015,35(5)：2571-2576.

[7] 海賽蘋,楊麗春.超聲造影誤診肝血管平滑肌脂肪瘤為肝細(xì)胞肝癌1例 [J].臨床超聲醫(yī)學(xué)雜志,2015,17 (11)：777.

[8] 王曉東,趙 萍.二維與三維超聲造影在原發(fā)性肝癌射頻治療中的應(yīng)用比較[J].中山大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)科學(xué)版,2014,35(4)：602-606.

[9] 郭長義,楊 林，劉 健.超聲造影在原發(fā)性肝癌介入治療中的應(yīng)用價值[J].川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2012，27(1)： 77.

[10] 陳 瓊.超聲造影診斷原發(fā)性肝癌的現(xiàn)狀及新進(jìn)展[J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2013,18(9)：857-860.

(收稿：2016-04-27)

*河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點課題計劃(20150974)

癌,肝細(xì)胞 超聲檢查 微血管 @超聲造影時間-強度曲線

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10.3969/j.issn.1000-7377.2016.10.014