耿樹香，寧德魯，李勇杰，陳海云，張艷麗，肖良俊

(1.云南省林業(yè)科學(xué)院，云南　昆明 650201；2.云南省木本油料工程技術(shù)研究中心，云南　昆明 650201)

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云南省主栽核桃品種內(nèi)種皮中多酚的檢測(cè)分析*

耿樹香1,2，寧德魯1,2，李勇杰1,2，陳海云1,2，張艷麗1,2，肖良俊1,2

(1.云南省林業(yè)科學(xué)院，云南昆明 650201；2.云南省木本油料工程技術(shù)研究中心，云南昆明 650201)

以云南主栽核桃內(nèi)種皮為材料，采用HPLC對(duì)核桃仁種皮中的多酚類物質(zhì)進(jìn)行分析研究。結(jié)果表明，檢測(cè)到酚酸類物質(zhì)含量較高的有兩種(沒食子酸與綠原酸)，其中沒食子酸含量最低為4.06μg/g，最高含量為395.73μg/g，差異較顯著；綠原酸含量最低為1.02μg/g，最高含量為464.09μg/g，差異較顯著。黃酮類物質(zhì)中的槲皮素含量最低為0.01μg/g，最高含量為10.13μg/g，差異也較顯著。其他的多酚類物質(zhì)較少或近沒有。

核桃；內(nèi)種皮；多酚；高壓液相色譜

核桃(Juglansregia)除了含有豐富的不飽和脂肪酸、優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)和少量的碳水化合物外，還含有豐富的具生理活性的多酚類物質(zhì)，可對(duì)人體起積極的抗氧化作用[1～4]。許多黃酮、多酚類化合物具有抗氧化、抗腫瘤、抗病毒、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抑菌、降血糖、降血脂、抗衰老、抗輻射、改善血液循環(huán)、提高免疫力、降血壓、防止肥胖、改善記憶等多方面的功效[5～6]，是近年研發(fā)的熱點(diǎn)。酚類化合物具有澀味，不同品種的核桃仁的色澤及苦澀味不同，表明其多酚和黃酮含量不同[7～8]。核桃仁多酚和黃酮主要集中在種皮[9]，多酚以沒食子酸含量最高，黃酮?jiǎng)t以蘆丁含量最高[10]。

核桃內(nèi)種皮(Walnut Kernel Pellicle)為包裹在核仁表面的一層薄膜，鮮核桃內(nèi)種皮呈黃色或淺黃色，干制后發(fā)生一定程度的褐變。在核桃加工產(chǎn)業(yè)內(nèi)種皮常被當(dāng)作廢棄物處理。如在核桃乳加工中，為了防止蛋白質(zhì)沉淀，首要步驟便是去除內(nèi)種皮。但許多研究已表明，核桃內(nèi)種皮中含有豐富的多酚類物質(zhì)。與熟知的茶多酚、葡萄籽多酚類似，內(nèi)種皮多酚也具有眾多的營(yíng)養(yǎng)保健功能，包括清除人體自由基、抗衰老、抑制腫瘤增生等。核桃內(nèi)種皮可以用來(lái)泡水喝，可以緩解身體疲勞，保護(hù)血管的健康，增強(qiáng)腸胃的蠕動(dòng)能力，治療便秘。微波萃取具有用時(shí)短的特點(diǎn)，能縮短提取時(shí)間。核桃多酚類物質(zhì)主要集中于內(nèi)種皮，是核桃仁產(chǎn)生收斂性的原因。本文研究云南主栽的核桃品種內(nèi)種皮多酚單體成分的差異，為云南富含多酚核桃品種的研發(fā)提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料及試劑

材料核桃供試材料于2015年8月15日至9月30日采自云南23個(gè)核桃主栽區(qū)。具體采樣點(diǎn)見表1。所采鮮樣直接手工剝皮，剝好的內(nèi)種皮自然晾干后備用。

試劑甲醇、甲酸及磷酸為分析純?cè)噭?；沒食子酸、綠原酸、槲皮素為國(guó)產(chǎn)色譜純標(biāo)準(zhǔn)品。

表1　供試核桃樣品Tab.1　Supplied walnut sample for test

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1核桃內(nèi)種皮多酚物質(zhì)的提取

精確稱取0.1g左右的烘干樣品，0～4℃冰浴磨碎，加入10mL甲醇超聲提取15min，然后搖床12h，提取液離心，殘?jiān)尤?0mL甲醇重復(fù)提取2次合并上清液，過濾，吹氮，復(fù)溶至10mL取1mL高速離心，待液相色譜分析。

1.2.2核桃內(nèi)種皮多酚物質(zhì)的HPLC色譜分析條件

核桃仁包衣中多酚單體沒食子酸、綠原酸、槲皮素分析采用高效液相色譜法。樣品預(yù)處理：吸取1mL提取液于1 000r/min離心10min，用0.22μm濾膜超濾機(jī)上過濾后備用。標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：分別稱取不同量的沒食子酸、綠原酸、槲皮素用甲醇定容至5mL，得各單標(biāo)溶液。

HPLC條件Water XBridgeTMAmide 色譜柱(46mm×150mm，3.5μm)；流動(dòng)相為70%乙醇，等梯度洗脫20min；流速1mL/min，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm。

沒食子酸、綠原酸液相條件Agilent zorbax SB-Aq(4.6mm×250mm，5um)；流動(dòng)相為0.1%甲酸水(A)-甲醇(B)；梯度洗脫：0min(100%A)，20min(95%A+5%B)，40min(100%B)；流速0.8mL/min，溫度30℃，進(jìn)樣量10μL，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。

槲皮素液相色譜條件Agilent zorbax SB-Aq(4.6mm×250mm，5um)；流動(dòng)相：70%甲醇+30%水，用磷酸調(diào)pH值到3；流速0.8mL/min，溫度30℃，進(jìn)樣量20μL，檢測(cè)波長(zhǎng)365nm。

2　結(jié)果與分析

2.1酚酸類物質(zhì)的回歸分析

高壓液相色譜分析表明，在云南主產(chǎn)區(qū)的23個(gè)核桃樣品內(nèi)種皮中的酚酸類多酚為沒食子酸及綠原酸，類黃酮物質(zhì)為槲皮素。其中沒食子酸的保留時(shí)間為2.45min，線性方程為y=428.26x+0.442 1，回歸系數(shù)R2=0.997 9，沒食子酸在質(zhì)量濃度為0.1～2μg/mL，質(zhì)量濃度與吸光度值呈良好的線性關(guān)系。綠原酸的保留時(shí)間為4.22min，線性方程為y=1 815.1x+66.396，回歸系數(shù)R2=0.992 7，沒食子酸在質(zhì)量濃度為0.1～2μg/mL，質(zhì)量濃度與吸光度值呈良好的線性關(guān)系。槲皮素的保留時(shí)間為7.15min，線性方程為y=2 711.6x+33.699，回歸系數(shù)R2=0.994 4，沒食子酸在質(zhì)量濃度為0.02～0.2μg/mL，質(zhì)量濃度與吸光度值呈良好的線性關(guān)系。見表2和圖1。

表2　核桃內(nèi)種皮酚酸類物質(zhì)的回歸分析參數(shù)Tab.2　Regression indexes of the polyphenols in the walnut kernel pellicle

2.2不同產(chǎn)地核桃內(nèi)種皮中酚酸類物質(zhì)的含量分析

所收集的23個(gè)核桃內(nèi)種皮樣測(cè)定結(jié)果見表3。其中沒食子酸含量最低的為5號(hào)樣(云新301，4.06μg/g)，含量最高為17號(hào)樣(漾濞漾泡，395.73μg/g)；綠原酸含量最低的為10號(hào)樣(保山細(xì)香，1.02μg/g)，含量最高為23號(hào)樣(大麻二號(hào)，464.09μg/g)。類黃酮槲皮素含量最低的為12號(hào)樣(臨滄漾泡，0.01μg/g)，含量最高為15號(hào)樣(石屏紫金，10.13μg/g)。

圖1　沒食子酸、綠原酸、槲皮素的曲線圖Fig.1　Curve of gallic acid,chlorogenic acid and quercetin表3　不同核桃品種內(nèi)種皮中沒食子酸、綠原酸及槲皮素的含量Tab.3　Content of gallic acid,chlorogenic acid and quercetin in difference walnut varieties’ kernel pellicle

圖2沒食子酸、綠原酸、槲皮素的柱狀圖

Fig.2Bar graphs of gallic acid,chlorogenic

acid and quercetin

2.3柱狀圖分析

由沒食子酸柱狀圖可看出，沒食子酸含量稍高的核桃內(nèi)種皮為13、16、17、22號(hào)樣，含量分別為249.49μg/g、356.36μg/g、395.73μg/g、194.36μg/g。由綠原酸柱狀圖可看出，綠原酸含量稍高的核桃內(nèi)種皮為14、19、22、23號(hào)樣，含量分別為162.31μg/g、207.75μg/g、309.71μg/g、464.09μg/g。由槲皮素柱狀圖可看出，槲皮素含量稍高的核桃內(nèi)種皮為15、16、17、22號(hào)樣，含量分別為10.13μg/g、7.95μg/g、8.22μg/g、9.70μg/g。由此可知，多酚類物質(zhì)含量高的品種集中于15、16、17及22號(hào)樣中，即富多酚核桃品種為石屏紫金、大姚三臺(tái)、漾濞漾泡及華寧大白殼。

3　結(jié)論

所收集的云南主栽區(qū)核桃試樣中，其中沒食子酸含量最低的為5號(hào)樣(云新301)，為4.06μg/g，含量最高為17號(hào)樣(漾濞漾泡)，為395.73μg/g，差異較顯著。綠原酸含量最低的為10號(hào)樣(保山細(xì)香)，為1.02μg/g，含量最高為23號(hào)樣(大麻二號(hào))，為464.09μg/g，差異也較顯著。類黃酮槲皮素含量最低的為12號(hào)樣(臨滄漾泡)，為0.01μg/g，含量最高為15號(hào)樣(石屏紫金)，為10.13μg/g，差異也較顯著。其他的多酚類物質(zhì)較少或近沒有。核桃內(nèi)種皮集中了核桃仁中大部分多酚類物質(zhì)，是核桃產(chǎn)生澀味主因，但去種皮核桃加工雖口感較好，其生理活性反而降低，故在核桃加工中應(yīng)考慮其營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值。

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Detection of Walnut Kernel Pellicle from the Main Walnut Varieties in Yunnan Province

GENG Shu-xiang1,2,NING De-lu1,2,LI Yong-jie1,2,CHEN Hai-yun1,2,ZHANG Yan-li1,2,XIAO Liang-jun1,2

(1.Yunnan Academy of Forestry,Kunming Yunnan 650201,P.R.China；2.Woody Oil Engineering Technology Research Center of Yunnan Province,Kunming Yunnan 650201,P.R.China)

Taking 23 main producing areas of walnut seed coat as raw material in Yunnan,we analyzed the polyphenols in the walnut kernel pellicle by HPLC.The results showed that the content of gallic acid and chlorogenic acid was higher than others.The lowest gallic acid content was 4.06μg/g and the highest concentration was 395.73μg/g,the difference was significant.The lowest content of chlorogenic acid was 1.02μg/g and the highest content was 464.09μg/g,the difference was significant.The lowest content of quercetin was 0.01μg/g and the highest content was 10.13μg/g,the difference was significant also.Other polyphenols were less or nearly none.

walnut；walnut kernel pellicle；polyphenols；High Pressure Liquid Chromatography

10.16473/j.cnki.xblykx1972.2016.05.024

2016-04-20

云南省林業(yè)廳木本油料創(chuàng)新項(xiàng)目“云南主栽核桃品種品質(zhì)評(píng)價(jià)”([2014]CX06)及“云南核桃遺傳資源調(diào)查編目”([2014]CX01)。

耿樹香(1978-)，女，副研究員，主要從事林產(chǎn)化工研究。E-mail：gsx05@126.com

簡(jiǎn)介:寧德魯(1974-)，男，研究員，碩士生導(dǎo)師，主要從事經(jīng)濟(jì)林良種選育、豐產(chǎn)栽培等方面的研究推廣工作。

E-mail：ningdelu@163.com

TS 255.7;S 664.1

A

1672-8246(2016)05-0124-04