李麗平，彭小華，楊 堃，吳青蓮

（1、新余市中心血站，江西新余338000；2、新余市渝水區(qū)珠珊衛(wèi)生院，江西新余338033）

免疫反應(yīng)性或血型錯誤標(biāo)本血辮檢測的重要性

李麗平1，彭小華1，楊 堃1，吳青蓮2

（1、新余市中心血站，江西新余338000；2、新余市渝水區(qū)珠珊衛(wèi)生院，江西新余338033）

目的探討無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本免疫反應(yīng)性或血型錯誤時血辮檢測的重要性。方法取新余市中心血站2012年4月1日至2016年3月31日無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本34880例，對標(biāo)本進(jìn)行免疫四項、ALT和血型的檢測，對免疫陰性和單試劑陽性標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測，同時對免疫反應(yīng)性標(biāo)本、血型初篩錯誤標(biāo)本和核酸拆分陽性標(biāo)本取相對應(yīng)的血辮再檢。結(jié)果HBsAg雙試劑陽性379例，單試劑陽性30例，抗HCV雙試劑陽性54例，單試劑陽性16例，抗TP雙試劑陽性133例，單試劑陽性11例，抗HIV雙試劑陽性4例，單試劑陽性19例，核酸HBV-DNA陽性55例，取相對應(yīng)的血辮再檢結(jié)果與試管結(jié)果相符。ABO血型初篩錯誤113例，取相對應(yīng)的血辮鑒定，有4例血辮血型與試管血型不相符。結(jié)論當(dāng)血液標(biāo)本免疫反應(yīng)性或血型錯誤時應(yīng)取相對應(yīng)的血辮進(jìn)行再檢，確保試管標(biāo)本與血辮同源，避免標(biāo)本原因?qū)е碌腻e誤結(jié)果被利用。

血辮；免疫四項；ABO血型；再檢

按《血站實驗室質(zhì)量管理規(guī)范》和《血站技術(shù)操作規(guī)程》（2015版）要求對血液標(biāo)本進(jìn)行谷丙轉(zhuǎn)氨酶、HBsAg、抗HCV、抗TP、抗HIV和血型的檢測，對初次反應(yīng)性標(biāo)本或血型錯誤標(biāo)本取相對應(yīng)的血辮進(jìn)行再檢。血液初次檢測往往受到諸多因素的影響，所以對初次反應(yīng)性標(biāo)本再檢是非常必要的，特別是取試管標(biāo)本相對應(yīng)的血辮再檢，它既可以去除操作和標(biāo)本因素的影響，如孔間相互污染、洗板不徹底、標(biāo)本分離不完全、標(biāo)本溶血等，減少血液資源浪費，使獻(xiàn)血者的利益得到保護(hù)，又可以發(fā)現(xiàn)標(biāo)本是否留樣錯誤，防止不合格血液被利用，保障輸血安全。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源與處理2012年4月1日至2016年3月31日本站共采集血液標(biāo)本3488例，留取2管標(biāo)本，其中一管（帶分離膠EDTA-K2抗凝）用于核酸檢測，另一管（EDTA-K2抗凝）用于血清學(xué)檢測。在2℃～8℃冰箱保存，4h內(nèi)離心。

1.2 儀器Uranus-AE-100全自動酶免分析儀（深圳愛康電子公司）；上海浩源血液核酸篩查平臺：Hamil-ton STAR全自動混樣儀（瑞士哈美頓公司）、Ezbead System-32提取儀（美國Texas BioGene公司）、7500型實時熒光定量PCR擴(kuò)增儀（美國ABI公司）。

1.3 試劑免疫試劑由廈門新創(chuàng)、北京萬泰兩個廠家提供，核酸檢測試劑由上海浩源生物科技有限公司提供，ALT試劑由深圳邁瑞和長春匯力提供，ABO血型試劑由上海血液生物提供。

1.4 方法用兩種ELISA法試劑進(jìn)行免疫四項的檢測，結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：S/CO≥1為陽性，0.8≤S/CO＜1為灰區(qū)，S/CO＜0.8為陰性，對雙試劑陽性標(biāo)本、單試劑陽性標(biāo)本取相對應(yīng)的血液辮子和試管標(biāo)本進(jìn)行平行檢測，再檢血液辮子和試管標(biāo)本結(jié)果S/ CO≥0.8時該標(biāo)本判為陽性，S/CO＜0.8判斷為陰性，對單試劑陽性標(biāo)本和陰性標(biāo)本進(jìn)行核酸（定性）檢測，并對拆分陽性的標(biāo)本進(jìn)行血辮確認(rèn)，核酸結(jié)果判定：Ct＞45為陰性，Ct≤45為陽性。用兩個廠家的試劑進(jìn)行ALT檢測，結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)為：ALT＞50U/L為異常，ALT≤50U/L為正常。實驗室對標(biāo)本做ABO正、反鑒定和Rh鑒定，對初篩血型和鑒定不符標(biāo)本取血辮進(jìn)行鑒定。

2 結(jié)果

2.1 試管及血辮檢測結(jié)果2012年4月1日至2016年3月31日本站共采集無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本34880例，HBsAg陽性379例，單試劑陽性30例，抗HCV雙試劑陽性54例，單試劑陽性16例，抗TP雙試劑陽性133例，單試劑陽性11例，抗HIV雙試劑陽性4例，單試劑陽性19例，HBVDNA陽性55例，血辮結(jié)果與試管結(jié)果相符，結(jié)果見表1。

2.2 血型錯誤標(biāo)本血辮復(fù)定結(jié)果血型初篩錯誤113例，其中109例試管血型與血辮血型相符，4例試管血型與血辮血型不相符，結(jié)果見表2。

表1 免疫四項反應(yīng)性和核酸拆分陽性標(biāo)本血辮確認(rèn)結(jié)果

表2 ABO血型試管鑒定結(jié)果與血辮鑒定結(jié)果

3 討論

表1中免疫四項陽性標(biāo)本試管與血辮結(jié)果相符，HBV-DNA陽性標(biāo)本試管與血辮結(jié)果均為陽性，表2中A型與B型各有1例鑒定結(jié)果試管與血辮不符，O型有2例鑒定結(jié)果試管與血辮不符，通過再檢、調(diào)查及問詢采血者發(fā)現(xiàn)2例為標(biāo)本留錯，2例為標(biāo)簽血型劃錯，這四例血型鑒定試管與血辮不符主要是人為造成。如果沒有對陽性標(biāo)本或血型錯誤標(biāo)本取血辮再檢，而直接用原試管再檢的話，就可能有錯誤結(jié)果被利用，造成嚴(yán)重的后果，因此建立血辮再檢程序不僅可以減少血液資源的浪費［1，2］，還可以追溯標(biāo)本的同源性［3］，防止不合格血液的應(yīng)用。

《血站實驗室質(zhì)量管理規(guī)范》中13.5條款要求，建立初次反應(yīng)性標(biāo)本進(jìn)一步復(fù)檢的程序和結(jié)果判定規(guī)則［4］，該條款沒有明確采取什么樣的進(jìn)一步復(fù)檢程序。2015版《血站技術(shù)操作規(guī)程》4.10.1血清學(xué)檢測結(jié)果的判定，初次試驗為有反應(yīng)性的檢測標(biāo)本的后續(xù)處理有2種選擇［5］，其提供了兩個方案，這兩個方案都存在缺陷，方案1中以原血樣（或血辮）進(jìn)行雙孔復(fù)試，其雙孔復(fù)檢結(jié)果為最終結(jié)果，如果只選擇以原血樣（即試管標(biāo)本）再檢或血辮再檢，可以避免初次檢測所造成的假陽性反應(yīng)［6］，并不能確認(rèn)試管標(biāo)本與血袋是否為同一個人。方案2中不做重復(fù)試驗，初次試驗結(jié)論為檢測最終結(jié)論，不但存在試管與血袋不一致的問題，還存在假陽性問題。所以再檢時取血辮與試管進(jìn)行兩孔平行試驗，既可以避免假陽性反應(yīng)導(dǎo)致的血液浪費，又可以溯源至血袋，確保標(biāo)本與血袋的一致性［7-9］。

除建立血辮平行再檢程序外，還應(yīng)重視血液標(biāo)本的采集、留取［10］。《血站質(zhì)量管理規(guī)范》中13.9條款、13.11條款和13.12條款均有血液標(biāo)本的內(nèi)容［11］，應(yīng)明確留取標(biāo)本時怎樣防止張冠李戴的現(xiàn)象，如采集標(biāo)本前讀獻(xiàn)血者的姓名，看是否與捐獻(xiàn)者一致，同時要注意一次只能采集一個人，特殊情況下需要一次采集兩個人時應(yīng)特別注意必須采集兩個不同血型的人，即使留樣錯誤也會通過血型鑒定而被發(fā)現(xiàn)。

輸血安全面臨的主要風(fēng)險之一就是被篩查病毒的“窗口期”問題，雖然核酸檢測的應(yīng)用可以縮短“窗口期”［12］，但血液標(biāo)本的錯誤導(dǎo)致檢測結(jié)果的錯誤，一旦錯誤結(jié)果被利用，將增加輸血風(fēng)險。除了建立符合規(guī)范要求的，具有可操作性、追溯性和一致性的操作規(guī)程，還應(yīng)加強人員操作和質(zhì)量意識的培訓(xùn)，確保標(biāo)本來自相對應(yīng)的血袋，保障血液安全。

［1］贠中橋，呂云來，陳善華，肖鯤等.血液初檢、復(fù)檢及再檢結(jié)果的符合性研究［J］.中國輸血雜志，2009，22（1）：38-39.

［2］楊勇毅，魏山儀.血液不合格率與初次反應(yīng)性標(biāo)本的再檢［J］.中國輸血雜志，2008，21（11）：869-870.

［3］賀凌云，禹曉彬.淺談初次反應(yīng)性標(biāo)本進(jìn)一步復(fù)檢模式［J］.實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2011，29（5）：528-529.

［4］中華人民共和國衛(wèi)生部.血站實驗室質(zhì)量管理規(guī)范，衛(wèi)醫(yī)發(fā)［2006］183號.

［5］中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司，血站技術(shù)操作規(guī)程（2015版）.北京，人民衛(wèi)生出版社.

［6］譚立明.ELISA法檢測的影響因素及其對策［J］.實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2013，31（4）：300-305.

［7］張琦，宋賀欣.血站血液檢測模式與血液安全性探討［J］.中國誤診學(xué)雜志，2007，7（20）：4776.

［8］劉芳，尹建平，吳玲.ELISA法檢測試管標(biāo)本與血辮標(biāo)本結(jié)果分析［J］.中國輸血雜志，2010，23（8）：632-633.

［9］姚勇，袁兵.建立試管標(biāo)本與血辮標(biāo)本中陽性平行再檢程序的必要性［J］.中國輸血雜志，2009，22（12）：1025-1026.

［10］高杰.檢驗科應(yīng)重視分析前標(biāo)本因素對檢驗結(jié)果的影響［J］.實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2012，30（5）：461-462.

［11］中華人民共和國衛(wèi)生部.血站質(zhì)量管理規(guī)范.衛(wèi)醫(yī)發(fā)〔2006〕167號.

［12］Meng Q，Wong C，Rangachari A，et al.Automated Multiplex Assay System for Simultaneous Detection of Hepatitis B Virus DNA，Hepatitis C Virus RNA，and Human Immunodeficiency Virus Type 1RNA［J］.J Clin Microbiol，2001，39：2937-2945.

R457.1+1，R446.62

A

1674-1129（2016）05-0690-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.05.055

2016-05-19；

2016-07-07）