李 瑩，楊 劍，黃麗紅，彭世球，苗燕平，徐翠玲

（1、江西省血液中心質(zhì)管科，江西南昌330052；2、江西省腫瘤醫(yī)院急診科，江西南昌330029）

·輸血與檢驗·

三種方法批量全血制備的紅細(xì)胞產(chǎn)品質(zhì)量分析

李 瑩1，楊 劍2，黃麗紅1，彭世球1，苗燕平1，徐翠玲1

（1、江西省血液中心質(zhì)管科，江西南昌330052；2、江西省腫瘤醫(yī)院急診科，江西南昌330029）

目的使用并改進(jìn)儀器自動化批量全血制備流程及方法，制備出符合國家標(biāo)準(zhǔn)的血液。方法對比分析手工法、改進(jìn)前儀器法及改進(jìn)后儀器法分離全血制備出紅細(xì)胞產(chǎn)品的容量、儲存期末溶血率、血細(xì)胞比容及血紅蛋白含量。結(jié)果三種方法紅細(xì)胞外觀質(zhì)量及全項質(zhì)量抽檢均符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求，三種方法制備紅細(xì)胞的血細(xì)胞比容、血紅蛋白含量其差異不具統(tǒng)計學(xué)意義，改進(jìn)后儀器法制備紅細(xì)胞的儲存期末溶血率、紅細(xì)胞容量與手工法、改進(jìn)前儀器法相比其差異具統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論使用改進(jìn)后儀器法進(jìn)行批量全血制備，紅細(xì)胞產(chǎn)品質(zhì)量符合國家標(biāo)準(zhǔn)，且能有效提升紅細(xì)胞容量標(biāo)準(zhǔn)化。

自動化制備；批量全血制備；紅細(xì)胞產(chǎn)品質(zhì)量

近幾年，憑借比較手工制備的優(yōu)勢，使用血液成分分離機進(jìn)行的儀器自動化制備在成分血液制備應(yīng)用越來越廣泛，越來越多的血站開始使用血液成分分離機進(jìn)行批量的全血分離制備［1-8］。為推進(jìn)我省成分制備的自動化信息化，我們對儀器自動化批量分離全血的流程和方法進(jìn)行了改進(jìn)，并對改進(jìn)后儀器法制備的去白懸浮紅細(xì)胞（以下簡稱“紅細(xì)胞”）產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行了全面的分析，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)來源本中心2013年5月至2015年9月期間，血液成分分離機分離明細(xì)表和統(tǒng)計分析表、現(xiàn)代血站管理系統(tǒng)（Mordern 5.0）和唐山現(xiàn)代科技公司啟奧9.0信息管理系統(tǒng)中的全血分離信息，以及成分制備現(xiàn)場相關(guān)工作記錄。

1.2 樣本來源本血液中心2013年5月至2015年9月無償獻(xiàn)血者所獻(xiàn)全血，包括400ml、300ml及200ml三種規(guī)格，及全血制備的紅細(xì)胞和新鮮冰凍血漿（以下簡稱“血漿”）。

1.3 儀器與耗材全血成分分離儀LMB SEPAMATIC-SLⅢ（深圳普特公司），大容量低溫離心機Cryorfuge 6000i（美國熱電公司），Q-400五聯(lián)袋、T-300四聯(lián)袋及200四聯(lián)袋（上海輸血技術(shù)有限公司）。血細(xì)胞計數(shù)儀KX-21（希森美康公司）、分光光度計7230G、水浴箱Julabo、PHS-25型實驗室PH計、托盤天平BPII、血凝儀CA-500（希森美康公司）、細(xì)菌培養(yǎng)儀BACTEC9050。

1.4 制備方法流程

1.4.1 手工法（以下簡稱“方法1”）流程按照血站技術(shù)操作規(guī)程［9］全血濾除白細(xì)胞（以下簡稱“濾白”）后，大容量低溫離心機離心兩次后手工制備紅細(xì)胞及新鮮冰凍血漿（以下簡稱“血漿”）。第一次離心參數(shù)：離心轉(zhuǎn)速4000r/min，離心時間8min，加速度9，減速度7，離心溫度4℃。第二次離心參數(shù)：離心轉(zhuǎn)速3260rpm，離心時間4min，加速度9，減速度4，離心溫度4℃。2013年5月至11月本中心采集的全血大部分為該方法制備，2013年12月至2015年9月部分全血使用該方法制備。

1.4.2 改進(jìn)前儀器法（以下簡稱“方法2”）流程按照血站技術(shù)操作規(guī)程［9］全血濾白后，大容量低溫離心機離心兩次后儀器自動化分離制備紅細(xì)胞與血漿，兩次離心參數(shù)同方法1。2014年12月至2015年4月本中心采集的全血部分為該方法制備。

1.4.3 改進(jìn)后儀器法（以下簡稱“方法3”）流程按照血站技術(shù)操作規(guī)程［9］全血濾白后，大容量低溫離心機離心一次后儀器自動化分離制備紅細(xì)胞與血漿。離心參數(shù)：離心轉(zhuǎn)速3880r/min，離心時間15min，加速度9，減速度4，離心溫度4℃。離心后使用血液成分分離機分離出紅細(xì)胞與血漿，對血漿進(jìn)行外觀檢查，符合外觀質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)者，操作儀器使其自動排氣熱合為成品，不符合外觀質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)者，操作儀器熱合成品紅細(xì)胞，血漿與其聯(lián)接的兩個轉(zhuǎn)移袋熱合后進(jìn)行二次離心，離心參數(shù)及血漿成漿方法同方法1第二次離心。2015年5月至9月采集的全血部分為該方法制備。

1.5 質(zhì)量控制指標(biāo)每袋紅細(xì)胞都經(jīng)肉眼外觀質(zhì)量檢查，隨機抽取紅細(xì)胞檢測其容量、儲存期末溶血率、血細(xì)胞比容及血紅蛋白含量。

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析使用STATA 7.0統(tǒng)計學(xué)軟件包，采用方差分析、秩和檢驗（數(shù)據(jù)方差不齊時使用）對各質(zhì)量檢測項目的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，秩和檢驗兩兩比較采用bonferroni法調(diào)整檢驗水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 外觀質(zhì)量采用三種方法制備出來的紅細(xì)胞肉眼外觀質(zhì)量均符合國家標(biāo)準(zhǔn)［10］。

2.2 紅細(xì)胞全項質(zhì)量檢測項目的分析通過全項質(zhì)量檢測的抽查，三種方法制備的紅細(xì)胞各項目檢測結(jié)果包括儲存期末溶血率（以下簡稱“儲末溶”）、血細(xì)胞比容及血紅蛋白均符合國家標(biāo)準(zhǔn)［10］，具體見以下分析。

儲末溶的國家標(biāo)準(zhǔn)為＜紅細(xì)胞總量0.8%，血細(xì)胞比容的國家標(biāo)準(zhǔn)為0.45～0.60，血紅蛋白含量國家標(biāo)準(zhǔn)為≥100g/L。經(jīng)方差分析、秩和檢驗及bonferroni法調(diào)整檢驗水準(zhǔn)進(jìn)行分析，三種方法的全項質(zhì)量檢測項目統(tǒng)計見表1。

表1 紅細(xì)胞全項質(zhì)量檢測項目的分析

由表1可知，方法3的儲末溶和血細(xì)胞比容均值大于方法1和2，方法2和3的血紅蛋白均值大于方法1。

儲末溶三種方法差異具統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。其兩兩之間比較，方法1與2的差異不具統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.017），但方法1與3，方法2與3的差異均具統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.017）。

血細(xì)胞比容三種方法差異不具統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。三種方法兩兩比較后其差異均不具統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

血紅蛋白含量三種方法差異不具統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），三種方法兩兩比較其差異也不具統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3 三種方法紅細(xì)胞產(chǎn)品容量的分析三種方法制備的紅細(xì)胞產(chǎn)品分為三個規(guī)格，即2U、1.5U及1U，國家標(biāo)準(zhǔn)的容量要求為標(biāo)示量（ml）±10%，我中心對這三個規(guī)格的紅細(xì)胞設(shè)置的標(biāo)示量分別為295ml、225ml及155ml。我中心日常對三種方法制備的紅細(xì)胞產(chǎn)品進(jìn)行隨機抽取重量稱量，然后換算成容量。

經(jīng)方差分析，三種方法制備的紅細(xì)胞產(chǎn)品容量統(tǒng)計見表2。

表2 三種方法紅細(xì)胞產(chǎn)品容量的分析

2U紅細(xì)胞容量三種方法差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），三種方法兩兩比較其差異均具統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

1.5 U紅細(xì)胞容量三種方法差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。三種方法兩兩比較后，方法1與2，方法1與3差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），方法2與3其差異具統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

1U紅細(xì)胞容量三種方法差異有統(tǒng)計學(xué)意義（＜0.05）。三種方法兩兩比較后，方法1與2，方法1與3差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），方法2與3其差異具統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

我中心使用的三種方法均依據(jù)國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程［9］，濾白、人工熱合的過程均相同，不同的是離心、分漿過程，其中分漿過程中通過紅細(xì)胞與血漿界面判斷并予以分離產(chǎn)生紅細(xì)胞產(chǎn)品。方法1利用肉眼判斷紅細(xì)胞與血漿界面予以手工分離，方法2和3利用儀器紅細(xì)胞界面探測判斷并予以儀器擠壓分離。

從表1可以看到，方法3的儲末溶均值高于方法1和2，且和方法1、2的對比差異具顯著統(tǒng)計學(xué)意義，說明方法3對紅細(xì)胞的破壞大于方法1和2。分析原因是方法3的第一次離心參數(shù)與另兩種方法不同所致（第二次離心只針對血漿，對紅細(xì)胞無影響）。方法3離心轉(zhuǎn)速為3880r/min，離心時間為15min，方法1和2的離心轉(zhuǎn)速為4000r/min，離心時間為8min，雖然方法3的離心轉(zhuǎn)速降低，但同時離心時間卻延長幾乎1倍，對紅細(xì)胞造成了一定的影響，加大了對紅細(xì)胞的破壞，但還是在允許范圍內(nèi)（方法3儲末溶符合國家標(biāo)準(zhǔn)）。三種方法其血細(xì)胞比容和血紅蛋白的差異均不具統(tǒng)計學(xué)意義，說明三種方法的操作差異對這兩項指標(biāo)沒有顯著影響。

從表2可以看到，方法3制備的三個規(guī)格紅細(xì)胞容量均值最接近我中心定的標(biāo)示量，但從標(biāo)準(zhǔn)差看，除2U紅細(xì)胞最小外，1.5U和1U紅細(xì)胞都最大，提示方法3中對儀器設(shè)置的1.5U和1U方案壓板推進(jìn)速度和血漿定量可能還需改進(jìn)，如何改進(jìn)待后研究分析。三種方法制備三種規(guī)格紅細(xì)胞的容量差異均具統(tǒng)計學(xué)意義，方法3與方法2的容量差異也均具統(tǒng)計學(xué)意義，結(jié)合方法3容量均值最接近標(biāo)示量，說明方法3的改進(jìn)對紅細(xì)胞容量的標(biāo)準(zhǔn)化是有效的，而有效性可能體現(xiàn)在儀器的設(shè)置上。同樣，除制備2U紅細(xì)胞外，制備1.5U和1U紅細(xì)胞所得容量比較，方法1和方法2，方法1和方法3的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，也說明手工法和儀器法制備紅細(xì)胞容量標(biāo)準(zhǔn)化的差異不明顯。

綜上所述，使用三種方法對全血進(jìn)行分離制備，制備出的紅細(xì)胞產(chǎn)品質(zhì)量均符合國家標(biāo)準(zhǔn)。三種方法制備紅細(xì)胞血比容和血紅蛋白含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但方法3對紅細(xì)胞的破壞大于方法1和2，其儲末溶大于方法1和2。三種方法制備紅細(xì)胞容量差異有統(tǒng)計學(xué)意義，方法3對紅細(xì)胞容量標(biāo)準(zhǔn)化的影響是有效的，其有效性體現(xiàn)在儀器設(shè)置上。但手工法（方法1）和儀器法（方法2和3）制備的紅細(xì)胞容量差異不明顯。

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R457.1+2

A

1674-1129（2016）05-0684-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.05.052

2016-04-27；

2016-07-05）

江西衛(wèi)生和計劃生育委員會課題（20155618）